携带报告基因EGFP的CXCR4 RNA干扰质粒的构建及生物活性的鉴定

目的构建携带报告基因EGFP的CXCR4RNA干扰质粒,证实其高效抑制靶基因表达的生物活性。方法设计有发夹状结构的两条DNA序列,用PCR扩增CXCR4特异性小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGensil-1质粒,转化DH5a菌株,提取质粒行酶切及测序鉴定。重组质粒转染PC-3m细胞株,检测绿色荧光蛋白表达及对细胞CXCR4表达的抑制情况。结果成功构建了CXCR4靶向的RNA干扰质粒pGensil-1/siCXCR4,在靶细胞可同时表达siRNA及绿色荧光蛋白。结论pGensil-1/siCXCR4质粒的成功构建对利用基因干扰技术治疗前列腺癌转移方面的研究奠定了一定的实验基础。     

膀胱癌组织中X-染色体连接的凋亡抑制蛋白表达及其对化疗敏感性的影响

目的探讨X-染色体连接的凋亡抑制蛋白(XIAP)在膀胱癌组织中的表达及其对化疗敏感性的影响。方法采用免疫组织化学方法检测6例正常膀胱黏膜上皮组织、47例膀胱移行细胞癌组织中XIAP的表达。脂质体方法介导XIAP基因转染膀胱癌T24细胞,通过G418进行稳定筛选。逆转录聚合酶链反应检测转染前后T24细胞内XIAP的表达。分别采用0．005 mg/ml、0．05 mg/ml低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动,MTT比色分析检测癌细胞生长活性,3’末端脱氧核苷酰转移酶介导生物素标记法检测细胞凋亡率。结果膀胱癌组织中XIAP呈中度阳性表达,阳性率78．7%,其阳性率与肿瘤分级和分期无关(P＞0．05)。转染XIAP后T24细胞高表达XIAP,与未转染XIAP组比较,XIAP mRNA表达增高3．8倍。0．005 mg/ml丝裂霉素作用下转染组细胞生存率较对照组上升(11．60±0．25)%、凋亡率下降(10．1±0．2)%(P＜0．05)。0．05 mg/ml丝裂霉素作用下转染组细胞生存率较对照组上升(16．51±0．87)%、凋亡率下降(11．9±0．2)%(P＜0．05)。结论XIAP在人类膀胱癌中呈中高度表达,XIAP表达升高可明显降低化疗药物诱导的膀胱癌细胞凋亡,提示其可能影响化疗的敏感性。     

The Relationship of Expression of bcl-2, p53, and Proliferating Cell Nuclear Antigen （PCNA） to Cell Proliferation and Apoptosis in Renal Cell Carcinoma

To investigate the relationship of bcl-2, p53, proliferating cell nuclear antigen (PCNA) to cell proliferation, apoptosis and pathological parameters, the patterns of cell growth and turnover in renal cell carcinoma (RCC), formalin-fixed and paraffin-embedded tissue blocks from 34 patients with RCC were examined. Cell proliferation activity was detected by PCNA immunostaining and the proliferation index (PI) was expressed as a percentage of the PCNA-positive cells in the tumor cells. Apoptosis was detected by terminal deoxy- nucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL), and the apoptotic index (AI) was expressed as a percentage of the TUNEL-positive cells in the tumor cells. Expressions of bcl-2 and pS3 were assessed immunohistochemically. Our results showed that the PI ranged from 6.0 % to 24.0 % (median 12.3 %) and the AI from 2.0 % to 8.0 % (median 5.4 ~) in RCC. The expression of the bcl-2 protein was demonstrated in 15 cases (44. 1%); the expression of the p53 protein, however, was seen in only 3 case. bcl-2 positivity was not associated with PI or AI or any pathological parameters. There were close associations between PI and tumor grade and stage, and a significant relationship between AI and the tumor grade of RCC. Our study suggests that bcl-2 positivity was not associated with PI or AI or any pathological parameters. There are close associations between PI and AI and tumor grade and stage of RCC. Active cell proliferation may be accompanied by frequent apoptosis in RCC.     

膀胱移行细胞癌复发风险多因素分析

目的：探讨与膀胱移行细胞癌复发时间相关的显著性因素，建立预测复发的数学模型。方法：应用Cox比例风险模型和Logistic线性回归方法对212例行手术治疗的膀胱移行细胞癌的临床表现、治疗、病理特点等方面16项指标与复发时间进行统计分析。结果：区域淋巴结转移是与复发时间相关的最显著因素，相对危险(Hr)为6．6，其次为多发性肿瘤(Hr=2．255)、三角区及膀胱颈肿瘤(Hr=2．053)、病理分期(Hr=2．057)、病理分级(Hr=1．569)；膀胱灌注治疗(Hr=0．559)和血尿程度(Hr=0.762)为保护性因素。据此建立影响膀胱癌术后复发的预测方程：PI=0．81305X4 0．71935X6(1) 0．36979X7 0．4507X8 0．72117X9 1．887llX10 (-0．58079)X14 (-0．2713)X15。代入原始数据，计算预测值，并将预测结果与实际结果比较，其灵敏度、特异度、及符合率分别为83．5％、67．6％、80．1％，两者基本相符。结论：根据上述模型可对移行细胞癌患者的预后做出较为准确的评价。     

反义PCNA联合wt-p53基因转染抑制膀胱癌细胞生长的实验研究

我们通过共转染方法观察了反义增殖细胞核抗原 (PCNA)联合野生型 p5 3(wt p5 3)基因对膀胱癌EJ细胞体外生长活性的抑制作用及其分子机制 ,现报告如下。材料与方法　PCNA反义表达载体pLAPSN和 pcDNA wt p5 3由本室常规保存。设置正常对照组、反义PCNA转染组、wt p5 3转染组、反义PCNA +wt p5 3转染组。参照脂质体lipofectamine 2 0 0 2说明书进行基因转染。细胞生长活性检测采用细胞计数法[1] 。DNA合成速率检测采用3 H TdR掺入法[1] 。细胞周期时相分析 :参照文献 [1]进行。基因表达检测采用RT PCR法[2 ] 。细胞凋亡检测采用…     

高表达Omi/HtrA2对PED/PEA-15表达缺陷前列腺癌细胞凋亡的影响

我们通过载体构建、转染和筛选，建立PED／PEA-15表达缺陷的前列腺癌亚克隆细胞系，探讨Omi／HtrA2与PED／PEA-15间的作用对前列腺癌细胞凋亡的影响，以阐明前列腺癌细胞凋亡机制。[第一段]     

芹黄素提高胸苷激酶基因系统治疗前列腺癌疗效的研究

目的　观察芹黄素 (apigenin)对前列腺癌 (PC)细胞PC 3m生长的影响及其对单纯疱疹胸苷激酶 /更昔洛韦 (HSV tk/GCV)系统“旁观者效应”的调控 ,寻求增强该系统对PCa疗效的途径。方法　四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 )检测 1、10、10 0 μmol/Lapigenin对PC 3m细胞生长的影响 ,观察 10 μmol/Lapigenin预处理后GCV对tk基因阳性 (tk+ )比例为 10 %和 5 %的混合细胞的杀伤作用及 18 α 甘草次酸 ( 18 α glycyrrhetinicacidAGA)对其影响 ,并检测apigenin联合GCV的杀伤效应。结果　Apigenin可抑制PCa细胞增殖 ,呈时间和剂量依赖关系 (P <0 .0 5 0 ) ;低浓度( 10 μmol/L) apigenin预处理对PC 3m细胞增殖无影响但可使“旁观者效应”明显增强 (P <0 .0 0 1) ,10 μmol/L和 10 0 μmol/LGCV对tk+ 为 10 %细胞的杀伤率由 ( 16.15± 1.64 ) %和 ( 2 3 .46± 3 .2 1) %提高到 ( 4 5 .89± 3 .2 8) %和 ( 5 9.86± 2 .44 ) % ,该作用可被AGA抵消。联合应用apigenin和GCV后杀伤率更为显著 ,达 ( 62 .5 8± 4.2 9) %和 ( 83 .16± 3 .72 ) %。结论　Apigenin不仅可以直接杀伤PC细胞 ,还可通过增强HSV tk/GCV系统“旁观者效应” ,发挥间接杀瘤效应 ,从而提高该系统治疗PC疗效。     

经尿道前列腺切除术后患者再次入院的诊治分析

目的探讨经尿道前列腺切除术（TURP）后患者再入院的原因和治疗方法。方法采用回顾性的临床研究方法,分析2004年5月至2011年3月良性前列腺增生（BPH）患者行TURP后再次入院的比率、原因和治疗方法。结果 1604例前列腺电切术后再入院93例,约占接受手术治疗者的5.8%,平均再入院时间17个月。其中膀胱颈疤痕狭窄18例,行膀胱镜下疤痕切除术;腺体复发42例,行再次TURP术;反复肉眼血尿并急性尿潴留17例,均在膀胱镜下行血块清除术;尿道狭窄16例,11例行尿道镜下冷刀内切开,5例行尿道外口切开术,术后联合定期尿道扩张治愈。结论 BPH患者行TURP后再次入院的比率为5.8%,腺体复发是TURP术后再入院的主要原因。术前准确诊断、合理选择手术方式及术中、术后正确处理是预防TURP术后再次入院的关键。     

结直肠癌患者血浆K-ras基因突变情况分析

采用直接测序法检测42例结直肠癌患者血浆、肿瘤组织及20例正常人血浆中K-ras基因突变情况。结果42例结直肠癌患者血浆K-ras基因突变17例（40.48%）,肿瘤组织K-ras基因突变19例（45.24%）。对照组无血浆K-ras基因突变。认为K-ras基因突变发生于结直肠癌早期。检测血浆K-ras基因突变可作为结直肠癌的辅助诊断方法。     

UpIb启动子-Smac重组体促膀胱癌细胞凋亡的实验动物研究

目的: 探讨携带Smac基因的膀胱癌细胞特异性表达质粒pcDNA3.1-UpIb promoter-Smac用脂质体包裹后注射到实验动物瘤体内的表达及促癌细胞凋亡的效应。 方法: 将人膀胱癌细胞株BIU-87注射到Balb/c-nu/nu雄性裸鼠的皮下,构建膀胱癌皮下移植瘤模型。当移植瘤长至直径约0.5cm时,用脂质体将pcDNA3.1-UpIb promoter-Smac包裹后隔天1次连续3次注射到瘤体内,间隔1天后,连续3天瘤体内注射适量丝裂霉素C诱导凋亡。设三组对照:单用脂质体质粒组、单用丝裂霉素C组和空白组。RT-PCR检测瘤组织Smac mRNA的表达,免疫组织化学法检测瘤组织Smac蛋白的表达,苏木素伊红染色镜检、DNA Ladder带凝胶电泳分析和TUNEL-荧光标记检测观察瘤组织癌细胞的凋亡情况。 结果: 膀胱癌裸鼠移植瘤模型构建成功。瘤体内注射脂质体包裹的pcDNA3.1-UpIbpro-moter-Smac后,与未注射脂质体质粒的对照组比较,Smac的表达增强约2.1倍;先注射脂质体质粒后丝裂霉素C处理和单用丝裂霉素C处理的瘤组织均可见典型的凋亡细胞,但前者的凋亡率为49.8%,显著高于后者的23.5%(P<0.01)。 结论: 膀胱癌裸鼠移植瘤模型瘤体内直接注射脂质体包裹的pcDNA3.1-UpIb promoter-Smac后,所携带的Smac基因能够在瘤组织中有效表达,并对丝裂霉素C诱导的瘤细胞凋亡有显著的促进作用。该质粒配合丝裂霉素C等凋亡诱导药物的应用,可望为膀胱癌的靶向基因治疗提供一新的治疗模式。