A型肉毒毒素多表位串联体的设计、表达、纯化及鉴定

目的:设计、表达两个A型肉毒毒素多表位串联体.方法:从文献报道的A型肉毒毒素(botulinum neurotoxin type A,BoNT/A)的表位及生物信息学方法预测得到的B细胞表位中遴选表位,并加入适当的辅助性元件,设计多表位串联体A、B.对其基因进行优化后,经重叠PCR方法合成串联体A、B的全长基因.分别插入原核表达载体pQE-30,再转化E.coli M15[pREP4]感受态细胞中进行诱导表达,以金属螯合亲和层析法纯化重组蛋白,并进行鉴定.结果与结论:成功设计并构建了两个多表位串联体A、B,并在E.coli中以包涵体形式获得高效表达.Ni-NTA法纯化后分别获得纯度大于92.2%、99%的重组串联体A、B蛋白,并经透析复性法复性.Western印迹和间接ELISA显示纯化、复性后的重组蛋白与抗天然BoNT/A马血清有特异性结合反应.     

放疗化疗联合治疗局部晚期非小细胞肺癌43例

目的 探讨以顺铂为主的化疗方案加放疗对局部晚期非小细胞肺癌的疗效。方法 86例局部晚期非小细胞肺癌患随机分为治疗组及对照组各43例，放疗方案以CAP、EP、MVP或MOP，每人至少化疗两个周期，化疗后10～14天放射治疗，放疗采用^60Co外照射。结果 治疗组有效率83．7％，中位生存期14．5个月，对照组有效率67．4％，中位生存期10个月，两组不良反应为骨髓抑制、胃肠道反应。结论 以顺铂为主的化疗方案加放疗治疗局部晚期非小细胞肺癌的疗效较高，可提高肿瘤的局部控制率和延长生存期。     

(足母)甲瓣切取术后供区创面覆盖的方法选择

目的探讨[足母]甲瓣切取术后供区修复的方法，减少供区并发症的发生。方法对[足母]甲瓣切取术后25例[足母]趾创面，采用三种不同的方法处理，其中采用游离皮瓣移植修复9例，采用足背或足底局部带蒂皮瓣修复12例，采用第二足趾皮甲瓣修复4例。结果移植皮瓣全部成活，术后平均随访10个月，其中2例游离皮瓣在术后6个月进行二期削薄，外观和功能满意。第二趾皮甲瓣修复后的功能在3种方法中效果最好。结论根据[足母]甲瓣供区的缺损情况，采用不同的手术方法进行即时修复，能最大限度减少供区并发症的发生。     

Vertex治疗齿状突骨折伴寰枢椎脱位的早期并发症分析

[目的]分析Vertex治疗齿状突骨折伴寰枢椎脱位的早期并发症发生的原因和预防措施.[方法]对18例齿状突骨折伴寰枢椎脱位中的5例6项术中和术后早期发生的椎动脉损伤、失语、失明、大出血、置钉错误等并发症的原因进行分析,避免并发症的发生.[结果]所有发生的早期并发症都得到相应治疗,未遗留后遗症.[结论]Vertex治疗齿状突骨折伴寰枢椎脱位的早期并发症均可以预防,一旦发生及时治疗效果满意.     

Influence of Chemical Oxygen Demand Concentrations on Anaerobic Ammonium Oxidation by Granular Sludge From EGSB Reactor

INTRODUCTION The phenomenon of anaerobic ammonium oxidation was originally discovered in a denitrifying fluidized-bed reactor treating effluent from a methanogenic reactor in the 1990s[1]. Anaerobic ammonium oxidation (ANAMMOX) process is a strictly anaerobic denitrification process, in which ANAMMOX autotrophic bacteria directly oxidize ammonium to dinitrogen gas using nitrite as electron acceptor. In recent years, the anammox process has received great attention and lots of researc…     

常用生理参数的测量原理

随着医学事业的发展,监护仪得到广泛的运用,就医用监护仪常用生理参数的工作原理简述如下。     

98例尿道下裂手术的体会

目的通过对尿道下裂手术的改进,进一步完善尿道下裂手术的技巧和护理。方法A组50例尿道下裂Ⅰ期成形术中,采用皮下连续内翻缝合形成新尿道,且固定于阴茎海绵体,由阴茎根部自下而上多层次,多点缝合皮瓣皮下组织至阴茎海绵体上,均无间隙和死腔。B组48例采用常规手术方式作对照。结果A组50例尿道下裂Ⅰ期成形术成功44例,B组48例成功17例,A组与B组相比成功率显著提高(P＜0．05)。结论尿道下裂Ⅰ期成形术成功率关键在于术者对术式掌握的熟练程度和术中及术后对每个细节的认真处理。     

反义AKT2 RNA抑制U251胶质瘤细胞生长的体内外研究

目的 研究反义AKT2RNA对U251人脑胶质瘤细胞在体内外的生长抑制效用。方法 将逆转录病毒pLXSN为载体的反义AKT2构建体转染U251人脑胶质瘤细胞系，应用蛋白印记确定基因转染前后AKT2的表达水平。流式细胞法与Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后的增殖活性。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导pLXSN、pLXSN-AS-AKT2基因治疗对U251细胞生长抑制作用。在28d的观察期内定期测量皮下肿瘤体积，对肿瘤标本应用免疫组化的方法进行AKT2和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达比较。结果 脂质体介导pLXSN-AS-AKT2可显著抑制U251细胞AKT2表达。与对照组和pLXSN转染组比较，细胞周期分析结果表明AK—AKT2转染组进入S期的细胞数减少了8．5％～8．9％，而进入G0＋G1期细胞则增加了7．9％～8．6％。Matrigel基质生长实验显示对照组和pLXSN转染组细胞呈正常形态贴壁生长，而AS～AKT2转染组细胞不能贴壁生长，呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示pLXSN-AS-AKT2显著抑制皮下肿瘤生长，组织病理学分析显示AS-AKT2转染组AKT2表达下降而GFAP表达上调。结论 体内外实验证明反义AKT2方法在抗胶质瘤增殖方面作用重要，AKT2可作为基因治疗胶质瘤的优选靶标。     

大鼠骨髓间充质干细胞静脉移植对脊髓损伤的修复作用

目的初步探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）静脉移植对脊髓损伤后神经功能恢复和神经修复的影响。方法体外培养BMSCs，改良Allen法制备大鼠脊髓损伤模型，经尾静脉移植Brdu标记的BMSCs，损伤后24h、移植后1、3、5周评价实验动物的神经功能状况，并检测BMSCs在体内迁移、存活以及分化情况，电子显微镜观察组织形态学变化。结果移植的BMSCs在宿主损伤脊髓中聚集并存活，3～5周后有部分移植细胞表达神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF）、微管相关蛋白（MAP2）；BMSCs静脉移植组大鼠运动功能改善，BBB评分高于对照组（P〈0．05）；5周后组织学观察，与对照组相比移植组损伤区脊髓结构较完整。结论BMSCs经静脉移植后可向脊髓损伤处聚集并存活分化，促进神经修复及神经功能的恢复。     

寰枢椎椎弓根钉固定治疗伸直型齿状突骨折合并寰枢关节半脱位

Objective To explore the clinical outcome of atlantoaxial pedicle screw instrument in treatment of extension-type odontoid fracture combined with aflantoaxial subluxation. Methods From December 2002 to December 2006, seven patients with extension-type odontoid fracture combined with at-lantoaxial subluxation were reduced and fixed with atlantoaxial pedicle screw instrument of Vertex system under general anesthesia. There were five males and two females, at mean age of 39.2 years (range 21-59 years). All odontoid fractures were fresh type Aderson Ⅱ. JOA scores of spinal core function was 8.6-14.9 (average 10.7) preoperatively. The X-ray examination, CT scanning and skull traction were performed in all patients preoperatively. Results There found no severe complications such as injuries of vertebral artery, nerve root and spinal cord postoperatively. All patients obtained complete reduction and healing of the fracture and dislocation. The mean off-bed time was four days (3-6 days) after opera-tion. A follow-up for 12-36 months (average 22 months) in all patients showed that the clinical symptom was improved significantly six months postoperatively and that all screws were in proper position verified by X-ray and CT scanning. All patients obtained solid bony union on radiographs, with no loosing or breakage of instrument. The postoperative JOA scores was 13.5-16.9 (average 15.8). Conclusions Allantoaxial pedicle screw fixation has advantages of intraoperative reduction, reliable fixation and high fusion rate and can be used as an effective method for extension-type odontoid fracture combined with at-lantoaxial subluxation.