人精子特异性乳酸脱氢酶在大肠杆菌中的表达及其初步应用

目的 构建人精子特异性乳酸脱氢酶(hLDH-CA)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达,将重组hLDH-CA应用于抗精子抗体(ASA)的检测.方法 以人睾丸TripIEx cDNA文库为模板,PCR扩增hLDH-CA编码序列.PCR产物经Hind Ⅲ-Xho I酶切后,克隆至表达载体pET-28a(+)中,在E.coli BL21(DE3)中诱导His-Tag融合的重组蛋白表达.用免疫印迹、酶活性测定等方法鉴定表达产物.以纯化的重组hLDH-CA为基质,建立检测ASA的ELISA方法.结果 构建了hLDH-C4原核表达载体pET-28a(+).hLDHC.在IPTG的诱导下,重组菌可高效表达相对分子质量35 000的产物,与预期大小相符.免疫印迹显示,重组蛋白可被抗His-Tag单克隆抗体和兔抗人LDH-C4抗体识别.重组菌在IPTG诱导后,其裂菌液的乳酸脱氢酶活性是诱导前的11.2倍.用基于hLDH-C4抗原的间接ELISA法,在一组不育症患者中检测血清抗hLDH-CA抗体,阳性率达30.51%.结论 成功地克隆了hLDH-C4编码序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效的表达,重组hLDH-C4在ASA检测中得到初步应用.     

X-连锁肾上腺脑白质营养不良分子诊断中排除假基因干扰的一个新方法

目的:探讨X-连锁肾上腺脑白质营养不良分子诊断中排除假基因干扰的新方法。方法:应用长链RT-PCR技术扩增3个X-连锁肾上腺脑白质营养不良患者的ABCD1基因编码区全长,再分4个片段进行二次PCR,并对PCR产物直接测序;应用巢式PCR对ABCD1基因相应区域进行扩增,其中第一轮PCR产物覆盖ABCD1基因从外显子6至3′非编码区的一个大片段,并对PCR产物进行测序,分析患者的基因组DNA,进一步确证其ABCD1基因突变。结果:在3个XALD患者的ABCD1基因上,存在3个不同的碱基改变(2235C>T,2065C>T和2190A>T),分别造成2个错义突变(R617C和P560L)和1个无义突变(K602X)。结论:应用巢式PCR能快速、有效地排除X-ALD分子诊断中ABCD1假基因的干扰。     

后腹腔镜保留肾单位肾肿瘤手术

目的：探讨后腹腔镜下保留肾单位治疗肾肿瘤的方法。方法：后腹腔镜下保留肾单位手术治疗肾脏肿瘤患者12例,其中肾细胞癌6例,肾错构瘤6例。肿瘤直径2.0～3.7 cm,平均2.7 cm。结果：12例手术均成功,手术时间60～210 min,平均115 min。术中出血25～150 mL,平均106 mL。肾蒂血流阻断时间18～43 min,平均28 min。术后住院4～7 d,平均5.7 d。6例肾细胞癌术后切缘均为阴性。术后随访6～18个月,平均11.3个月,复查B超及CT未见肿瘤残留及复发,静脉尿路造影（IVU）提示患侧残肾显影良好。结论：后腹腔镜保留肾单位肾肿瘤手术,具有创伤小、出血少、住院时间短以及术后恢复快等优点,是替代开放手术治疗小的肾肿瘤的安全方法。     

慢性阻塞性肺疾病中铁死亡相关特征基因的筛选及中药预测

目的 利用生物信息学分析识别慢性阻塞性肺疾病(COPD)与铁死亡相关的关键基因,并预测可作用于这些靶点的中药。方法 从基因表达数据库(GEO)检索并下载COPD数据集(GSE151052),使用R软件包DESeq2计算筛选差异表达基因(DEG),并进一步进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用WGCNA算法获得DEG关键模块,将关键模块中的基因集与铁死亡数据库(FerrDb v2)中的铁死亡相关基因取交集,得到差异表达的铁死亡相关核心基因(DE-FRG)。最后利用COREMINE数据库对DE-FRG进行中药预测。结果 从COPD患者肺组织中筛选得到16个DE-FRG,功能富集分析显示这些基因主要集中在氧化应激通路;以DE-FRG为靶点预测出丹参、黄芪、五味子、茯苓等48种中药。结论 丹参等中药的相关成分可能通过调控铁死亡相关基因的表达,影响肺组织的细胞铁死亡和炎症反应达到治疗慢性阻塞性肺病的作用。     

登革病毒实验室检测方法及传播影响因素研究进展

登革病毒(DENV)为单股正链RNA病毒,可以引起登革热、登革出血热和登革休克综合征,目前没有特效抗病毒药物和理想疫苗.近年来气候变化和社会因素的影响,使得登革热的发病率逐年上升,给全球传染病防控带来严峻挑战.本文综述了 DENV的病原学、实验室检测方法及传播影响因素三个方面的研究,希望能为登革热的监测、检测和防控提供...     

避孕栓致出血性膀胱炎1例

患者,女,32岁.因"血尿伴尿痛2d"于2005年4月15日入院.患者2天前夜间性生活前误将避孕栓塞入尿道内,性生活后约10min,出现尿道口及下腹疼痛,解肉眼血尿,鲜红色.     

腹腔镜输尿管切开取石术中反折导丝法置放双J管

目的:探讨腹腔镜输尿管切开取石术中反折导丝法置放双J管的方法.方法:对行腹腔镜下输尿管切开取石术32例术中应用白行设计的反折导丝法置入双J管.结果:32例均成功置入双J管,成功完成手术.结论:应用反折导丝法置入双J管简便省时.     

鄂西缬草资源丰富质量达超国际标准

［本刊讯］ 湖北中医学院谭文界副教授等历经１０年,对鄂西的巴东、鹤峰、五峰、利川等县市,进行调查研究发现：湖北西部缬草资源丰富,质量达超国际标准。 缬草为败酱科属多年生草本植物,是医药工业和化学工业的珍贵原料,全球工业性开发缬年已有近百年历史．中国缬草质量如何,是否具有工业储量？谭文界副教授的调研结论是肯定的．以储量居中等水平的巴东县为例,该县年产量在１５～３０吨之间,所采样品经检验各项指标均达到或高出欧亚现行国际标准,功效成分超过英国现行国家标准２倍,高出日本标准１．３倍。研究还证实,湖北缬草具…     

表达白细胞介素-18的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用

目的 观察表达IL-18的溶瘤腺病毒(ZD55-IL18)对裸鼠肾癌移植瘤生长及血管形成的抑制作用.方法 荷肾癌裸鼠随机分4组,每组8只.瘤体内注射ZD55-IL18、溶瘤腺病毒ZD55-EGFP、表达IL-18的增殖缺陷腺病毒Ad-IL18及PBS,每次注射病毒7×108PFU/只,连续注射3 d.注射后第7天,每组处死3只取肿瘤组织,免疫组织化学检测肿瘤E1A、IL-18、CD34、VEGF表达及凋亡.第50天时处死动物测量肿瘤体积.结果 ZD55-IL18、ZD55-EGFP、Ad-IL18及生理盐水处理组肿瘤体积(mm3)分别为:299.7±52.9、536.8±90.3、570.3±99.0、766.1±145.8,ZD55-IL18与各组之间差异有统计学意义(P<0.01).Ad-IL18处理组肿瘤无E1A蛋白表达,ZD55-IL18处理组有大量E1A蛋白表达,表明病毒复制.ZD55-IL18处理组肿瘤IL-18表达及凋亡细胞阳性率均显著高于Ad-IL18处理组.ZD55-IL18处理组肿瘤CD34、VEGF表达均显著低于Ad-IL18处理组.结论 表达IL-18的溶瘤腺病毒ZD55-IL18比增殖缺陷腺病毒Ad-IL18具有更强的抑制肾癌生长及血管形成作用.     

利拉鲁肽诱导骨髓间充质干细胞定向分化及移植治疗1型糖尿病大鼠的研究

目的 体外研究利拉鲁肽诱导骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）分化为胰岛素分泌细胞（IPCs）,并在体内进一步观察IPCs移植对1型糖尿病（T1DM）大鼠的治疗作用.方法 （1）体外采用密度梯度离心联合差壁培养法分离、纯化大鼠BM-MSCs,进一步分为未诱导组、高糖＋尼克酰胺诱导组、胰高血糖素样肽1（GLP-1）诱导组和利拉鲁肽诱导组;（2）倒置显微镜下观察各组细胞形态变化,双硫腙染色鉴定诱导后细胞,荧光定量PCR检测巢蛋白（Nestin）、胰十二指肠同源盒1（PDX-1）、葡萄糖转运蛋白2（Glut-2）、葡萄糖激酶（GK）、胰岛素和胰高血糖素等基因,细胞免疫荧光检测胰岛素和胰高血糖素等蛋白;（3）将180 ～ 220 g的30只雄性SD大鼠以60 mg/kg剂量腹腔注射链脲佐菌素制备T1DM模型,造模成功后按随机数字表法分为对照组（T1DM组,n=8）、未诱导的BM-MSCs移植组（BM-MSCs组,n=9）和经利拉鲁肽诱导的BM-MSCs移植组（LIRA＋ BM-MSCs组,n=9）,给予相应干预8周,待血糖基本稳定后,选取4只正常、同龄、雄性SD大鼠作为对照,行腹腔注射的葡萄糖耐量试验（IPGTT）进一步观察移植后细胞对高糖刺激的反应性.结果 （1）利拉鲁肽诱导后BM-MSCs形态逐渐变圆,呈明显的聚集性生长状态,双硫腙染色为阳性;与高糖＋尼克酰胺诱导组比较,利拉鲁肽诱导组细胞Nestin mRNA表达下调（0.003 8±0.000 4比0.007 5±0.003 0,P＜0.05）,胰岛素（0.000 20±0.000 03比0.000 08±0.000 02）和胰高血糖素（0.001 1±0.0004比0.000 7±0.000 1）等mRNA表达上调（F=7.26、10.06、4.92,均P＜0.05）,PDX-1、Glut-2、GK mRNA表达亦上调;利拉鲁肽诱导组和GLP-1诱导组细胞胰岛素或胰高血糖素蛋白表达均呈阳性.（2）体内实验示,与T1DM组比较,LIRA＋ BM-MSCs组和BM-MSCs组大鼠8周末血糖均明显降低[分别为（28.0±1.2）、（8.9±1.1）、（14.5±0.9）mmol/L,F=719.61,均P＜0.05];IPGTT提示移植IPCs后的大鼠血糖在30 min时升至峰值,150 min时降至空腹水平,血糖变化曲线与正常组类似.结论 体外利拉鲁肽可以在一定程度上促进BM-MSCs分化成为IPCs,且移植后的IPCs能够在体内进一步发挥降糖作用.