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目的 探讨龙虾肽酶样金属内肽酶(ASTL)抗体中和ASTL对人宫颈癌ME-180细胞放射敏感性的影响。 方法 培养人宫颈癌ME-180、HeLa细胞,根据细胞处理方法的不同,按以下方式进行分组。(1)将ME-180细胞分为4组:对照组、照射组(4 Gy)、ASTL抗体组、ASTL抗体+照射组(4 Gy),采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验检测每组细胞的增殖能力与存活情况,并于照射后0、24、48、72 h采用免疫荧光、Western blot实验检测ASTL在细胞中的定位情况。(2)将ME-180细胞分为2组:照射组、ASTL抗体+照射组,分别进行0、2、4、8 Gy照射,并采用克隆形成实验检测每组细胞的增殖能力。(3)将HeLa细胞分为2组:照射组、ASTL抗体+照射组,分别进行0、2、4、8 Gy照射,采用MTT实验检测细胞的存活情况。(4)将ME-180细胞分为2组:短发夹RNA对照组(sh-对照组)、短发夹RNA ASTL转染组(sh-ASTL组),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot实验检测蛋白激酶B(AKT)等靶基因的表达情况;同时,分别用0、5、10 nmoL/L的抗体处理ME-180细胞,采用Western blot实验检测抗体中和对靶基因表达情况的影响。(5)将ME-180细胞分为2组:对照组、照射组(4 Gy),采用Western blot实验检测ASTL、AKT等靶基因的表达情况。以上照射均使用137Cs γ射线照射源,剂量率为1 Gy/min。组间比较采用独立样本 t检验。 结果 (1)EdU染色实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组(4 Gy)抑制了ME-180细胞的增殖,差异有统计学意义(t=9.25,P<0.05);MTT实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组(4 Gy)在照射后24、48、72 h时,ME-180细胞生长速度明显降低,且差异均有统计学意义(t=5.17、10.32、14.27,均P<0.05)。免疫荧光、Western blot实验结果显示,4 Gy照射后24 h时,ME-180细胞中ASTL在细胞质的定位显著增加,照射后48~72 h,ASTL重新定位于细胞膜上。(2)克隆形成实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组能够抑制8 Gy照射后ME-180细胞的增殖,且差异有统计学意义(t=7.63,P<0.05)。(3)HeLa细胞MTT实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组能够降低2、4、8 Gy照射后HeLa细胞的存活率,且差异均有统计学意义(t=4.27、9.66、15.71,均P<0.05)。(4)qRT-PCR实验结果显示,ASTL干扰片段转入后,AKT的表达水平下调(t=13.94,P<0.05),同时,Western blot实验结果表明,ASTL干扰或加入ASTL抗体能够降低AKT等靶基因的表达水平。(5)Western blot实验结果显示,与对照组相比,照射组(4 Gy)ASTL、AKT等靶基因的表达水平显著升高。 结论 人宫颈癌ME-180细胞的放射敏感性与ASTL的水平相关,ASTL抗体或sh-ASTL能够增强照射后ME-180细胞的放射敏感性。 相似文献
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目的 研究γ射线照射对肿瘤细胞的B细胞易位基因2(BTG2)表达水平的影响.方法 应用RT-PCR方法研究电离辐射对肿瘤细胞BTG2 mRNA水平的影响;应用Western blot方法测定电离辐射对肿瘤细胞BTG2蛋白表达水平的影响.结果 与未照射对照细胞相比,3 Gyγ射线单次剂量照射明显提高了人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和人宫颈癌细胞系C33A、HeLa中的BTG2蛋白的表达水平.γ射线照射人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231导致了照射剂量和时间依赖性的BTG2表达水平的升高,而且这种改变既表现在BTG2 mRNA水平上,也反映在BTG2蛋白水平上.结论 BTG2是一种新的辐射诱导DNA损伤的反应基因,进一步研究将为BTG2作为肿瘤放射治疗的疗效和预后评价指标提供实验基础和依据. 相似文献
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目的探讨乳腺癌和卵巢癌易感基因BRCA1对不同肺癌放射治疗敏感性的影响。方法采用脂质转染方法将pcDNA3-BRCA1表达质粒转染到人肺腺癌细胞获得BRCA1高表达转染细胞,将BRCA1 siRNA转染到7种人肺腺癌细胞获得BRCA1基因沉默的转染细胞;采用Western blot方法检测BRCA1蛋白表达水平的变化;γ射线照射后,采用细胞克隆形成方法检测BRCA1高表达对两种肺癌细胞放射敏感性的影响。结果不同肺癌细胞的放射治疗敏感性与其所含的BRCA1表达水平成负相关。与"空"pcDNA3质粒细胞和无转染母细胞的对照组相比,提高BRCA1表达水平可导致肺癌细胞对放射治疗的敏感性明显下降(P〈0.05)。BRCA1诱导的细胞耐辐射现象可以在A-549和HTB58两种肺癌细胞系观察到。而转染BRCA1 siRNA的NIH-H2170肺癌细胞导致BRCA1基因沉默的转染细胞则放射治疗敏感性明显增加(P〈0.05)。结论该研究首次发现,BRCA1表达水平与肺癌细胞的放射敏感性有着密切的关系,并首次证实改变BRCA1的表达水平可以明显影响肺癌细胞的放射治疗敏感性。 相似文献
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目的:探讨ATM对电离辐射照射的毛细血管扩张共济失调症(ataxia telangiectasia,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT细胞(ATSBIVA)端粒酶活性的影响。方法:以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞(GM0639)为对照,应用基于PCR的端粒重复扩增技术(telomeric repeat amplification protocal,TRAP)与高效液相色谱(HPLC)技术,定量分析细胞分别经0、1、3、5 Gy 60Coγ射线照射后以及经3 Gy 60Coγ射线照射后继续培养2、24、48、72 h,AT、空载体AT、ATM -AT和GM细胞的端粒酶活性的变化。结果:未照射时,除GM细胞外,AT、空载体AT、ATM -AT细胞均呈现较高的端粒酶活性表达,但ATM -AT细胞的端粒酶活性明显低于AT和空载体AT细胞的端粒酶活性(P<0.01),而后二者无明显差异(P> 0.05);电离辐射照射后,AT、空载体AT、ATM -AT和GM细胞的端粒酶活性均呈剂量依赖性和时间依赖性增强,且在相同剂量点与时间点,ATM -AT细胞的端粒酶活性高于GM细胞(P<0.01)(除5 Gy计量点外),但低于AT和空载体AT细胞(P<0.01),而后二者无明显差异(P>0.05)。结论:电离辐射可诱导细胞端粒酶活性表达;并且细胞端粒酶活性水平随剂量与时间的增加而增加;ATM可下调AT细胞端粒酶活性水平。推测端粒酶参与电离辐射诱导DNA损伤的修复。 相似文献
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时间因素对电离辐射后AT细胞hTERT mRNA表达的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的研究时间因素对电离辐射后共济失调性毛细血管扩张(ataxia telangiectasia,AT)综合征患者皮肤的成纤维细胞系AT细胞(AT5BIVA)hTERT mRNA表达的影响。方法以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞(GM0639)为对照,细胞经5Gy(剂量率1.0Gy/min)^60 Coγ射线照射后继续培养2、24、48、72h。应用RT-PCR法,观察AT细胞、ATM^+-AT细胞和GM细胞的hTERT mRNA表达的变化。结果照射后细胞hTERT mRNA的表达随培养时间的增加而增加;AT细胞hTERTmRNA的相对表达量高于ATM^+-AT细胞和GM细胞(P〈0.05),后两者无显著性差异(P〉0.05)。结论电离辐射能诱导细胞hTERT mRNA的持续表达;ATM能下调AT细胞hTERT mRNA的表达。 相似文献
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【摘要】hUHRF1是最近发现的一个新基因,与鼠mUHRF1基因同属UHRF家族,目前,有关鼠mUHRF1基因的功能研究较多,且多以胚胎干细胞为研究对象;hUHRF1基因编码的蛋白序列与鼠mUHRF1之间有73.7%的同源性,那么,hUHRF1基因是否也具有类似鼠mUHRF1基因的功能?该基因在体细胞中的功能又如何?因此,有关hUHRF1基因功能的研究成为必然,现就相关的内容综述如下。 相似文献
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目的 研究miR-27b-3p对乳腺癌细胞辐射抵抗的影响。方法 通过检索基因表达(GEO)数据库,筛选分析miR-27b-3p在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达水平。利用实时荧光定量PCR技术分析其在不同乳腺癌细胞系中的表达水平。通过细胞克隆形成、免疫荧光和5-乙炔基-2''-脱氧尿苷(EDU)检测技术评价miR-27b-3p对乳腺癌细胞辐射抵抗作用。采用荧光素酶报告基因技术确定miR-27b-3p的靶基因PLK2,并在乳腺癌细胞中进一步验证miR-27b-3p的辐射抵抗作用。结果 与正常乳腺组织和细胞相比,miR-27b-3p在乳腺癌组织(t=2.99,P<0.01)和乳腺癌细胞中表达水平显著上调(t=21.21、32.88,P<0.05)。尤其在抗辐射细胞MCF-7R中升高更加明显(t=25.63,P<0.05)。过表达miR-27b-3p增强了MCF-7细胞的克隆形成能力(t=10.32,P<0.05),且随着辐照剂量的增加,miR-27b-3p对MCF-7增殖能力的保护效应逐渐凸显(t=8.77、8.26、8.03,P<0.05);干扰miR-27b-3p则抑制MCF-7R细胞克隆形成数(t=40.00,P<0.05),且随着辐照剂量的增加,进一步削弱了MCF-7R细胞的增殖能力(t=8.54、8.32、8.23,P<0.05)。报告基因实验结果表明,PLK2是miR-27b-3p的直接靶标。过表达PLK2抑制了miR-27b-3p介导的乳腺癌细胞辐射抵抗(MCF-7:t=9.66,P<0.05;MCF-7R:t=6.42,P<0.05)。结论 miR-27b-3p可通过靶向PLK2提高乳腺癌细胞的辐射抗性。 相似文献