不同剂量137Csγ-射线辐射后造血干/祖细胞辐射敏感性差异研究

摘要：目的 探讨不同剂量137Csγ-射线照射后不同时间点C57 BL/6小鼠造血细胞放射敏感性的差异。方法 选取6~8周龄雄性C57BL/6小鼠72只,完全随机法分为对照组和照射组。照射组小鼠分别接受2、4、6 Gy137Csγ射线一次性全身照射,对照组小鼠接受假照射。小鼠分别于受照后14 d、35d和56d断颈处死,取外周血进行血象测定,取骨髓细胞测定有核细胞数目和造血干/祖细胞数目。结果 不同剂量照射后小鼠的外周血常规指标有明显变化,白细胞数目明显下降,其次是血小板数目,且具有剂量效应关系;在照射后14d,2Gy、4Gy和6Gy照射组小鼠骨髓有核细胞数目与对照组比较分别下降21.9%、39.9%和54.4%（t=4.311、6.401、8.007,P<0.05）;照射后35d和56d,6Gy照射组小鼠骨髓有核细胞和造血祖细胞数目显著低于对照组（t=4.185、3.596,P<0.05）。照射后14d、35d和56d,2Gy、4Gy和6Gy照射组小鼠骨髓造血干细胞数目持续低于对照组（t=9.706、3.427~7.465,P<0.05）。结论 不同剂量137Csγ-射线照射对小鼠造血系统造成不同程度的损伤,造血祖细胞较造血干细胞辐射敏感,且辐射对造血干细胞造成的损伤是持久性的。     

电离辐射对不同品系小鼠造血功能的影响

目的 探讨电离辐射对不同品系小鼠造血功能损伤的影响。方法 用¹³⁷Csγ射线对IRM-2小鼠、ICR小鼠、615小鼠进行一次性全身4.0Gy照射,建立辐射损伤模型,检测小鼠不同时间外周血白细胞(WBC)、骨髓有核细胞(BMC)及DNA的损伤情况。结果 照射后第2d,三品系小鼠的WBC、BMC及DNA降至最低值,照射后第9d,是一快速恢复期,第21d时,呈现较大幅度升高,IRM-2小鼠的WBC、BMC、DNA分别恢复到正常值的52.0%、90.8%、87.3%,ICR小鼠分别恢复到正常值的60.7%、82.1%、80.1%,615小鼠WBC、BMC恢复到正常值的50.8%、75.4%。IRM-2小鼠与ICR、615小鼠比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 IRM-2小鼠经4.0Gyγ射线照射后,造血功能比ICR、615小鼠恢复的要快。     

E838联合γ射线对小鼠肺腺癌LA795抑瘤作用的实验研究

目的本研究对E838在体内抑瘤效果及合用137Csγ射线是否具有抑瘤增效作用进行探讨。方法LA795肿瘤组织用生理盐水稀释约3.5×107/m l瘤细胞。取细胞悬液0.2m l/只接种于小鼠腋部皮下,24h后将荷瘤小鼠随机分为对照组、单放组、E838药物组(5、7.5、10mg/kg)和药物合用照射组、环磷酰胺组。药物组与药物合用照射组ip相同剂量给药,每日1次,连续7d,环磷酰胺(25mg/kg)隔日1次×4。药物合用照射组于给药的第4d进行全身1Gy照射,每日1次,连续5d。观察其抑瘤效果及相关的免疫学指标。结果E838三个剂量对小鼠LA795的抑瘤率分别为42.73、70.91和64.09%,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),骨髓有核细胞数水平有所升高,合用137Csγ射线能提高抑瘤效果,抑瘤率分别为63.63、75和68.64%(P<0.05),对肿瘤的杀伤作用高于单放组和单药治疗组。结论E838对小鼠肿瘤细胞具有良好的抑制作用,合用γ射线抑瘤疗效比E838更为明显,但没有显著性差异。调节机体的免疫功能是E838抗肿瘤作用的机制之一。     

肿瘤治疗的新靶标:肿瘤干细胞

近年来研究显示,在一些肿瘤中存在一些能够自我更新和分化增殖的干细胞即肿瘤干细胞。本文重点介绍了关于肿瘤干细胞的理论,研究现状,研究方法以及问题,推测肿瘤干细胞的深入研究将会对今后肿瘤防治产生巨大影响。     

E838联合γ射线对淋巴瘤荷瘤小鼠的协同抑瘤作用

 目的 本研究主要观察E838对小鼠移植性淋巴瘤的体内抑瘤效果及相关的生物学指标，探讨合用137Cs γ射线是否具有抑瘤增效作用。方法 取2～3mm3淋巴瘤瘤块接种于IRM 2小鼠腋部皮下，24h后将荷瘤小鼠随机分为对照组、单放组、E838低、中、高药物组及药物合用照射组、环磷酰胺组。药物组与药物合用照射组对应性腹腔注射相同剂量E838，每日1次，连续7天，环磷酰胺隔日1次×4。合用照射组于给药的第4天进行全身1Gy照射，每日1次，连续5天。观察各组小鼠骨髓有核细胞数和肿瘤抑制率。结果 E838 3个剂量对小鼠移植性淋巴细胞瘤的抑瘤率分别为(44.14±15.96)%、(70.74±11.17)%和(50.00±18.09)%，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)，骨髓有核细胞数与对照组相比则明显提高。E838合用137Csγ射线能提高抑瘤效果，抑瘤率分别为(65.43±2.13)%、(77.13±6.38)%和(67.55±11.17)%，(P<0.001)，对肿瘤的杀伤作用高于单放组和单药治疗组。结论 E838对小鼠肿瘤细胞具有良好的抑制作用，E838合用γ射线具有协同抑瘤作用，在适当剂量范围内可以促进荷瘤小鼠放疗后骨髓损伤修复。     

E838联合γ射线对小鼠肝癌H22抑瘤作用的实验研究

目的探讨E838药物对小鼠-肝癌H22的抑瘤效果及合用137Cs γ射线是否具有抑瘤增效作用。方法取小鼠肝癌H22肿瘤组织经研磨用生理盐水稀释成约5×107/ml个肿瘤细胞,接种于小鼠腋下,0.2ml/只。实验分对照组、单放组、E838药物组(5、7.5、10mg/kg)和药物合用照射组及环磷酰胺组。E838各组每日1次ip给药,连续7d;环磷酰胺隔日1次共4次,药物合用照射组于给药的第4天进行全身1Gy照射,每日一次,连续5d。结果E8385、7.5、10mg/kg剂量组对小鼠H22的抑瘤率分别为50.6%、62.73%和54.82%,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),小鼠骨髓有核细胞的数量均高于对照组,药物合用137Cs γ射线能提高抑瘤效果,对肿瘤的杀伤作用高于单放组和单药治疗组,抑瘤率分别为52.98%、67.61%和59.15%,结论E838对肝癌H22肿瘤细胞具有明显的抑制作用,合用γ射线具有抑瘤增效作用。     

shRNA靶向干扰NHERF1对PC-3M前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨shRNA靶向干扰钠氢交换调节因子(NHERF)1后对前列腺癌细胞PC-3M生物学行为的影响.方法 将pSuper.puro NHERF1 shRNA质粒和阴性对照质粒pSuper.puro luciferase shRNA分别转染人PC-3M前列腺癌细胞,经嘌呤霉素筛选,建立稳定低表达NHERF1的PC-3M细胞株.经Western印迹验证后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测肿瘤细胞增殖活性,采用划痕实验检测NHERF1-shRNA对前列腺癌PC-3M细胞迁移能力的影响,采用流式细胞仪检测NHERF1-shRNA对PC-3M细胞凋亡的影响,采用Western印迹检测NHERF1-shRNA对凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2表达的影响.结果 转染NHERF1-shRNA组比未转染及空载组细胞的增殖能力明显降低(F=62.63,P=0.004);转染NHERF1-shRNA组比未转染及空载组细胞的迁移率明显降低.相比于未转染PC-3M细胞和转染阴性对照质粒细胞,转染NHERF1-shRNA组细胞的凋亡百分比明显增加[(2.55±0.92)％和(11.98±3.28)％],达4倍以上(t=-2.392,P=0.001);Bcl-2蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达升高.结论 靶向NHERF1的序列特异性shRNA可抑制PC-3M细胞的增殖和迁移,并促进细胞凋亡.     

基因芯片表达分析4Gyγ射线对小鼠骨髓c-kit阳性细胞影响

目的 利用基因芯片技术分析经4 Gyγ射线照射后c-kit(CD117,正常表达于干祖细胞表面的细胞因子受体)阳性细胞与代谢过程相关的基因及信号通路表达变化.方法 利用磁珠分选系统分选出骨髓c-kit阳性细胞.实验分为对照组、4 Gy照射组.取1×106个c-kit阳性细胞进行照射,照射剂量率为0.99 Gy/min.照射后将细胞培养18h后取出,进行全基因组的高通量基因芯片检测,并进行Gene Ontology聚类分析和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes信号通路分析.结果 4Gyγ射线照射引起c-kit阳性细胞包括Pld5、Neu2、Bpgm、Alas2、Satl1、Rdh16、Mccc1、Sat2、Smug1、Cml5、Adhfe1、Idh3a、Slc27a5在内的13个基因表达上调3倍以上,包括Acss2、Phgdh、Psat1、Glb1、Gpam、Dus3l、Fuca2、Impdh1、Dlat、Glb1、Enpp4、Prim2、Mettl10、Slc27a2、Dera、Qdpr、Dus1l、Cdyl2、Dhodh、Srr、Spr、Mical2在内的22个基因表达下调3倍以上,这些基因主要参与嘌呤代谢、嘧啶代谢、三羧酸循环等信号通路.结论 4Gyγ射线照射能引起c-kit阳性细胞中与代谢过程相关的许多基因表达发生变化,这些变化的基因有待进一步的实验验证.     

益气养阴方对白血病干细胞MDR1mRNA和P-gp表达的影响

目的探讨益气养阴方对白血病干细胞多药耐药基因1（multidrug resistance gene 1, MDR1） mRNA和P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）表达的影响。方法从KG1a细胞株中分选出CD34+CD38－KG1a细胞,采用CCK-8法检测益气养阴方联合柔红霉素（daunorubicin, DNR）对KG1a干细胞的抑制率及IC50值;RT-PCR法检测益气养阴方干预KG1a干细胞后MDR1 mRNA的表达量;流式细胞术检测益气养阴方干预KG1a干细胞后各组P-gp表达。结果经过免疫磁珠法分选CD34+CD38－KG1a细胞比例为 （97.2±2.5）%,IC50（48 h）值为（0.50±0.07） μg/mL。与DNR组和对照兔血清+DNR组比较,20、40 μL含药兔血清+DNR组24、48、72 h的抑制率均增高（P<0.05）。与空白组比较,DNR组MDR1 mRNA表达增高 （P<0.05）;与对照兔血清组比较,对照兔血清+DNR组MDR1 mRNA表达增高（P<0.05）;与含药兔血清组比较,含药兔血清+DNR组MDR1 mRNA表达降低（P<0.05）。与空白组比较,DNR组P-gp表达量增高,但差异无统计学意义（P>0.05）;分别与DNR组、含药兔血清组比较,含药兔血清+DNR组P-gp表达量均明显降低（P<0.05）。结论益气养阴方可逆转KG1a干细胞对DNR的耐药性,其机制可能与其协同DNR降低多药耐药基因编码的P-gp蛋白表达,从而提高对DNR的敏感性。     

SKP2表达对食管癌细胞辐射敏感性的影响

目的 探讨S期激酶相关蛋白2(SKP2)高表达和低表达对食管癌细胞辐射敏感性的影响.方法 用Western-blotting方法筛选SKP2低表达和高表达的食管癌细胞系;构建SKP2正义表达载体p-pcDNATM3.1/myc-His A-SKP2和RNA干扰载体SKP2 RNAi,分别转染SKP2低表达和高表达的食管癌细胞系,用5 Gyγ射线照射各组细胞,通过克隆形成实验检测细胞辐射敏感性的差异.结果 SKP2在4种食管癌细胞中的表达水平依次为KYSE510＞KYSE450＞EC9706＞KYSE150.用p-pcDNATM 3.1/myc-His A-SKP2表达载体转染KYSE 150细胞后SKP2表达水平升高,5 Gyγ射线照射后细胞的克隆形成能力显著高于对照组(F=3.53,P＜0.01),表明SKP2高表达可以降低食管癌细胞的辐射敏感性.RNA干扰载体转染KYSE510细胞后SKP2表达水平降低,5 Gyγ射线照射后细胞的克隆形成能力显著低于对照组(F=5.23,P＜0.05),表明敲降SKP2表达可以增加食管癌细胞的辐射敏感性.结论 SKP2表达与食管癌细胞的辐射敏感性密切相关,具体机制还需要进一步研究.