免陈旧性关节软骨缺损模型的制备

背景：临床所见的骨性关节炎的软骨缺损大多为不规则的、深至软骨下的陈旧性骨缺损，但目前关节软骨缺损动物模型多为新鲜骨缺损。目的：观察制动时间和缺损大小对兔关节软骨陈旧性缺损的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2004-04／2006-05在南方医科大学创伤骨科组织工程实验室完成。材料：6周龄新西兰大白兔6只，随机分为6，12周观测组两组，每组3只6侧膝关节。干预：无菌操作下显碌露两侧股骨髁关节面，用牙科钻打圆形孔，每孔直径4mm，深度约3mm，达软骨下骨，术毕下肢固定，笼中自由喂养，后膝伸直位制动12周复制的膝关节陈旧性软骨缺损模型。主要观察指标：制动6，12周模型取出关节软骨缺损区标本进行大体观察和组织学切片观察。结果：6只兔均进入结果分析。兔关节软骨及周围组织情况：12周时炎症反应较6周轻，纤维瘢痕化较6周明显：12周时出现增生性改变，尤其是关节周围的肌腱、关节囊、韧带、滑囊等结缔组织较6周时更易形成瘢痕、粘连、纤维化等陈旧性损伤组织学改变。12周后可见自行修复不完全，缺损明显。结论：构建的兔后膝股骨髁关节面软骨缺损直径4mm，深度约3mm，达软骨下骨，符合实验要求，适用于骨性关节炎的基础实验。     

不同直径螺钉对复合磷酸钙骨水泥强化骨质疏松股骨颈生物力学的影响

目的评价不同直径螺钉固定时添加复合磷酸钙骨水泥(CCPC)对骨质疏松股骨颈生物力学的影响。方法采用16个股骨上段标本,随机分为两组,深螺纹强化组和浅螺纹强化组。结果两组均灌注CCPC,深螺纹组和浅螺纹组的螺钉初始松动加载力分别为(329±35)N,(285±26)N;最大轴向拔出力分别为(370±22)N,(306±24)N,两组有显著性差异(P<0.01)。结论螺钉直径与骨质疏松股骨颈强化后的稳定性有关。     

成人骨髓源成骨细胞体外培养条件下的生物学特性

背景骨髓基质干细胞作为种子细胞构建组织工程化骨组织,具有广泛的应用前景,可作为首选的骨组织工程种子细胞来源.尽管目前对于动物骨髓基质干细胞向成骨细胞诱导分化的研究已不断深入,但对于成人骨髓基质干细胞大量诱导分化为成骨细胞的研究尚处于探索阶段.目的研究成人骨髓基质干细胞在体外培养条件下的生物学特性及成骨能力,探讨简便易行的成人成骨细胞体外培养方法,为骨组织工程选择理想的种子细胞来源.设计采用完全随机实验对照单盲设计进行横断面研究.地点和对象实验在解放军第一军医大学南方医院全军创伤骨科中心完成,对象为健康成年志愿者骨髓组织.干预抽取骨髓组织,在100 mL/L胎牛血清的DMEM培养基中,置于37℃,50 mL/L CO2湿化空气孵箱中培养,传代后改用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养基培养,用倒置相差显微镜、光镜(HE染色)、扫描与透射电镜观察细胞的形态特征和增殖分化情况,并测定培养细胞的生长曲线(MTT法)、碱性磷酸酶活性和钙结节形成能力.主要观察指标形态学观察和生物学特性检测.结果原代和传代培养的细胞具有活跃的增殖能力,诱导培养2周后,细胞呈多角形或梭形,具有多个突起可互相联结,透射电镜下观察细胞核较为幼稚,细胞器丰富.诱导分化后的细胞可分泌碱性磷酸酶,改良钙钴法染色阳性率可达74.2%,并可形成钙结节,具有与典型的成骨细胞相似的形态特征及生物学功能.结论成人骨髓基质干细胞取材安全方便,易于诱导分化为成骨细胞;本实验方法可作为骨组织工程种子细胞培养的常规方法.     

软骨组织工程种子细胞的来源、培养和评价

可靠而安全的软骨种子细胞来源是保证软骨组织工程持续深入研究的前提。本介绍了目前软骨组织工程种子细胞来源、培养和评价等方面的最新研究进展。     

去蛋白脱钙皮质骨基质微颗粒用于骨髓基质干细胞体外培养的相关研究

目的 比较牛去蛋白脱钙皮质骨基质(bDpDBM)微颗粒和牛脱钙皮质骨基质(bDBM)微颗粒用于体外干细胞培养的优缺点,探讨其作为微载体制备候选材料的可行性. 方法 冷冻粉碎牛四肢皮质骨,筛选出直径为200 ～ 500μm的微颗粒,按照常规方法进行脱脂、脱钙、脱蛋白处理.设bDpDBM和bDBM微颗粒为研究对象,用于静态条件下骨髓基质干细胞(BMSCs)的培养,比较两组微颗粒对干细胞增殖及功能保持的影响,分析其用于BMSCs培养的可行性. 结果 两组微载体进行培养第14天后显示bDpDBM组细胞扩增较bDBM组快,差异有统计学意义(P＜0.05).经bDBM组培养的BMSCs的ALP定量及胞内钙含量明显较bDpDBM组多,差异有统计学意义(P＜0.05).而bDpDBM颗粒培养的BMSCs经诱导可向成骨、成脂及成软骨三系分化. 结论 bDpDBM由于去除了脱钙骨基质中的活性诱导成分,培养增殖效率增高,可较好地保持干细胞表型,适宜用作体外大量扩增BMSCs的微载体候选材料.     

新生儿先天性皮肤并指畸形误治1例分析

儿童先天性皮肤并指畸形是先天性手畸形中发生率较高和较常见的畸形 ,是由于胚胎发生 7～ 8个月时 ,手指分化局部出现停顿所致[1 ] 。随着独生子女的增加和患儿父母亲对此疾病的日益重视 ,对修复的要求亦愈来愈高 ,为避免给患儿造成身心发育障碍 ,多要求在早期实施手术。由于儿     

第2跖背动脉皮瓣移植修复单手指大面积软组织缺损

目的探讨第2跖背动脉皮瓣移植修复单手指大面积缺损的手术疗效。方法在解剖学基础上,采用第2跖背动脉皮瓣移植修复单手指大面积软组织缺损43例。结果43例皮瓣全部成活。术后随访6~10个月,移植皮瓣外形良好,质地、色泽良好,厚度适中。感觉恢复满意,两点分辨觉平均达5~8mm。结论应用以第2跖背动脉皮瓣移植修复单手指大面积软组织缺损,其血供可靠,手术简便、对供区破坏小,是一种值得推荐的方法。     

新技术再造学科链 新时代诠释新骨科

近代历史上发生过3次重大的科技革命。18世纪末,蒸汽机的发明和使用引起了第一次科技革命;19世纪末,电力的发现和使用引起了第二次科技革命;第二次世界大战后,特别是近30年来先后出现了电脑、能源、新材料、空间、生物等新兴技术,引起了第三次科技革命。第三次科技革命无论在规模、深度与影响上都远远超过前2次。当前,新科技革命与产业变革正蓄势待发。历史已多次证明,每一次科技革命与产业变革都将对世界发展格局产生重大影响。新科技革命正以人工智能、物联网、能源互联网、生命创制等为核心快速孕育发展,对人类社会很可能带来前所未有的影响和变革。     

骨与关节损伤治疗中存在的问题与对策

尽管骨关节损伤治疗已取得巨大进展,但仍存在许多问题,主要包括:对骨折治疗理念转变和微创外科概念的错误理解,对骨折治疗技术的不正确使用,忽视骨折分类方法和功能评定标准.正确的分析和解决这些问题会进一步促进创伤骨科临床实践和科研的进步.     

自体富血小板血浆替代动物血清体外诱导培养人骨髓基质干细胞的实验

目的:用一种新的人骨髓基质干细胞培养方法,以满足细胞培养过程应中对各类细胞因子的需求,同时尽量减少细胞培养过程中动物源性抗原物质的引入,达到组织工程骨临床应用中细胞的数量与生物学特性要求。方法:实验于2004-03/2005-03在南方医科大学组织工程实验室完成。①自体富血小板血浆的获取:将抽取的自体200mL,加抗凝剂混匀,两次离心。第1次在20℃,3000r/min离心10min。取上清及分界面下3mm部分置另一离心管中,第2次在20℃,以3600r/min离心15min。弃上层3/4余部分在旋涡振荡器上轻震荡使混匀,即为富血小板血浆。,剩将富血小板血浆与催化剂溶液(100g/L氯化钙、400IU/mL凝血酶)含以体积比9∶1混合,混匀后以0.22μm滤膜过滤即为富血小板血浆复合因子萃取液。②人骨髓基质干细胞的获取和培养:10名成年健康志愿者(排除其他系统疾病),男7名,女3名;15～35岁,平均年龄27.3岁。抽取骨髓5mL。将获得的有核细胞以2×10接种于10cm培养瓶(100mL/L72富血小板血浆配比低糖DMEM)培养。传代细胞用含100mL/L富血小板血浆,50mg/L抗坏血酸,1×10-8mol/L地塞米松,1×10-3mol/Lβ-甘油磷酸钠诱导培养,快速扩增后,采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察各细胞形态及细胞增值情况,碱性磷酸酶染色与钙结节染色等方法对细胞进行生物学特性检测。结果:①人骨髓基质干细胞形态学观察结果:人骨髓基质干细胞接种后2～4h开始贴壁,24h后细胞完全贴壁,呈多角型、梭型。6～8d后,细胞可长满瓶底并呈现单层细胞融合。传代培养后细胞生长迅速,传代诱导后,接种细胞一两天可长满瓶底。细胞为长梭型或不规则多边形,并有伪足伸出,胞核位于细胞一端。细胞生长至第8代生长明显变缓,10代以后细胞内开始出现颗粒样沉积物,并有细胞脱落飘浮于液体中。扫描电镜观察,黏附细胞为梭型或多角型表现,并有多个突起呈不规则形状。②钙结节茜素红染色结果:第3代细胞培养融合后,继续培养至形成密集的细胞团簇,中心出现细胞基质的沉积,茜素红染色可以清晰的显示钙结节。③碱性磷酸酶染色:细胞诱导培养第3代后可见胞质内有大量灰黑色颗粒或块状沉淀,呈现碱性磷酸酶染色阳性。结论:①以自体富血小板血浆替代动物血清体外诱导培养人骨髓基质干细胞,碱性磷酸酶染色与钙结节染色结果显示细胞具有良好的成骨细胞生物学特性。②其所培养的细胞数量及生物学特性能快速达到临床应用的需求,是一种良好的培养方法。