胎鼠成骨细胞骨保护素及其配体mRNA表达与阿胶强骨口服液含药血清的影响

背景阿胶强骨口服液治疗骨质疏松疗效肯定,但其确切作用机制有待探讨.目的观察阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中骨保护素及保护素配体表达的影响,探讨阿胶强骨胶囊治疗骨质疏松的分子水平作用.设计完全随机分组,对照实验.材料实验于2003-06/2004-10在华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合骨代谢实验室完成.选用3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为3组,阿胶强骨口服液组和雌激素组及对照组,每组10只.选用清洁级新生SD大鼠12只用于成骨细胞的分离和培养.方法①各组Wistar大鼠灌胃7 d后,制备各组的含药血清.②将清洁级新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液.培养细胞被分为5组,分别加同体积药液.阿胶强骨口服液组分别加入用培养液稀释为100和500及1 000 g/L浓度的阿胶强骨口服液含药血清;雌激素组分别加入100及1 000 g/L替勃龙含药血清;对照组仅加培养液.同时各组再加入含100g/L小牛血清的培养液,继续培养.③采用四甲基偶氮唑盐比色分析法、3H-胸腺嘧啶核苷掺入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内骨钙素含量,反转录聚合酶链反应测定胎鼠成骨细胞中骨保护素及保护素配体mRNA的表达.④组间比较采用单因素方差分析.主要观察指标胎鼠成骨细胞经阿胶强骨口服液或利维爱含药血清干预后,细胞中骨保护素及保护素配体mRNA的表达.结果①成骨细胞增殖四甲基偶氮唑盐比色分析法及3H-胸腺嘧啶核苷测定结果阿胶强骨口服液组和替勃龙组各药物血清组明显高于对照组(P＜0.05～0.01),并在500g/L时达到最大效应(P＜0.01),当浓度大于500g/L时,其作用趋于饱和.各浓度阿胶强骨口服液及替勃龙含药血清均可增加成骨细胞骨钙素含量(P均＜0.05).②骨保护素基因mRNA表达阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L时最强,明显高于100和500g/L(P＜0 05),阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L及雌激素组含药血清100和1 000g/L明显高于对照组(P＜0 01).③RANKL基因表达阿胶强骨口服液组含药血清1 000g/L时最强,明显低于100和500 g/L(P＜O 05),阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L及雌激素组含药血清100和1 000g/L明显低于对照组(P＜0 01).结论①阿胶强骨口服液对成骨细胞的增殖有明显的促进作用,并且这种作用呈现剂量依赖性和可饱和性,与替勃龙相近.②阿胶强骨口服液治疗骨质疏松疗效机制之一可能与其促进成骨细胞的增殖,调节OPG/RANKL表达有关.     

关节镜下骨-髌腱-骨重建前交叉韧带5年以上随访分析

目的 探讨骨-髌腱-骨(BPTB)在前交叉韧带(ACL)损伤重建后的的远期疗效.方法 1999年1月～2003年6月该院行自体或同种异体BPTB重建ACL韧带123例,采用Lysholm膝关节功能评分法、IKDC评分法及KT1000检测分别评定术后1个月、3个月、6个月、1年、2年及5年等不同时期膝关节功能情况.结果 98例得到5年以上随访,91例患者膝不稳症状消失,关节功能恢复良好.8例合并膝前疼痛,25例感觉伸膝乏力,7例在2年后感觉关节轻度不稳,8例关节功能受限.重建术后6个月Lysholm评分、IKDC评分与术后1个月相比差异有显著性,术后2年与术后6个月相比差异有显著性,但重建术后5年与重建术后2年相比差异无显著性,且术后5年的评分总体满意.结论 自体与同种异体中1/3 BPTB重建ACL远期临床疗效满意.     

股骨近端解剖型锁定钢板治疗老年骨质疏松性EvanⅢ、Ⅳ型股骨粗隆间骨折疗效分析

目的：探讨股骨近端解剖型锁定刚板治疗老年骨质疏松性EvanⅢ、Ⅳ型股骨粗隆间骨折的临床效果。方法：回顾性分析66例老年EvanⅢ、Ⅳ型股骨粗隆间骨折伴骨质疏松患者,随机分为对照组和观察组,每组各33例。观察组采用切开复位股骨近端解剖型锁定钢板内固定治疗,对照组采用股骨近端髓内钉治疗。观察手术时间、术中出血量、术后下地时间、住院费用及并发症发生情况,并行Sander评分,术后1、3、6、12月分别复查X片观察骨折愈合情况和内固定位置。结果：观察组手术时间和住院费用明显低于对照组[（67.2±5.8）min比（78.7±7.3）分）;（1.2±0.5）万比（1.9±0.8）万],而术中出血量和术后下地时间高于对照组[（262.4±10.1）mL比（174.2±8.8） mL;（3.1±0.6）月比（2.4±0.7）月],差异有统计学意义。12月末次随访,两组Sander评分未见统计学差异,均未发生髋内翻、内固定松动、深静脉血栓等并发症。骨折愈合时间观察组（4.6±0.3）个月,高于对照组（3.8±0.4）月。结论：股骨近端解剖型锁定刚板治疗老年骨质疏松性EvanⅢ、Ⅳ型股骨粗隆间骨折手术时间短、术中出血量高、住院费用低,术后髋关节功能佳;但术后下地时间及骨折愈合时间延长,须谨慎选择患者。     

阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响

目的：研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响，探讨阿胶强骨胶囊治疗骨质疏松的分子机制。方法：3月龄wistar（雌雄各半）30只，随机分为阿胶强骨口服液，雌激素，及生理盐水对照组，灌胃7d后，制备实验组和对照组的含药血清。将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞，制成单细胞悬液，消化传代，取二代培养的成骨细胞，制成细胞悬液。培养细胞分为5组，分别加同体积药液，对照组仅加培养液，继续培养。采用MTT比色分析法、3H-胸腺嘧啶核苷（3H—TdR）渗入法测定成骨细胞增殖，用放免法测定细胞内BGP含量，RT—PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达。蛄果：阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖，与对照组相比，差异显著（P〈0．05）。成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清1000ml／L时最强，与雌激素组比较无显著性差异（P〉0．05），且明显高于对照组（P〈0．05）。成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml／L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异（P〉005），且明显低于对照组（P〈0．05）。结论：阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂，分子水平上调节OPG／RANKL表达而治疗骨质疏松。     

补肾方对成骨细胞生长因子TGF-β1 mRNA表达的影响

目的探讨补肾方对成骨细胞转化生长因子-β1 (TGF-β1)mRNA 表达的影响.方法将体外分离培养的新生SD 大鼠的颅骨成骨细胞加入不同浓度的补肾中药密骨片药液(100～ 10 000 μg·m l- 1) 及阳性对照药物重组碱性成纤维细胞生长因子( rbFGF).24 min后, 利用自行制备的地高辛标记的鼠TGF-β1cDNA 探针进行成骨细胞的核酸分子原位杂交分析, 以其细胞内杂交阳性颗粒的平均光密度值代表TGF-β1 mRNA 的表达水平.结果结果显示随着密骨片药液浓度的增加, 成骨细胞内TGF-β1 mRNA 表达明显高于阴性对照组; 但5 000 和1 000 μg·m l- 1的密骨片药液组的TGF-β1光密度值与5 ng·m l- 1的bFGF 组比较无明显差异(P＞ 0. 05).结论表明补肾中药密骨片可刺激成骨细胞TGF-β1 的分泌和合成, 从而促进骨形成和抑制骨吸收.这可能是该方能有效地防治骨质疏松的疗效机制之一.     

计算机三维仿真技术与常规手术治疗胫骨平台骨折的疗效对比分析

目的探讨应用计算机三维仿真技术治疗胫骨平台骨折的疗效。方法应用计算机-快速成形技术治疗胫骨平台骨折73例(计算机辅助组),术前采取CT三维重建、计算机模拟、快速成型与个体化标本预手术;采用常规手术方法治疗62例(常规手术组)。两组病例记录手术时间和出血量,术后均采用Merchant评分评定膝关节功能。结果随访6～34个月,平均17个月。计算机辅助组获得随访52例,优31例,良16例,可3例,差2例,优良率90.4%。常规手术组获得随访47例,优20例,良19例,可6例,差3例,优良率83.0%。与常规手术组比较,计算机辅助组术中出血量少,手术时间短,差异有统计学意义(P0.01),术后功能评分优良率高。结论计算机-快速成形技术有助于术前个体化手术方案的设计,并能提高胫骨平台骨折手术效率与精确度。     

胎鼠成骨细胞骨保护素及其配体mRNA表达与阿胶强骨口服液含药血清的影响

背景：阿胶强骨口服液治疗骨质疏松疗效肯定,但其确切作用机制有待探讨.目的：观察阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中骨保护素及保护素配体表达的影响,探讨阿胶强骨胶囊治疗骨质疏松的分子水平作用.设计：完全随机分组,对照实验.材料：实验于2003-06/2004-10在华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合骨代谢实验室完成.选用3月龄Wistar大鼠（雌雄各半）30只,随机分为3组,阿胶强骨口服液组和雌激素组及对照组,每组10只.选用清洁级新生SD大鼠12只用于成骨细胞的分离和培养.方法：①各组Wistar大鼠灌胃7 d后,制备各组的含药血清.②将清洁级新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液.培养细胞被分为5组,分别加同体积药液.阿胶强骨口服液组分别加入用培养液稀释为100和500及1 000 g/L浓度的阿胶强骨口服液含药血清;雌激素组分别加入100及1 000 g/L替勃龙含药血清;对照组仅加培养液.同时各组再加入含100g/L小牛血清的培养液,继续培养.③采用四甲基偶氮唑盐比色分析法、3H-胸腺嘧啶核苷掺入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内骨钙素含量,反转录聚合酶链反应测定胎鼠成骨细胞中骨保护素及保护素配体mRNA的表达.④组间比较采用单因素方差分析.主要观察指标：胎鼠成骨细胞经阿胶强骨口服液或利维爱含药血清干预后,细胞中骨保护素及保护素配体mRNA的表达.结果：①成骨细胞增殖四甲基偶氮唑盐比色分析法及3H-胸腺嘧啶核苷测定结果：阿胶强骨口服液组和替勃龙组各药物血清组明显高于对照组（P＜0.05～0.01）,并在500g/L时达到最大效应（P＜0.01）,当浓度大于500g/L时,其作用趋于饱和.各浓度阿胶强骨口服液及替勃龙含药血清均可增加成骨细胞骨钙素含量（P均＜0.05）.②骨保护素基因mRNA表达：阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L时最强,明显高于100和500g/L（P＜0 05）,阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L及雌激素组含药血清100和1 000g/L明显高于对照组（P＜0 01）.③RANKL基因表达：阿胶强骨口服液组含药血清1 000g/L时最强,明显低于100和500 g/L（P＜O 05）,阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L及雌激素组含药血清100和1 000g/L明显低于对照组（P＜0.01）.结论：①阿胶强骨口服液对成骨细胞的增殖有明显的促进作用,并且这种作用呈现剂量依赖性和可饱和性,与替勃龙相近.②阿胶强骨口服液治疗骨质疏松疗效机制之一可能与其促进成骨细胞的增殖,调节OPG/RANKL表达有关.     

rhBMP-2/壳聚糖/硫酸葡聚糖复合微球制备及生物安全性研究

目的：制备重组人骨形态发生蛋白/壳聚糖/硫酸葡聚糖（CS/DS/rhBMP-2）复合微球,评估其体外生物相容性。方法采用离子交联法制备CS/DS/rhBMP-2复合微球及CS/DS空白微球,电镜观察CS/DS/rhBMP-2复合微球的形态。采用MTT法检测CS/DS/rhBMP-2微球组、CS/DS空白微球组、rhBMP-2组、对照组各组对L929小鼠成纤维细胞的细胞毒性。结果成功制备CS/DS/rhBMP-2复合微球,电镜检查结果示微球成球满意,分散度好。体外实验结果提示复合微球与L929细胞共培养1、3、5、7 d,其光密度（OD）值与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;CS/DS/rhBMP-2微球组、CS/DS空白微球组、rhBMP-2组、对照组浸提液对L929细胞作用2 d后的细胞相对增殖率（RGR）分别为102.41%、102.85%、99.34%、100%,毒性分级分别为0、0、1、0级。结论成功制备的CS/DS/rhBMP-2复合微球体外生物相容性好,无细胞毒性,在骨组织工程领域具有潜在的应用价值。     

腓肠神经营养皮瓣移植修复足踝软组织缺损中小隐静脉干的处理

背景:在临床上应用和报道中小隐静脉在皮瓣中所起的作用及血管近端蒂如何处理意见不尽一致.目的:应用腓肠神经营养血管皮瓣逆行转移修复足背、足跟及踝部软组织缺损,观察分析不同方式处理小隐静脉对皮瓣成活的影响.设计、时间及地点:病例对比观察,于1998-03/2007-04在解放军广州军区广州总医院完成.对象:将56例足背、足跟及踝部软组织缺损的患者按手术方式分为2组,结扎小隐静脉近端蒂皮瓣组38例,小隐静脉近端与受区大隐静脉或其属支吻合组18例.方法:应用腓肠神经营养血管皮瓣逆行移植修复时,皮瓣切取面积为3.5 cm×4.0 cm～4.0 cm×4.5 cm的病例35例;皮瓣切取面积为4.0cm×4.5 cm～10.0 cm×12.0 cm的病例21例.主要观察指标:不同切取面积及移植方式的皮瓣成活效果.结果:[1]皮瓣切取面积为(4.0×4.5)cm～(10.0×12.0)cm时,移植后未出现静脉危象:皮瓣切取面积为(3.5×4.0)cm～(4.0×4.5)cm时,结扎小隐静脉近端的患者中5例出现术后静脉危象.[2]在皮瓣切取面积为(3.5×4.0)cm-(4.0×4.5)cm时,移植后小隐静脉近端与受区大隐静脉或其属支吻合皮瓣出现坏死的概率低于结扎小隐静脉近端蒂皮瓣(P=0.017 67).结论:切取皮瓣面积小于(4.0×4.5)cm时,应将小隐静脉近端与受区大隐静脉或其属支吻合.小隐静脉在皮瓣中并非过路浅静脉.对皮瓣有营养作用.     

人工股骨头置换治疗Tronzo-Evans Ⅲ、Ⅳ型高龄股骨转子间骨折

目的 探讨人工股骨头置换治疗Tronzo-EvansⅢ、Ⅳ型股骨转子间骨折的疗效.方法 采用人工股骨头置换治疗Tronzo-EvansⅢ、Ⅳ型高龄股骨转子间骨折,对获得随访的37例临床资料进行回顾性分析,采用Harris评分对治疗效果进行评定.结果 37例获得6～32(16±3)个月随访.按Harris评分:优19例,良11例,可5例,差2例,优良率81.1%.结论 人工股骨头置换治疗Tronzo-EvansⅢ、Ⅳ型高龄股骨转子间骨折疗效满意.