VEGF-C真核表达载体的构建及蛋白表达

目的构建人血管内皮生长因子(VEGF-C)编码序列基因真核表达载体,为探讨VEGF-C的生物学功能奠定基础.方法根据已公布的序列设计引物,用PCR方法从肿瘤细胞株cDNA中扩增出人VEGF-C编码序列基因片段,测序正确后用限制性内切酶将目的片段插入PcDNA3.1/V5-His-TOPO载体中.采用酶切和PCR鉴定后通过脂质体介导转染至CHO细胞中进行瞬时表达.结论经RT-PCR扩增转染细胞cDNA和Western blotting检测证实重组质粒pcDNA3.1-VEGF-C能在宿主细胞中高效表达.     

98例成人急性白血病形态学免疫学和细胞遗传学分型诊断

对９８例初治成人急性白血病（ＡＬ）进行了形态学、免疫学和细胞遗传学（ＭＩＣ）综合分型。结果显示：形态学分型与ＭＩＣ分型符合率为９０．８％；ＡＬＬ免疫分型与ＭＩＣ一致率为９５．６％，而ＡＭＬ仅为７０．８％。１０／４８例ＡＭＬ表达淋系抗原（Ｌｙ＋—ＡＭＬ）；８／４３例ＡＬＬ表达髓系抗原（Ｍｙ＋—ＡＬＬ）。７／９８例为杂合型急性白血病。染色体异常检出率７１．４％，其中６５．７％为特异性异常，包括ｔ（９；２２）、ｔ（４；１１）、ｔ（１１；１４）、６ｑ－、９ｐ－、ｔ（８；１２）、ｔ（８；１４）及ｔ（１５；１７）、ｔ（８；２１）、ｉｎｖ（１６）等     

High efficiency retrovirus-mediated gene transfer to leukemia cells

Genetherapywithgenetransferasitsmolecularbasispromisesaneffectivestrategyforthetreatmentofcancerandinheriteddiseases.RetroviralvectorsderivedfromtheMoloneymurineleukemiavirus(MoMLV)backbonearewidelystudiedasvehiclesforgenetransferbasedontheirpotentia...     

噻氯匹定对血小板血栓烷B_2生成的影响

口服噻氯匹定(ticlopidine)能抑制胶原诱导的血小板血栓烷B_2(TXB_2)生成。大剂量(500mg/d)可使TXB_2生成很快降低,停药1wk后恢复正常。给小剂量(250mg/d)时TXB_2的减少出现较晚,恢复亦快。噻氯匹定对ADP诱导的血小板TXB_2生成也有显著抑制作用。噻氯匹定的抗血小板作用至少有部分与抑制花生四烯酸的代谢有关。     

凝血因子Ⅷ基因内二核苷酸重复序列在云南省傣、彝和汉族人群中的多态性研究

研究云南省傣、彝和汉族人凝血因子Ⅷ基因内含子22(CA)n二核苷酸重复序列的多态性,获取高多态信息量的分子遗传标志.应用聚合酶链反应(PCR)和DNA序列分析技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对该位点的基因频率及多态信息量进行调查.结果发现,傣族和彝族中至少有(CA)n拷贝数为24,25和26的3种等位基因片段,两民族中的频率分布分别为1.2%-57.5%和16.43%-63.00%;汉族人群中至少有5种等位基因片段,(CA)n拷贝数分别为24,25,26,27和28,频率分布在8.97%-32.00%.在上述三种民族人群中均未发现FⅧ基因内含子22二核苷酸重复序列的杂合子.本研究的结果提示,目前至少可认为该位点不宜作为云南省傣、彝和汉族人群的DNA遗传标志.     

血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达

目的利用基因重组技术体外表达血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)胞外区片段。方法采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA，构建表达载体pET-20b( )-GPⅥ，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，经IPTG诱导表达。表达产物经Ni—NTA Resir。纯化后复性；使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质。结果 PCR扩增产物经测序证明与GPVI胞外区cDNA序列完全一致；酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b( )-GPⅥ；原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量为32kd的蛋白条带，诱导产物以包涵体形式存在；Western印迹分析表明重组蛋白可与抗Penta-His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合。结论正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白，纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性。     

血管内皮细胞的功能研究

一组分泌抗猪主动脉内皮细胞单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞的建立血管内皮细胞具有多种生物学活性,尤其是在防止血管内血栓形成与动脉粥样硬化等方面起着重要作用。我们应用杂交瘤技术产生了一组抗猪主动脉内皮细胞的单克隆抗体,以此进一步研究内皮细胞的生理功能及其生化本质。正常猪主动脉经0.5％链丝菌蛋白酶(Pronase E)处理(37℃,20分钟)后,分离得到动脉内皮细胞。取3×10细胞为抗原,通过腹腔途径免疫Balb/C小鼠,2个     

^99Tc^m—抗人活化血小板单抗SZ—51对犬冠状动脉血？…

目的 用＾９９Ｔｃ＾ｍ－抗人活化血小板单抗ＳＺ－５１对犬冠状动脉血栓模型进行放射免疫显像（ＲＩＩ）研究。方法 杂种犬４条，透视下自右侧股庳 管，将自制螺旋钢圈置入左冠状动脉前降支或回旋支，用造影证实其血栓模型制作的可行性。其中３条犬完全冠状动脉血栓模型制作后行活体和离体心脏血栓ＲＩＩ。结果 犬冠７状动脉血栓模型制作成功，共制作５处血栓，３条犬注射＾９９Ｔｃｍ－ＳＺ－５１后１～６ｈ显像，３处血栓显影     

抗血小板膜糖蛋白Ⅰbα/Ⅲa双特异单链抗体的构建及其功能研究

目的构建、表达抗血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰbα/GPⅢa双特异单链抗体,为其进一步研究、应用奠定基础.方法应用PCR技术,扩增出接头片段和SZ-21单链抗体基因,克隆入pUCm-T载体,测序分析.应用基因重组技术将接头片段、SZ-21单链抗体基因和SZ-2单链抗体基因重组拼接,构建SZ-2/SZ-21双特异单链抗体表达载体pET22-21-L-2scFv,并测序验证.导入大肠杆菌BL21(DE3)Plys,诱导表达.流式细胞术、ELISA、Western blot检测SZ-2/SZ-21双特异单链抗体与血小板结合能力,瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导血小板聚集试验对表达产物功能进行研究.结果表达载体pET22-21-L-2scFv构建拼接正确;表达产物以包涵体形式为主,表达量占菌体总蛋白的14%;经变性、纯化、复性,表达产物具有与血小板以及血小板GPⅠbα和Ⅲa结合活性,可抑制瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导的血小板聚集并呈剂量依赖性.结论成功表达了SZ-2/SZ-21双特异单链抗体,该抗体具有与相应2个靶抗原结合活性,并可抑制瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导的血小板聚集.     

利用抗人血小板膜糖蛋白Ⅲ_a单克隆抗体SZ—21测定生物材料表面粘附血小板数的新方法

本文介绍了一种新的生物材料血液相容性体外评价方法,用特异抗人血小板膜糖蛋白(GPⅢa)的单克隆抗体SZ-21以固相放射免疫法对人血清白蛋白、人血纤维蛋白原及鼠尾胶原镀膜材料管表面粘附血小板进行定量测定。 试验结果说明本研究建立的新方法可快速、准确、定量地测定生物材料吸附血小板的性能,并为进一步深入研究生物材料对蛋白抗原决定簇的影响提供了新的手段。