重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的影响

目的　了解重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的影响。方法　建立CCl4中毒性及人血白蛋白免疫损伤性 2种大鼠肝纤维化模型 ,在造模的同时给予不同剂量的重组人肝再生增强因子 (hALR)。在不同的时间点留取大鼠肝组织标本 ,提取总RNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)测定Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平。结果　在两种模型中hALR低剂量组大鼠肝组织I型胶原 (CCl4模型 2、4、6、8周分别为 1 .71± 0 .2 6、3 .42± 0 .67、3 .76± 0 .43、3 .3 3± 0 .69;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为 3 .86± 0 .66、2 .98± 0 .40 ) ,Ⅲ型胶原(CCl4模型 2、4、6、8周分别为 0 .97± 0 .1 6、2 .0 3± 0 .3 2、1 .86± 0 .3 3、1 .66± 0 .2 3 ;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为 2 .63± 0 .3 4、2 .0 2± 0 .3 2 )的基因表达水平在模型形成的不同阶段均明显低于模型组 ;高剂量hALR组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平均明显低于低剂量组。结论　重组人肝再生增强因子可能有抑制大鼠实验性肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的作用。     

Toll样受体5基因多态性与中国人群脓毒症的相关性研究

目的 探讨Toll样受体5(Toll-like receptor 5, TLR5)基因多态性位点与脓毒症发生风险及疾病严重程度的相关性.方法 采用病例-对照研究设计,募集了255例脓毒症患者和260例对照个体.应用贝克曼公司的商用SNPstream 分型技术和PCR-RFLP 方法对TLR5基因的3个编码区多态性位点进行分型.采用Logistic 回归分析,校正性别、年龄、吸烟和饮酒、慢性病状态、APACHEⅡ评分和脓毒症病因等混杂因素的影响,评价多态性位点与脓毒症的发生风险,以及脓毒症性休克、死亡和器官功能障碍等表型的遗传相关性.结果 TLR5基因的3个多态性位点在病例和对照组中的基因型分布均呈哈-温平衡状态.这3个编码区的多态性位点与脓毒症的发生风险和疾病严重程度均无遗传学关联.结论 TLR5基因的多态性位点可能在脓毒症的发生、发展和病程转归中不发挥重要作用.     

用噬菌体随机肽库筛选刺激细胞生长的活性小肽

目的 筛选刺激NFS－60细胞生长的活性小肽。方法 以G－CSF依赖细胞系NFS－60为靶细胞，筛选随机6和15肽库，经3轮筛选后，随机挑取60个噬菌体克隆进行生物学活性和结合活性鉴定。结果 得到6个刺激NFS－60细胞生长的阳性噬菌体克隆。经细胞ELISA检测，这6个小肽都可与NFS－60细胞结合，并且这6个小肽与细胞结合的量，都与所加入的噬菌体的量成正比，经测序未找到共同序列。结论 从随机噬菌体肽库中筛到的活性小肽，可以模拟某些生长因子的活性部位，来刺激靶细胞的生长。     

真核细胞DNA碱基损伤及切除修复酶

哺乳动物细胞DNA碱基损伤是基因毒素所致DNA损伤事件中最主要的损伤类型;无嘌呤/无嘧啶碱基位点是DNA分子频发生成的结构损伤。DNA糖苷酶、AP内切核酸酶等DNA修复酶借助碱基切除修复机制修复这些损伤,在DNA损伤修复中起关键作用。     

血管内皮生长因子受体KDR的靶向制剂的制备

目的：研究从噬菌体肽库中筛选到的与血管内皮生长因子受体Ⅱ(KDR)有特异结合活性的小肽，做为KDR靶向药物的先导物质的应用。方法：从噬菌体肽库中筛选能特异结合KDR的噬菌体克隆，挑选结合力最强的克隆测序并化学合成小肽P5，梯度ELISA、阻断实验和竞争结合实验测定小肽在体外与KDR的结合活性。将P5与生物素(NHS-d-Biotin)、BSA化学偶联，ELISA法和细胞免疫组化实验检测偶联物与KDR的结合活性。结果：化学合成的小肽P5在体外能特异结合KDR，Kd=168．6nmol／L，约是KDR与配体血管内皮生长因子(VEGF165)亲和力的1／30，P5能阻断VEGF165与KDR的结合活性，但不能竞争VEGF165与KDR的结合活性。将P5作为导向物质化学合成的P5-BSA-Biotin，在体外同样具有与KDR和细胞表面KDR分子结合的特性。结论：化学合成的小肽P5有望作为先导分子，在以KDR为靶点的肿瘤靶向治疗中得到应用。     

抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制

目的　利用纯化的重组人肝再生增强因子(hALR)制备抗hALR的单克隆抗体,建立hALR的检测方法。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,经ELISA和免疫印迹证明其特异性。结果获得了4株分泌抗hALR特异性抗体的杂交瘤 细胞系;无血清培养液效价为1×10-2,腹水效价为1×10-5;亚类鉴定表明2株单克隆抗体为IgGl,另2株为IgG2b;免疫印迹 显示抗体结合抗原的分子量与hALR相符,为特异性抗hALR抗体。结论通过杂交瘤技术,获得了抗hALR的单克隆抗体 为以后的工作奠定了基础。     

神经元特异性烯醇化酶ABC—ELISA方法的建立与应用

应用人脑神经元特异性烯醇化酶(NSE)和兔抗人NSE抗体,建立了测定NSE浓度的ABC—ELISA方法。该法灵敏度高、特异性强,标准曲线线性关系好;可用于临床分析病人血清的NSE浓度和诊断肺小细胞癌。     

抗CD19 CAR-T对K562~(CD19+)肿瘤细胞特异性杀伤作用的研究

目的构建表达抗CD19分子的嵌合抗原受体,制备抗CD19 CAR-T细胞,研究其对CD19表型细胞的特异性识别和杀伤效果。方法通过分子克隆方法,构建能够自剪切EGFP荧光报告的抗CD19 CAR分子,将其重组到慢病毒载体中并包装获得慢病毒。通过慢病毒递送的方式,将抗CD19 CAR过表达于primary-T细胞,流式细胞术分析确认表达后,通过ELISA检测CAR-T细胞IL-2分泌情况,最后用LDH释放法评价靶向杀伤作用。结果成功获得抗CD19 CAR的慢病毒递送载体;流式细胞术表明CAR分子在T细胞表面高效稳定表达;ELISA结果显示CAR-T细胞在靶细胞刺激下IL-2分泌水平显著升高(P0.01);LDH结果显示CAR-T细胞特异性杀伤CD19表型细胞,且杀伤效果在E:T=10:1时达到50%以上,显著高于对照组(P0.05)。结论成功获取了具有靶向CD19表型细胞的CAR-T细胞,能高效特异性杀伤肿瘤细胞。     

肿瘤标志物—神经元特异性烯醇化酶在肺小细胞癌中的临床意义

报告采用ABC酶联免疫法检测治疗前肺癌病人血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的活性水平结果。其中肺小细胞癌(SCLC)85例,非肺小细胞癌(NSCLG)194例,良性肺病60例;健康对照(73名)总体均值为9.2±5.0ng/ml。如将NSE>20ng/ml定为正常上限值,SCLC的阳性检出率为91.8％,NSCL)和良性肺部疾病的阳性检出率则分别是12.4％和3.3％,其他非肺部的恶性肿瘤的阳性检出率也很低。因此,NSE是SCIC和NSCLC鉴别诊断的特异性标志物。更有意义地是,NSE可用来监测临床治疗反应,并能预报复发。     

药物的聚乙二醇修饰研究进展

目的 介绍了药物聚乙二醇技术及其在药物研究中的应用最新进展。方法 以国外大量有代表性的献为基础，简要论述了聚乙二醇的生理化学特性、药物的聚乙二醇修饰的优势、修饰技术及其在药物研究中的应用和存在的问题，并评述其应用前景。结果 药物的聚乙二醇修饰技术改变了药物的分子结构，从而改进了药物动力学和药效学的性质，增加了注射药物的临床应用范围和疗效。结论 聚乙二醇修饰技术成功应用于蛋白质药物、有机小分子的前体药物和脂质体药物的研究，显示了药物的聚乙二醇修饰技术良好的应用前景。