A型肉毒毒素多表位串联体的设计、表达、纯化及鉴定

目的:设计、表达两个A型肉毒毒素多表位串联体.方法:从文献报道的A型肉毒毒素(botulinum neurotoxin type A,BoNT/A)的表位及生物信息学方法预测得到的B细胞表位中遴选表位,并加入适当的辅助性元件,设计多表位串联体A、B.对其基因进行优化后,经重叠PCR方法合成串联体A、B的全长基因.分别插入原核表达载体pQE-30,再转化E.coli M15[pREP4]感受态细胞中进行诱导表达,以金属螯合亲和层析法纯化重组蛋白,并进行鉴定.结果与结论:成功设计并构建了两个多表位串联体A、B,并在E.coli中以包涵体形式获得高效表达.Ni-NTA法纯化后分别获得纯度大于92.2%、99%的重组串联体A、B蛋白,并经透析复性法复性.Western印迹和间接ELISA显示纯化、复性后的重组蛋白与抗天然BoNT/A马血清有特异性结合反应.     

放疗化疗联合治疗局部晚期非小细胞肺癌43例

目的 探讨以顺铂为主的化疗方案加放疗对局部晚期非小细胞肺癌的疗效。方法 86例局部晚期非小细胞肺癌患随机分为治疗组及对照组各43例，放疗方案以CAP、EP、MVP或MOP，每人至少化疗两个周期，化疗后10～14天放射治疗，放疗采用^60Co外照射。结果 治疗组有效率83．7％，中位生存期14．5个月，对照组有效率67．4％，中位生存期10个月，两组不良反应为骨髓抑制、胃肠道反应。结论 以顺铂为主的化疗方案加放疗治疗局部晚期非小细胞肺癌的疗效较高，可提高肿瘤的局部控制率和延长生存期。     

颈前路钛网植骨融合术后钛网沉陷的原因探讨

目的：探讨颈前路钛网植骨融合术后钛网发生沉陷的原因及其对临床疗效的影响，并提出相应对策。方法：回顾性分析在我院行颈前路钛网植骨融合术的各类颈椎疾患患者179例，观察患者骨密度、钛网修剪及放置情况、终板处理情况、钢板类型、植骨及椎体撑开情况等。采用日本骨科学会（JOA）评分法评价神经功能的变化。结果：有17例患者发生钛网沉陷，沉陷的原因主要为骨密度下降、钛网修剪放置不当、术中过度撑开、终板刮除过多、使用非限制性钢板、采用同种异体骨植骨、螺钉进钉深度过浅和方向不当、钢板放置位置偏斜等。术后所有患者JOA评分比术前平均增加3．5分（P〈0．01）。162例未发生钛网下沉患者术后3个月和6个月的JOA评分比术前平均增加4．4分和4．7分：发生钛网下沉患者中。6例有临床症状者沉陷时和沉陷3个月时的JOA评分为2．9分和3．8分．7例无临床表现者为3．3分和3．9分．4例有临床症状行翻修手术者翻修术后1周和3个月时JOA评分比翻修前提高3．3分和3．7分。结论：颈前路钛网植骨融合术后可发生钛网下沉，骨质疏松患者应该避免使用钛网。手术时应尽可能增加钛网与终板接触面积，多保留相邻终板，选用限制性钢板，尽量选择自体骨植骨，避免椎间过度撑开等。防止术后钛网沉陷。     

应用生理性成骨力值概念治疗骨折与骨不连——兼论MO现象与有效固定

治疗骨折与术后合并的骨不连,至今仍是骨创伤领域的难题之一。研究分析当前的学术思想,探索更接近骨愈合规律的理念与技术,是必然的学术趋势。1当前骨创伤理论与技术1.1AO从20世纪50年代起,AO组织提出解剖复位与骨块间坚强固定与加压的概念。50年间,由于伴随生物材料学的发展和内固定形式的进步,业已成为治疗骨折与骨不连的主要理论与方法,并取得了瞩目的成就,但同时也发现了存在并需继续探讨的若干问题。(1)偏心类的固定模式,如加压钢板,其疗效超越一般非加压性钢板。但同时也发现:①内固定期间,骨质萎缩,骨痂纹理凌乱或难觅骨痂;②钢板…     

靶向表皮生长因子受体的shRNA抑制U251胶质瘤生长的实验研究

目的探讨靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的RNA干涉(RNAi)技术抑制恶性胶质瘤体外细胞系U251的EGFR表达后,在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法在人EGFR开放阅读框的细胞内区酪氨酸激酶结构域选择1个siRNA靶序列、进行短发夹RNA(shRNA)表达载体psiRNA-2400的构建,并以含有随机序列的psiRNA-scr表达质粒为对照进行了脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系表达。应用RT-PCR检测EGFR表达水平,应用MTT法、流式细胞术和Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后的生物学行为。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长抑制作用。对肿瘤组织应用免疫组化的方法进行EGFR、PCNA和GFAP表达比较。结果脂质体介导、靶向EGFR的shRNA可显著抑制U251细胞ECFR表达,MTT法分析显示psiRNA-2400转染组细胞生长抑制率为68%;与对照组和psiRNA-scr转染组比较,细胞周期分析结果表明psiRNA-2400转染组G_0～G_1期细胞数没有明显变化,进入S期的细胞数较对照组减少了12.7%～13%,而进入G_2期细胞则增加了10.5%～11.7%。Matrigel基质生长实验显示对照组和psiRNA-scr转染组细胞呈正常形态贴壁生长,而psiRNA-2400转染组细胞不能贴壁生长,呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示psiRNA-2400显著抑制皮下肿瘤生长,组织病理学分析显示治疗组EGFR表达下降、PCNA标记指数降低而GFAP表达上调。结论靶向EGFR的RNAi技术可以显著抑制U251细胞的EGFR表达,在体内外对U251细胞生长均产生明显抑制作用。因此,shRNA表达质粒介导的基因治疗可以成为胶质瘤靶向性EGFR治疗的新策略。     

医护人员与患者对高血压服药依从性影响因素的认知比较

目的 比较医护人员与住院患者对高血压服药依从性影响因素的认知差异.方法 应用影响服药依从性因素问卷,分别调查100例高血压患者和80名医护人员,并对其认知程度进行分析.结果 患者对高血压服药依从性影响因素得分普遍低于医护人员.患者认为健康信念、知识方面、身体状况影响程度较高,家庭支持方面影响最小;医护人员认为健康信念、家庭支持、身体状况影响程度较高,医护患关系影响最小.结论 医护人员与患者对影响高血压服药依从性的感知有一定差异,医务人员应重视该问题,采取针对性措施以提高患者服药依从性.     

(足母)甲瓣切取术后供区创面覆盖的方法选择

目的探讨[足母]甲瓣切取术后供区修复的方法，减少供区并发症的发生。方法对[足母]甲瓣切取术后25例[足母]趾创面，采用三种不同的方法处理，其中采用游离皮瓣移植修复9例，采用足背或足底局部带蒂皮瓣修复12例，采用第二足趾皮甲瓣修复4例。结果移植皮瓣全部成活，术后平均随访10个月，其中2例游离皮瓣在术后6个月进行二期削薄，外观和功能满意。第二趾皮甲瓣修复后的功能在3种方法中效果最好。结论根据[足母]甲瓣供区的缺损情况，采用不同的手术方法进行即时修复，能最大限度减少供区并发症的发生。     

Wnt2信号通路重要成员在胶质瘤中的表达及其意义

近来发现Wnt信号通路对个体发育和肿瘤生成具有重要作用[1-2].为进一步探讨Wnt通路在胶质瘤中是否存在表达异常及其在胶质瘤生成中的作用,我们采用RT-PcR、组织芯片免疫组织化学染色以及蛋白印迹法,对人脑胶质瘤Wnt2通路相关因子的表达变化及其意义进行了分析.     

骨桥蛋白在人脑动静脉畸形的表达及意义

目的研究骨桥蛋白(OPN)在脑动静脉畸形(CAVM)的血管组织及其在放射、栓塞治疗后血管病理变化中的表达。方法采用免疫组化方法检测42例CAVM病理标本及对照组10例内减压手术所获脑组织血管中OPN的表达。结果26例无术前治疗史的畸形血管组织中22例有OPN的表达,主要见于CAVM的静脉部分,在粥样硬化样病变的动脉处也有表达。对照组脑组织的血管中未见OPN的表达;有伽玛刀治疗史的5例中,2例在早、中期放射反应的动脉中可见OPN的明显表达;在经历栓塞治疗的11例中,7例在新生内膜组织或异物巨细胞中有强阳性表达。结论人CAVM血管组织中多有OPN的表达,这可能是其适应于适应血流动力学状态而具有的血管重塑的表现,并可能在放射及栓塞治疗后的血管重塑中发挥重要作用。     

Vertex治疗齿状突骨折伴寰枢椎脱位的早期并发症分析

[目的]分析Vertex治疗齿状突骨折伴寰枢椎脱位的早期并发症发生的原因和预防措施.[方法]对18例齿状突骨折伴寰枢椎脱位中的5例6项术中和术后早期发生的椎动脉损伤、失语、失明、大出血、置钉错误等并发症的原因进行分析,避免并发症的发生.[结果]所有发生的早期并发症都得到相应治疗,未遗留后遗症.[结论]Vertex治疗齿状突骨折伴寰枢椎脱位的早期并发症均可以预防,一旦发生及时治疗效果满意.