腺鼠疫患者血清抗体谱的研究

目的检测腺鼠疫患者血清抗体谱及抗体随时间变化趋势。方法利用一包含145个鼠疫耶尔森氏菌毒力相关蛋白质的蛋白芯片检测云南腺鼠疫患者血清抗体谱及抗体随时间变化趋势。结果在腺鼠疫患者体内检测到32种蛋白相应的抗体。结论FI抗体产生的速度最快、幅度最高、持续的时间最长;YopM、YopH、YopE抗体升高不明显;V抗体在患者体内未检测到;在发病后14 d才检测到pH6抗原的抗体,3个月时抗体荧光值没有下降,可持续半年。YopD的抗体在部分患者体内明显升高,但在半年后下降到正常水平。     

用热变性温度法测定沙眼衣原体DNA中G+C的含量

本文报告了使用林万明等改进的半导体热敏电阻探针直接测温装置的热变性温度法(Tm),测定沙眼衣原体DNA中G+C的含量。此法简单、方便并且重复性好。本结果表明,沙眼衣原体TE55株DNA中G+C的含量,与国外文献值相近,今后,可用此法鉴别临床分离的衣原体及进一步确立衣原体的分类位置。     

单克隆抗体修饰玻璃表面制备蛋白质芯片的初步研究

目的探讨应用单克隆抗体修饰玻璃表面制备蛋白质芯片的方法.方法用不同浓度的抗6X His单克隆抗体修饰玻璃表面,从蛋白质固定效率和固定蛋白质的反应活性两个方面,对修饰效果进行评价.结果初步观察到单克隆抗体修饰玻片对蛋白质的固定量较醛基化修饰的玻片没有明显增加,但其固定蛋白质中有反应活性的蛋白质的比例较高.结论单克隆抗体修饰的玻片也适合于制备蛋白质芯片.     

产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素基因探针的研制及临床应用

<正> 近几年来,应用基因探针检测产毒性大肠杆菌(ETEC)取得了很大进展。本文报告用含有LT-B基因和部分LT-A基因序列的800bpDNA片段作探针,从腹泻患儿粪便标本中检测ETBC LT。 材料和方法 一、菌种 探针供体菌大肠杆菌C600(pMMO_(30)),由军事医科院生物工程研究所陈锦光惠赠。该pMMO_(30)质粒中含编码LT-B亚单位590bpDNA序列和210bpLT-A亚单位基因片段,用作探针的序列全长800bp。实验所用的标准ETEC菌株和临床分离大肠杆     

PCR技术检测鼠疫菌的试验研究

鼠疫耶尔森氏菌是我国甲类一号传染病──鼠疫的病原体。对鼠疫菌的检测方法自５０年代起就一直应用常规的“四步”检验区［１］。这些方法虽然能够更直接地反映出疫源地的状态或鼠疫流行的强度及趋势,但这些方法也存在繁杂、费时和受材料腐败等诸多因素影响检出的痹病。因此建立一种具备快速、特异、敏感的方法,用于鼠疫的早期诊断是非常必要的。随着分子生物学的兴起,一系列新技术在鼠疫菌的检测中得到应用,如鼠疫菌的核酸探针技术区［２］和鼠疫菌的ＰＣＲ技术［２］等。本试验采用鼠疫菌９．５Ｋｂ质粒上的ｐｌａ基因和１００Ｋｂ质…     

鼠疫耶尔森菌生物型变异遗传基础的研究和新生物型--田鼠型的提出

目的 探究鼠疫耶尔森菌生物型变异的遗传基础。方法 通过全基因组序列的比较分析,鉴定可能与生物型变异相关的基因突变,采用DNA测序和位点特异性PCR的方法,分析基因突变在鼠疫耶尔森菌自然分离株中的分布。结果 田鼠鼠疫自然疫源地菌株在毒力、生化表型和分子特征上与其他型别鼠疫耶尔森菌相差很大。所有脱氮阴性菌株的napA基因发生了突变,所有甘油利用阴性菌株的glpD基因发生了突变,所有阿拉伯糖利用阴性菌株的araC基因发生了突变。结论 提出了一个新的生物型——田鼠型;相应糖醇代谢相关基因发生突变是4个生物型变异的遗传基础。     

鼠疫耶尔森菌pgm位点及其侧翼序列遗传变异的比较分析

目的研究鼠疫耶尔森菌中国自然分离株pgm位点及其侧翼序列的变异,了解不同疫源地菌株间的毒力差异,为鼠疫防治提供帮助。方法比较分析现有4株菌的pgm位点及其侧翼序列的变异,采用PCR、等位基因特异性PCR扩增260株中国自然分离株和7株假结核耶尔森菌。结果除锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株外,其他菌株均缺失了YPl666的70～87bp之间的18bp碱基。1406bp处T的缺失仅存在于东方型菌株中。北天山东段型及西段A、B型,锡林郭勒高原型,青海田鼠型菌株的pgm位点下游都没有IS100插入;锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株的色素沉着区有1个IS285插入,在其下游3kb区域还有1个IS100插入。冈底斯山型和昆仑山A、B型菌株的pgm位点上游侧翼区与其他菌株不同。36株菌的pgm位点缺失,缺失的菌株主要集中在鄂尔多斯高原型,松辽平原B型,昆仑山A、B型4种生态型菌株中。结论北天山东段型及西段A、B型,锡林郭勒高原型,青海田鼠型菌株是中国鼠疫耶尔森菌中比较古老的菌株。锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株是一个独特的分支,建议归为第4个生物型——田鼠型。北天山东段型及西段A、B型,锡林郭勒高原型,青海田鼠型菌株的pgm位点,由于在其下游没有IS100插入,所以稳定、不易缺失。pgm位点及其侧翼序列的变异与菌株的生物型、自然疫源地和生态型都具有一定的相关性。     

SELEX法筛选炭疽芽孢杆菌适配子的研究

目的：利用SELEX（system evolution of ligands by exponential enrichment)体外筛选,找能与炭疽芽孢杆菌芽孢特异结合的寡核苷酸适配子（aptamer),方法：体外合成长度为78个核苷酸的随机DNA库,通过SELEX技术,以炭疽牙直菌疫苗株A．16R的芽孢为靶标进行15轮的筛选,利用生物素－亲和素显色系统判断寡核苷酸与牙孢的结合活性,结果：随着筛选轮数的增加,PCR扩增电泳条带渐单纯,寡核苷酸与芽孢结合后显色,D值提高9倍以上,D值随适配子结合量的增加而递增,结论：已初步筛选到与炭疽芽孢具有亲和力的适配子。     

多重PCR快速检测食品中肠出血性大肠杆菌

本研究建立了一种快速检测食品中肠出血性大肠杆菌 (EHEC)的多重PCR方法。将样品增菌后 ,采用快速裂解吸附法制备模板 ,用多重PCR同时检测EHEC的三种毒力基因eaeA、hlyAB、slt1 2 ,相应扩增片段依次为 110 9、30 2、2 2 8bp。检测了 6 0株大肠杆菌和其它菌种。结果 12株大肠杆菌O15 7∶H7、1株大肠杆菌O2 6∶H11和 1株大肠杆菌O111∶H8同时检出上述三种基因 ,2株EAEC检出了eaeA基因 ,1株VTEC检出了slt1 2基因 ,其余 43株大肠杆菌和非大肠杆菌未检出上述基因。检测食品中EHEC时 ,从样品增菌培养到整个检测过程结束不超过 8小时 ,方法的检出限≤ 1 6cfu g(ml)。检测的 12 6份食品样品中 ,3份检出了EHEC(包括牛肉、猪肉和生菜各 1份 )。实验结果表明该法是一种特异性强、敏感性高、省时、省力的EHEC检测方法。     

荧光定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究

目的利用LightCycler建立一种简便、特异的实时荧光定量PCR检测方法,用于炭疽芽孢杆菌的快速检测。方法采用SYBR GreenⅠ随机掺入法,利用本实验室建立的实时荧光定量PCR反应体系,根据炭疽芽孢杆菌荚膜和水肿因子设计引物,同时检测两个毒力相关质粒的存在,检测其灵敏度和特异性,并以盲测试验进行验证;在此基础上鉴定14株炭疽芽孢杆菌,并测试该法检测土壤模拟污染标本的灵敏度,实验中设置内对照以排除假阴性结果的存在。结果炭疽杆菌基因组DNA的检测灵敏度可达每反应体系0.53pg,两个克隆株提取质粒的检测限分别为每反应体系12拷贝、140拷贝;检测14株炭疽芽孢杆菌及29株非炭疽芽孢杆菌的PCR扩增结果表明,炭疽芽孢菌DNA均出现特异的扩增结果,29株对照菌的DNA均为阴性;土壤模拟污染标本检测灵敏度可达每反应体系36个芽孢;20次重复实验结果表明其平均值与标准差为14.602±0.640。结论该方法检测炭疽芽孢杆菌具有简便、快捷、灵敏度高和特异性好的特点,为临床诊断、环境监测、卫生防疫等方面,快速检出炭疽芽孢杆菌提供了有利的手段。