聚乙烯亚胺修饰的荧光素钠纳米颗粒在荧光素眼底血管造影术的应用和安全性

目的　探讨聚乙烯亚胺修饰的荧光素钠（PEI-NHAc-FS）纳米颗粒（nanoparticles,NPs）在荧光素眼底血管造影术的应用和安全性。方法　选取90只健康棕色雄性挪威大鼠作为实验动物。将1 mL 荧光素钠（200 g·L^-1）加入10 mol的1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（EDC）混合物中搅拌30 min,再加入10 mol的N-羟基琥珀酰亚胺搅拌3 h。然后将该溶液加入到5 mL聚乙烯亚胺（polyethyleneimine,PEI）（76 g·L^-1）中,剧烈搅拌3 d获得PEI-NH₂-FS。将2 mL三乙胺加入到PEI-NH₂-FS原液中,30 min后再将1 mL的乙酸酐加入混合物中搅拌24 h,合成PEI-NHAc-FS。使用核磁共振波谱仪和紫外可见光吸收光谱观察PEI-NHAc-FS的结构,并对合成的NPs结构进行表征;CCK-8检测其细胞毒性。选取30只大鼠,根据荧光素钠和PEI-NHAc-FS NPs的浓度（5 g·L^-1、10 g·L^-1、50 g·L^-1）将大鼠分为6组,每组5只,分别于注射前及注射后5 min、20 min、30 min和60 min进行眼底摄像,采集大鼠眼底血管荧光素图像。用激光诱导大鼠脉络膜新生血管模型后,取10只大鼠,随机分为10 g·L^-1荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组,每组5只,分别于注射前及注射后5 min、20 min、30 min和60 min通过眼底血管造影成像观察病灶处渗漏。另取40只大鼠,随机分为10 g·L^-1荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组,每组20只,于注射后10 min、20 min、30 min和60 min进行荧光冰冻切片。将10只大鼠随机分为对照组（注射生理盐水）和PEI-NHAc-FS NPs组,每组5只,行组织切片HE染色和视网膜电图检测。采用HE染色和视网膜电图观察PEI-NHAc-FS NPs在体内的生物安全性。结果　通过核磁共振和紫外可见光吸收光谱观察到荧光素钠与PEI成功耦合。发射荧光光谱显示,游离荧光素钠和PEI-NHAc-FS NPs的最大发射波长分别出现在546 nm和544 nm处。CCK-8检测结果表明,不同浓度的荧光素钠和PEI-NHAc-FS NPs处理人脐静脉内皮细胞12 h、24 h后,细胞活性差异无统计学意义（P>0.05）。即使用10 μmol·L^-1 PEI-NHAc-FS NPs处理24 h和未处理之间细胞存活率差异亦无统计学意义（P>0.05）。在5 g·L^-1游离荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组中,均仅显影视网膜主要血管,不能用于荧光素眼底血管造影的诊断。而在10 g·L^-1游离荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组可清晰地显示视网膜主要血管及微血管的结构,且在注射后30 min时血管荧光强度基本相同。PEI-NHAc-FS NPs组在60 min时荧光强度已基本消失,而游离荧光素钠组仍保持较强的荧光强度。10 g·L^-1游离荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组荧光素眼底血管造影结果显示,经尾静脉注射造影剂后,视网膜血管内可见荧光成像;同时病灶部位可见荧光渗漏。游离荧光素钠组在视网膜组织中荧光较强,对视网膜组织有较强的吸附和渗透作用,而PEI-NHAc-FS NPs组在视网膜组织中荧光较弱,对视网膜组织吸附较弱。HE染色和视网膜电图对造影剂进行体内生物安全性分析结果显示,PEI-NHAc-FS NPs安全性较好。结论　PEI-NHAc-FS NPs能够安全、有效地用于荧光素眼底血管造影。     

腹腔镜下直肠癌手术的不同麻醉处理临床研究

目的:研究腹腔镜下直肠癌手术的不同麻醉处理的应用价值.方法:选择本院收治的需实施直肠癌手术的患者112例,分两组,每组56例.对照组采用硬膜外麻醉,实验组使用全麻复合硬膜外麻醉,比较两组的手术、气腹及苏醒时间、不良症状的发生情况,以及心率、收缩压和舒张压.结果:比较两组的手术时间和气腹时间,没有明显差异(P＞0.05)...     

柴胡疏肝散加减治疗腹泻型肠易激综合征35例临床观察

目的:观察柴胡疏肝散加减治疗腹泻型肠易激综合征(IBS)肝郁脾虚证的临床疗效。方法:将70例腹泻型IBS肝郁脾虚证患者随机分为两组,治疗组35例予柴胡疏肝散加减治疗,对照组35例予匹维溴铵合思密达治疗。两组疗程均为3个月。观察两组主要临床症状评分,综合评价两组的临床疗效。结果:总有效率治疗组为94.3%,对照组为74.3%,两组比较,差异有统计学意义(P0.05);治疗后两组症状积分均有改善,且治疗组改善程度明显优于对照组(P0.05)。结论:柴胡疏肝散加减治疗腹泻型IBS肝郁脾虚证疗效优于西药匹维溴铵合思密达治疗,并且可以明显改善症状,提高患者生活质量。     

基因表达谱芯片技术筛选NS5ATP2(615)蛋白反式调节基因

目的:对新基因NS5ATP2(615)转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能.方法:应用生物信息学(bioinformatics)技术,分析我们研究组通过抑制消减杂交(SSH)技术筛选得到的新基因NS5ATP2(615)的全长编码序列,构建NS5ATP2的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP2(615).应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5ATP2(615)和pcDNA3.1(-)空载体分别转染的HepG2细胞的mRNA的差异性表达进行检测.结果:确定基因NS5ATP2(615)由615nt组成,编码204aa的蛋白.基因表达谱芯片所检测的1 152条目的基因均为GenBank中登录的基因,NS5ATP2(615)表达质粒转染的细胞有40条差异表达基因,其中18条基因表达增强,22条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、肿瘤的发生密切相关.结论:基因表达谱芯片技术对于初步探索新基因的功能提供重要的资料.本实验结果为进一步阐明NS5ATP2(615)生物学功能及HCV NS5A的致病机制提供了理论依据.     

基于网络药理学和实验验证探讨香连化浊方对慢性萎缩性胃炎的作用机制

目的 基于网络药理学及动物实验探讨香连化浊方治疗慢性萎缩性胃炎（CAG）的作用机制,为临床推广应用提供科学依据。方法 基于网络药理学预测得到香连化浊方治疗CAG的可能作用靶点和通路,采用水杨酸钠、N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）及饥饱失常多因素诱导大鼠CAG模型,给予香连化浊方和摩罗丹干预60 d。给药结束后处死大鼠,苏木素-伊红（HE）法观察各组胃黏膜组织形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELSIA）检测大鼠血清中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、血管内皮生长因子（VEGF）的含量;免疫组织化学法（IHC）检测各组胃黏膜B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）家族抗凋亡因子（Bad）、细胞抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达含量。结果 最终获得香连化浊方潜在活性成分241种,核心靶点53个。香连化浊方可影响细胞增殖凋亡、炎症反应、DNA代谢过程的调控、细胞对氧化还原的反应等多个生物过程,影响磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路、TNF信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、癌症及癌症相关等多个信号通路。动物模型验证结果,香连化浊方能够降低CAG大鼠血清中IL-6、TNF-α、IL-1β、VEGF水平;降低胃组织中Bad、Bcl-2蛋白表达水平。结论 香连化浊方可通过参与细胞增殖、凋亡和炎症反应等生物过程,调控PI3K/Akt信号通路,改善CAG胃黏膜损伤。     

Pellino 1、锌指蛋白A20、NF-κB P65及IL-6在胎膜早破中的表达及意义

目的 探讨胎膜早破（PROM）患者胎膜组织Pellino 1、锌指蛋白A20、核因子-κB（NF-κB）P65及羊水白细 胞介素-6（IL-6）的表达及其相关性,为深入了解胎膜早破的发生发展机制提供新途径。方法 分别选择30例足月 胎膜早破（tPROM）、未足月胎膜早破（pPROM）患者及正常妊娠晚期妇女（对照组）,应用免疫组化染色法及Western blot检测胎膜组织Pellino 1、锌指蛋白A20、NF-κB P65表达部位及含量,ELISA法测定羊水中IL-6水平,并分析蛋白 表达的相关性。结果 PROM组胎膜组织Pellino 1、NF-κB P65及羊水IL-6表达水平高于对照组（P＜0.05）,胎膜组 织锌指蛋白 A20 表达低于对照组（P＜0.05）;pPROM 组胎膜组织 Pellino 1、NF-κB P65 表达及羊水 IL-6 水平高于 tPROM组（P＜0.05）,pPROM组锌指蛋白A20表达低于tPROM组（P＜0.05）。胎膜组织中Pellino 1、NF-κB P65表达 与羊水IL-6水平呈正相关（P＜0.01）,锌指蛋白A20表达与羊水IL-6水平呈负相关（P＜0.01）。结论 Pellino 1、NF- κB P65及炎性细胞因子IL-6表达水平升高、锌指蛋白A20表达水平降低在胎膜早破发生中发挥重要作用。     

危重病患者并发多器官功能衰竭临床分析

多器官功能障碍综合征 (MODS)是危重病患者死亡的主要原因之一。通过对我院 1 999年 8月至 2 0 0 2年 8月明确诊断为MODS的 1 0 2例患者的临床资料的回顾性分析 ,以提高对危重病患者发生MODS的认识。1　临床资料1 1　一般资料　 1 0 2例MODS患者 ,男 78例 ,女2 4例 ,年龄 2 3～ 84岁 ,平均 48 7岁。全部患者发生MODS前均有全身炎性反应综合征 (SIRS)。SIRS ,MODS诊断标准依文献 [1 ,2 ]。 1 0 2例患者中 ,严重创伤 43例 ,创伤严重程度评分 (ISS)均≥1 6分 ,平均 ( 31 37± 8 2 6)分 ,严重感染性疾病 32例 ,脑血管疾病 1 7例…     

细胞间粘附分子与缺血再灌注脑损伤

随着分子生物学和分子免疫学的发展 ,发现脑缺血后的白细胞浸润所致的炎性反应在缺血性脑损害的发生、发展中起重要作用 ,而周围血中白细胞向缺血区迁移的主要原因在于血管内皮细胞及白细胞表面的粘附分子的表达。粘附分子以配体 受体相对应的形式发挥作用 ,介导细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间或细胞 基质 细胞之间的粘附 ,在过去的十年中是各国科学家们热衷于研究的课题之一。 1986年Ｒｏｔｔｅｌｅｉｎ等人在研究淋巴细胞的粘附中发现一种ＬＦＡ 1的配体 ,是细胞粘附必需的 ,定名为细胞间粘附分子 (ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒａｄ…     

乙型肝炎病毒基因组中前-X-编码基因启动子序列的确定及转录活性的鉴定

利用长距离精确聚合酶链反应 (LA PCR)扩增慢性乙型肝炎患者血清来源的 5个全长的HBV基因组DNA ,在分析不同克隆之间的序列变异程度时 ,发现所获得的 5个克隆在X区之前可能还存在一个开放读码框架 (ORF) ,长度 16 8bp ,编码 5 6个氨基酸残基(aa) ,并将其暂时命名为前 X(pre X)。为了解前 X编码区上游DNA序列是否具有启动子活性 ,选取翻译起始密码子ATG上游 2 2 5bp的基因片段 ,将其克隆至报告基因表达载体pCAT3中 ,构建pCAT3 前 X promoter表达载体 ,以该质粒转染HepG2细胞 ,用ELISA法检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果发现 ,质粒 pCAT3 前 X promoter能够指导CAT的表达 ,吸光度 (A值 )是pCAT3的 3 5倍 ,提示pCAT3 前 X promoter中插入的DNA序列具有启动子活性 ,说明这一段基因序列中存在新的启动子区 ,为研究、界定前 X的ORF的存在提供了直接的依据。     

全平面及实时三维经食管超声心动图监测和引导微创非体外循环房间隔缺损封堵术

目前临床治疗房间隔缺损(ASD)的方法包括体外循环下直视修补缺损和心导管介入封堵两种方法.微创ASD封堵术是一种较新的治疗ASD的方法,本研究采用术中全平面及实时三维经食管超声心动图(TEE)实时监测引导治疗继发孔型ASD16例,现报告如下.