抗人粒细胞单克隆抗体的研制和鉴定及其放射免疫显像

以人粒细胞常规免疫和融合BALB／c小鼠，建立一株稳定的高效价的抗人粒细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株SZ-102，并对其组织特异性进行签定及探讨在炎症模型显像中的潜在价值。结果表明，McAb SZ-102免疫球蛋白亚类为IgGl。流式细胞术测定显示其与外周血液中的粒细胞和单核细胞呈强阳性反应，而与淋巴细胞、红细胞和血小板不起反应，但与正常人骨髓中的较成熟的粒细胞、单核前体细胞发生反应。SP免疫组化法检测正常人组织切片中Sz-102抗原阳性细胞分布的结果显示，该抗原主要表达在肝、肺、脾、胸腺、淋巴结组织个的巨噬细胞表面。以亚氨基建咏(2—IT)修饰，99Tcm标记葡庚糖酸钠(GH)配体交换法标记SZ-102。给具有左下肢炎症模型的家兔，由耳缘静脉注入99Tcm-抗人粒细胞单克隆抗体SZ-102进行SPECT显像，以99Tcm标记非特异性鼠IgG作为阴性对照，结果表明99Tcm-Sz-102在家兔炎症部位显像清晰，其最佳显像时间为注射后2—4小时，而四Tcm标记非特异性鼠IgG在家兔炎症部位未能清晰显像。结论：99Tcm-SZ-102具有活体内炎症定位导向能力，显像时间短，对隐匿性炎症疾病或肿瘤感染病灶的放射免疫显像诊断有一定的潜在临床价值。     

SZ-21拮抗血管生成的初步研究

本研究的目的是从SZ-1，-2，-21，-51，-65及262(GPⅡb/Ⅲa McAb)中筛选出与ECV304（人脐静脉内皮细胞株）起反应的单抗，研究其抗血管生成的能力。用流式细胞仪筛选与ECV304起反应的单抗，用酶标法检测反应的单抗对ECV304、肺癌细胞株A549粘附、迁移的作用，采用鸡绒毛尿囊膜（CAM）血管生成分析法观察其体外抗血管生成作用，以Annexin Ⅴ TITC盒检测单抗对A549细胞的凋亡作用。结果表明：筛选出了与ECV304起反应的SZ-21，其对ECV304与基质纤连蛋白（Fn）、胶原蛋白（Col）Ⅳ间粘附、迁移均有抑制作用，鸡绒毛尿囊膜经TNF-α诱导血管生成后SZ-21可抑制其新生。进一步研究发现SZ-21对肿瘤细胞A549（肺癌细胞株）与基质Fn，ColⅣ间粘附、迁移亦有拮抗作用，对A549细胞可诱导其凋亡。结论：SZ-21通过对整合素（integrin）β3的抑制和诱导凋亡的作用表现了抗血管生成的能力，整合素与Fn，ColⅣ的结合部位也不限于RGD序列，而具有不同的识别信号。     

血小板活化过程中膜蛋白的变化

随着血小板的活化,血小板膜蛋白的组成、结构和功能将发生改变。糖蛋白Ⅰb由均一性分布变为簇状排列,糖蛋白Ⅱb-Ⅲa复合物暴露出多种粘附蛋白的受体,血小板膜上出现一系列新的蛋白抗原及受体部位,活化血小板特异的单克隆抗体对研究血小板活化过程中的变化具有重要价值。     

肿瘤患者胸水可溶性尿激酶受体检测及其临床意义

目的　了解良、恶性胸水中可溶性尿激酶受体 (suPAR)的水平及其与肿瘤患者病情和预后的关系。方法　放射免疫分析法检测 2 6例恶性胸水及 10例炎性胸水患者suPAR水平 ,并与 2 1名正常人 (对照组 )对照。结果　恶性胸水、炎性胸水与正常血浆suPAR水平分别为 (4 .3 6±2 .12 ) μg/L、(2 .64± 1.0 5 ) μg/L和 (1.73± 0 .96) μg/L ,炎性胸水suPAR水平高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而恶性胸水suPAR水平又高于炎性胸水 (P <0 .0 5 )。恶性胸水suPAR水平还显示出与患者预后相关。结论　检测suPAR水平有助于鉴别胸水的良、恶性及判断恶性肿瘤患者的预后     

人血小板膜糖蛋白功能测定的酶联免疫分析方法的建立

目的建立测定血小板膜糖蛋白（GP）功能的酶联免疫分析（ELISA）方法 ,并对其灵敏度、批内和批间差异进行方法学考核。方法以抗血小板CD62P单抗SZ51和抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）单抗7E3分别包板,加入经ADP诱导的或未诱导的正常人富含血小板血浆（PRP）,以生物素标记的抗GPIb单抗SZ2（Biotin-SZ2）反应后,加入亲和素标记的辣根过氧化物酶（Avdin-HRP）检测,邻苯二胺（OPD）显色后,酶标仪读取吸光度（A）值。对其灵敏度及批内、批间差异作方法学评估,应用该方法对抑制性单抗SZ-21和阿司匹林抑制血小板活化的功能效果进行测定,并与流式细胞术（FCM）测定结果进行比较。结果该方法可检测血小板计数低达6.25×109/L（SZ51包被板）和3.13×109/L（7E3包被板）的标本,批内和批间变异系数均小于10%。测得50名健康正常人ADP诱导的（未诱导的）血小板的CD62P和GPⅡb/Ⅲa的A值分别为0.68±0.21（0.18±0.09）和0.87±0.29（0.44±0.14）。ELISA测定结果表明,SZ21和阿司匹林可明显抑制ADP诱导的血小板功能。流式细胞仪测定ADP诱导的（未诱导的）人血小板表面CD62P和GPⅡb/Ⅲa的阳性细胞百分率分别为（60.1±7.12）%[（2.56±0.61）%]和（86.32±17.82）%[（20.25±14.56）%],其批内和批间变异系数均〈10%。结论该方法可以测定血小板功能活化剂或抑制剂对血小板功能的影响,可以测定血栓性疾病或血栓形成相关性疾病引起的血小板活化程度。     

BA-ELISA定量检测人血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、CD62p的表达及其临床应用

目的建立测定血小板膜糖蛋白功能的生物素亲和素酶联免疫吸附（BA-ELISA）方法,并探讨其临床应用价值。方法采用抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）单抗7E3和抗血小板CD62p单抗SZ51及生物素亲和素系统建立BA-ELISA方法,并应用该方法检测50名健康志愿者、30例急性心肌梗死（AMI）、30例急性脑梗死（ACI）和30例糖尿病（DM）患者的血小板膜糖蛋白功能,并与流式细胞术（FCM）测定结果进行比较。同时,应用该方法对抑制性单抗SZ21和阿司匹林抑制血小板活化的功能效果进行测定。结果该方法检测血小板计数敏感度低达3.13×109/L（7E3包被板）和6.25×109/L（SZ51包被板）,批内和批间变异系数分别为6.23%～8.35%和4.38%～5.78%。测得AMI、ACI和DM患者ADP诱导的（未诱导的）血小板的GPⅡb/Ⅲa和CD62p表达量均显著高于健康志愿者（均P〈0.01）。BA-ELISA测定表明,SZ21和阿司匹林可抑制ADP诱导的血小板功能（但P〉0.05）。该方法和FCM同时测定健康志愿者、AMI、ACI和DM患者的GPⅡb/Ⅲa和CD62p表达水平。测定数据经直线回归分析得r=0.86。结论 BA-ELISA检测血小板的膜糖蛋白,可精确判断血小板的功能状态,为指导临床预防、诊治、评估疾病提供简便、可行的方法。活化的血小板膜糖蛋白测定可从凝血的角度对上述疾病的早期诊断、病情进展的判断、抗血栓药物的评估及疾病预后的判断起到辅助作用。     

基因芯片技术及其在疾病诊断上的应用

生物芯片 (或称微阵列技术 )是将大量序列已知的寡核苷酸分子、基因片段或多肽分子等 ,应用特殊的微阵列技术固定在玻璃、硅片、塑料等材料上 ,被测片段经荧光等物质标记后与芯片上的探针分子结合 ,通过激光共聚焦扫描仪或电荷偶联摄像机 (ＣＣＤ)对各阵列荧光信号的强度进行检测 ,就可对大量标本的序列特征、基因表达量或表达差异等进行平行分析[1～ 4 ] 。根据芯片上探针类型的不同 ,生物芯片可分为基因芯片和蛋白芯片两类。从 90年代生物芯片技术出现至今 ,在短短几年内 ,该技术已在基因测序[5] ,基因突变及多态性分析[6～ 7] ,基因表达…     

P—选择素时间分辨荧光免疫分析法的建立及临床应用

目的　建立时间分辨荧光免疫分析法 (TRFIA)用于检测血栓形成相关疾病患者的血浆P 选择素的含量 ,并探讨其临床意义。方法　用抗人血小板单抗SZ 5 1 IgG包被 ,将Eu3+ N (对 异硫氰酸苄基 ) 二乙烯四乙酸与另一个血小板单抗S12连接以制备Eu3+ S12示踪剂 ,β 二酮为发光增强剂 ,采用平衡饱和法建立时间分辨荧光免疫分析法 (TRFIA)用于分析糖尿病、高血脂、脑梗塞患者及正常人血浆中P 选择素含量的变化 ,并与流式细胞术 (FCM)和酶标记免疫吸附分析法 (ELISA)作比较。结果　方法灵敏度为 0 98ng/ml,批内和批间CV分别为 4 2 3 %和 6 6 7% ,平均回收率为 97 2 4% ,可测范围为 4 1～ 80ng/ml。应用TRFIA测定 2 2例高血脂、18例脑梗塞患者和 2 0例正常人血浆中P 选择素含量 ,分别为 8 0 8± 1 4ng/ml,12 5 1± 3 6ng/ml和19 0 4± 7 9ng/ml,显著高于正常人 (3 0 7± 1 6 4ng/ml) (P <0 0 1)。同时与ELISA和FCM方法检测血浆内P 选择素和血小板膜表面表达情况作比较 ,结果一致。结论　TRFIA检测血浆P 选择素的方法可靠、灵敏、方便 ,具有较高的临床使用价值     

血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达

目的利用基因重组技术体外表达血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)胞外区片段。方法采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA，构建表达载体pET-20b( )-GPⅥ，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，经IPTG诱导表达。表达产物经Ni—NTA Resir。纯化后复性；使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质。结果 PCR扩增产物经测序证明与GPVI胞外区cDNA序列完全一致；酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b( )-GPⅥ；原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量为32kd的蛋白条带，诱导产物以包涵体形式存在；Western印迹分析表明重组蛋白可与抗Penta-His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合。结论正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白，纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性。     

苏州地区汉族人血小板糖蛋白Ⅲa基因TaqI多态性与脑梗死的相关性研究

目的　研究苏州地区汉族人血小板糖蛋白Ⅲa基因TaqⅠ多态性与脑梗死发生的相关性。 方法　应用PCR技术结合TaqⅠ酶切分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,研究了苏州地区汉族正常人与脑梗死患者血小板糖蛋白Ⅲa基因TaqⅠ多态性特点。 结果　正常对照组TaqⅠ等位基因的频率分别为C 5 3.8%、A 4 6 .2 %。脑梗死组TaqⅠ等位基因频率分别为C 5 0 .6 %、A 4 9.4 %。脑梗死组和对照组之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　苏州地区汉族人血小板糖蛋白Ⅲa基因TaqⅠ多态性与脑梗死发生无关。