增强型绿色荧光蛋白标记技术示踪组织工程化骨形成

目的:观察以脂质体介导法转染的增强型绿色荧光蛋白质粒作为骨组织工程种子细胞示踪剂的可行性。方法:实验于2005-07/2006-11在南昌大学第二附属医院分子医学实验室完成。选取12个月龄中国青山羊2只作为骨髓基质干细胞供体。另取BACB/un裸鼠9只作为骨髓基质干细胞-珊瑚复合物受体。①将已转化pEGFP-N2大肠杆菌109菌种,进行质粒提取并经AvaⅡ酶切鉴定。②脂质体lipofectamine2000介导转染羊骨髓基质干细胞。分别于转染24h、6个月后计算荧光的转染效率。标记与未标记细胞经成骨诱导分化后,检测碱性磷酸酶活性和四环素钙结节染色,以未标记的同期细胞作对照。③将标记细胞接种于珊瑚支架,形成骨髓基质干细胞-珊瑚复合物,分别于体外培养4,7,14d后进行电镜扫描观察。④将体外培养7d的骨髓基质干细胞-珊瑚复合物移植于裸鼠皮下,8周后取出,荧光显微镜下进行示踪观察,苏木精-伊红染色观察组织结构。以未标记的骨髓基质干细胞-珊瑚复合物、单纯珊瑚作对照。结果:共纳入中国青山羊2只,BACB/un裸鼠9只,作为受体的9只裸鼠进入结果分析。①质粒经酶切后电泳,可见3条带,分别为445bp,1938bp,2354bp,确定所提质粒为pEGFP-N2。②转染24h后绿色荧光表达率35%;经G418筛选,转染6个月后绿色荧光表达率75%;与对照组相比,标记细胞碱性磷酸酶活性差异无统计学意义(P>0.05),均具有钙结节形成能力。③标记细胞与材料贴附生长良好,并分泌胶原纤维及钙盐结晶样基质。④组织学示新生骨样组织围绕材料孔隙生成;新生组织细胞内有绿色荧光表达,同时对照组未观察到绿色荧光。结论:脂质体介导法转染的pEGFP-N2标记骨髓基质干细胞,可用于裸鼠体内示踪,是一种理想的组织工程化骨组织的示踪方法。     

依达拉奉防治冠脉介入术前后对比剂肾病的临床研究

目的：探讨依达拉奉在冠脉介入术前后对比剂肾病中的防治作用。方法：将150例行冠状动脉介入术诊断及治疗的患者随机分为依达拉奉组（75例）及对照组（75例）,在全部采用水化治疗基础上,依达拉奉组在冠脉介入术当日开始给予依达拉奉30mg稀释后30min滴完,1次/12h,连续5d。观察术前、术后血清肌酐（Scr）、内生肌酐清除率（Cer）,血β2-微球蛋白（β2-M）、丙二醛（MDA）的含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性改变情况。结果：术后第1d、3d、5d,两组Cer与术前相比明显下降,Scr、β2-M分别与术前比较均明显升高（P〈0.05）。组间比较,对照组Cer较依达拉奉组低,差异有统计学意义,而Scr、β2-M明显升高（P〈0.05）。术后第1d、3d、5d依达拉奉组MDA含量较对照组明显降低（P〈0.05）,而SOD活性显著增加（P〈0.05）。结论：冠脉介入术前后使用依达拉奉可能有助于减少对比剂肾病的发生,机制可能与清除氧自由基有关。     

静磁场作用下金属离子对成骨细胞的毒性

背景：体内体外实验研究证明,静磁场具有促进成骨细胞分化及骨形成的作用。目的：观察静磁场作用下金属离子对成骨细胞毒性的影响。方法：将CoCl2粉末与CrCl3粉末溶于无菌注射用水配制成CoCl2溶液和CrCl3溶液,将金属离子Co2＋、Cr3＋分别与小鼠颅骨成骨细胞（MC3T3-E1）在不同的磁场强度（1,10,100mT）下共培养。实验分4组：设Co2＋＋Cr3＋组（对照组）和Co2＋＋Cr3＋分别＋1,10,100mT组。结果与结论：恒磁场作用下的成骨细胞呈现更加成熟的形态学特征,Co2＋、Cr3＋金属离子对成骨细胞MC3T3的毒性明显降低;同时G2M（分裂期）分布比例明显增加,细胞停滞在G0G1（休眠期）的比率明显减少;与对照组相比,不同场强磁场加载后,成骨细胞碱性磷酸酶活性明显增强（P〈0.05）。提示一定强度的静磁场可拮抗Co2＋、Cr3＋金属离子对成骨细胞的毒性作用。     

静磁场作用下金属离子对成骨细胞的毒性

背景：体内体外实验研究证明,静磁场具有促进成骨细胞分化及骨形成的作用。 目的：观察静磁场作用下金属离子对成骨细胞毒性的影响。 方法：将CoCl2粉末与CrCl3粉末溶于无菌注射用水配制成CoCl2溶液和CrCl3溶液,将金属离子Co2+、Cr3+分别与小鼠颅骨成骨细胞(MC3T3-E1)在不同的磁场强度(1,10,100 mT)下共培养。实验分4组：设Co2++Cr3+组(对照组)和Co2++Cr3+ 分别+1,10,100 mT组。 结果与结论：恒磁场作用下的成骨细胞呈现更加成熟的形态学特征,Co2+、Cr3+金属离子对成骨细胞MC3T3的毒性明显降低;同时G2M(分裂期)分布比例明显增加,细胞停滞在G0G1(休眠期)的比率明显减少;与对照组相比,不同场强磁场加载后,成骨细胞碱性磷酸酶活性明显增强(P < 0.05)。提示一定强度的静磁场可拮抗Co2+、Cr3+金属离子对成骨细胞的毒性作用。     

金属人工髋关节磨损机制及并发症研究进展

金属人工髋关节的磨损率较低,在临床髋关节置换术中得到广泛应用,但术后感染、骨溶解等是亟待解决的难题.目前对金属人工关节释放金属离子导致感染、骨溶解的研究已有很大进展,对金属离子进入体内各种影响也有进一步认识.该文就金属人工髋关节磨损与松动、金属离子产生机制及相关并发症作一综述.     

脊髓型颈椎后纵韧带骨化症的手术治疗

[目的]比较分析不同手术入路治疗脊髓型颈椎后纵韧带骨化症的疗效及并发症.[方法]回顾性分析本院自2005年1月～2009年3月56例脊髓型颈椎后纵韧带骨化症患者的手术人路、手术方式、手术时间、出血量、手术疗效及其并发症.[结果]56例患者随访20个月～6年,平均3.8年;前路手术25例,手术时间为(220.00±35.82)min,术中出血量为(280.00±127.48)ml,术前JOA评分8.36±1.41,术后JOA评分13.52±2.00,改善率为61.92％±16.46％,并发症发生7例;后路手术21例,手术时间为(118.57±22.20)min,术中出血量为(414.29±200.71)ml,术前JOA评分8.23±1.67,术后JOA评分13.19±1.97,改善率为58.57％±15.36％,并发症发生5例;前后联合手术10例,手术时间为(309.00±51.09)min,术中出血量为(760.00±337.30)ml,术前JOA评分7.40±1.07,术后JOA评分13.70±1.64,改善率为66.60％±13.29％,并发症发生3例;三组病例术中出血量、手术时间行组间比较有显著性差异(P＜0.05),但三组术前JOA评分、术后JOA评分、术后改善率、手术并发症发生例数行组间比较无显著性差异(P＞0.05).[结论]脊髓型颈椎后纵韧带骨化症前、后路或前后联合入路手术疗效均良好,手术并发症发生率均比较高,因此脊髓型颈椎后纵韧带骨化症的手术入路选择,除了要全面考虑患者病情,同时必须兼顾自身技术特点及条件,只要能够安全地对脊髓进行充分减压,维持或重建颈椎的稳定性,三种治疗方案均是可以选择的治疗手段,但前后联合人路手术时间长、出血量大,宜慎重.     

RNAi沉默Notch1基因对人骨肉瘤细胞MG63的促凋亡作用

目的采用RNA干扰(RNAi)技术抑制Notch1基因的表达,观察阻断Notch信号通路对人骨肉瘤细胞MG63的促凋亡作用及其机制。方法构建mNotch-1短发夹状RNA(mNotch-1 shRNA),利用MTT增殖试验分析mNotch-1 shRNA转染前及转染24、48、72 h时MG63细胞的增殖情况;通过Annexin V法染色和流式细胞术检测细胞凋亡率及与mNotch-1 shRNA作用时间的关系;Western blot检测细胞中Notch1、Bcl-2及Bax蛋白表达的变化。结果与对照组相比,mNotch-1 shRNA转染MG63细胞后,细胞增殖水平明显下降。Annexin V染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高。Western blot结果分析显示mNotch-1 shRNA转染MG63细胞后,细胞中Notch1基因表达明显降低,并且显著抑制Bcl-2基因和上调Bax基因的表达。结论 RNAi沉默Notch1基因能明显抑制人MG63细胞增殖,促进细胞凋亡;其作用机制可能与调控Bcl-2及Bax蛋白表达有关。     

缝合锚钉技术治疗膝关节周围撕脱性骨折

目的探讨缝合锚钉技术治疗膝关节周围撕脱性骨折的方法和临床效果。方法对37例膝关节周围撕脱性骨折患者采用Twinfix带线锚钉治疗,其中髌骨下极撕脱性骨折18例,股骨内髁撕脱性骨折13例,股骨外髁撕脱性骨折6例。评估术后膝关节HSS功能评分及膝关节活动度,随访X线检查结果。结果所有患者均获得随访,随访时间12～48个月,平均19.3个月。术后6个月随访摄X线片显示撕脱性骨折均获得骨性愈合;HSS膝关节功能评分(86.5±4.3)分,优28例,良7例,中2例,优良率94.95%;无韧带松弛不稳及其他并发症,功能明显改善。结论采用缝合锚钉技术治疗膝关节周围撕脱性骨折具有固定可靠、有助于关节功能恢复,且不需要二次手术的优点。     

血管内皮生长因子在磨损颗粒诱导骨溶解中的作用研究

运用小鼠植骨气囊模型,观察局部注射血管内皮生长因子(VEGF)及VEGF抑制剂bevacizumab对磨损颗粒诱导骨溶解的影响,进一步探讨VEGF在人工关节无菌性松动中的作用。方法将40只小鼠按随机数字表法分成空白对照组、颗粒组、VEGF刺激组、VEGF抑制组,每组10只。在小鼠背部皮下注射无菌空气形成气囊,继而将近交系小鼠(10只)颅骨片植入气囊。在颗粒组、VEGF刺激组、VEGF抑制组小鼠气囊内注入磨损颗粒,空白对照组则注入PBS。气囊植骨后隔天分别在VEGF刺激组和VEGF抑制组小鼠气囊内注入重组人血管内皮生长因子(rh-VEGF)和bevacizumab进行干扰,颗粒组和空白对照组则注入生理盐水。植骨2周后取囊壁和植入颅骨组织进行HE染色检测炎症反应情况及骨片吸收情况;采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞的分化成熟情况;取组织匀浆液应用ELISA方法检测炎性细胞因子IL-1β、TNF-α浓度;qRT-PCR进一步检测炎性细胞因子IL-1β、TNF-αmRNA表达水平。结果磨损颗粒诱导囊壁产生明显炎症反应及骨溶解。颗粒组囊壁厚度、细胞密度及TNF-α、IL-1β等炎性因子表达均较空白对照组明显增加(均P<0.05),局部注射VEGF进一步促进磨损颗粒诱导囊壁产生炎症反应及骨溶解,而bevacizumab则使囊壁炎症反应及骨溶解受到了明显抑制。结论磨损颗粒在体内可以诱导VEGF的表达,而VEGF抑制剂可抑制其诱导的炎症反应及骨溶解。