丙型肝炎病毒非结构蛋白5A调节新生多肽复合物启动子转录活性的研究

目的探讨丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白5A（NS5A）对新生多肽相关复合物（NACA）启动子转录活性的影响。方法以我室构建的能够表达NS5A蛋白的pcDNA3．1（-）-NS5A质粒和含有NACA基因启动子的PCAT3-NACA报告基因质粒共转染HepG2细胞系设为实验组，同时PCAT3-NACA单独转染HepG2细胞系作为对照组。用酶联免疫吸附法检测氯霉素乙酰转移酶（CAT）的表达活性。结果pCAT3-NACA单独转染HepG2细胞的CAT酶表达活性与pCAT3-NACA和pcDNA3．1（-）-NS5A共转染组HepG2细胞的CAT酶表达活性比较，共转染组A值下降了79．3％。结论HCV NS5A能够抑制NACA启动子的活性，对NACA的表达具有下调作用。     

HepG2与HepG2．2．15细胞中P53表达及细胞生物学活性的差异

目的观察HBV对肝癌细胞生物学活性的影响，探讨HBV导致原发性肝癌发生的机制。方法用Western blot方法检测HepG2细胞以及稳定转染了HBV质粒的HepG2．2．15细胞中P53蛋白的表达情况，观察二种细胞某些生物学活性，如细胞周期、细胞凋亡的差异及细胞生长曲线以及裸鼠成瘤情况。结果HepG2．2．15细胞中P53蛋白表达水平及细胞凋亡率均高于HepG2细胞，细胞周期检测发现处于“S”期的细胞HepG2．2．15多于HepG2，细胞生长曲线显示其生长速度快于HepG2细胞，并且具有成瘤性。结论HBV在细胞内复制对细胞的凋亡与增殖均具有增强作用，其对细胞凋亡的促进作用可能通过使P53稳定性增强，进而使其活性增强。HBV感染的细胞存在凋亡与增殖的抗衡，当细胞增殖占优势时，则易于生成肿瘤。     

降钙素原在败血症中的诊断意义

目的通过分析血清降钙素原(PCT)在由革兰阴性菌和革兰阳性菌引起败血症患者中的血清浓度,明确PCT对不同菌引起败血症的诊断意义,为早期治疗提供理论依据。方法搜集医院发热患者145例,血培养阳性患者74例,阴性患者71例;血培养阳性患者中革兰阴性菌和革兰阳性菌各37例,比较不同组间PCT血清浓度。结果革兰阳性菌引起败血症以表皮葡萄球菌为主占21.62%,革兰阴性菌引起败血症以肺炎克雷伯菌为主占18.92%;通过比较3组间PCT表达水平,发现革兰阴性菌组PCT血清浓度明显高于革兰阳性菌组和血培养阴性组患者,而革兰阴性菌或革兰阳性菌不同菌间PCT表达差异无统计学意义;通过ROC曲线分析发现PCT诊断革兰阴性菌引起败血症的灵敏度为81.0%、特异性为93.0%、曲线下面积为92.0%。结论 PCT对于革兰阴性菌引起败血症具有较高的诊断价值,而对于非败血症及革兰阳性菌引起的败血症诊断意义不大。     

SMMC-7721肝癌细胞系中p53与乙型肝炎病毒相互作用的研究

目的 进一步观察乙型肝炎病毒(HBV)与p53的作用关系，以便更深入地了解HBV对原发性肝细胞癌发生的影响。方法 选用SMMC-7721肝癌细胞系(表达野生型p53，HBV阴性)为靶细胞，采用脂质体转染法，将pCMVp53单独或者与野生型HBV质粒(pCMVHBVa)、变异型HBV质粒(pCMVHBVb)共转染细胞，用annexin V-FITC标记及流式细胞仪检测细胞凋亡的变化；各组分别共转染报告基因：PG13-CAT，含有p21基因启动子的p21-LUC，通过CAT酶以及荧光素酶的检测，观察p53活性情况以及对p21启动子的活化情况；western blot方法检测各转染组p53蛋白表达情况。结果 单独的pCMVp53质粒转染SMMC-7721细胞系能够促进p21报告基因的表达，细胞凋亡率升高；HBVa质粒与pCMVp53共同转染可使细胞中p53蛋白表达水平，p53对报告基因PG13-CAT的活化作用以及对p21基因启动子的激活作用增强，细胞凋亡率增加，细胞生长受到抑制，而与pCMVHBVb共转染时则不能。结论 HBV在细胞内的复制可能通过使p53蛋白半衰期延长，及p53蛋白的表达及作用增强，促进p53下游基因p21的转录，导致细胞凋亡率增强，细胞生长受到抑制;p53可能通过某种机制对HBV的复制具有一定的促进作用。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白4A与钙离子信号调节亲环素配体的相互作用

目的 应用酵母双杂交技术及免疫共沉淀技术证实HCV非结构蛋白4A（HCV NS4A）与钙离子信号调节亲环素配体（CAML）的相互作用。方法 对CAML编码基因进行克隆，并构建其酵母表达载体，在酵母细胞中与HCV NS4A进行回交验证后，构建HCV NS4A及CAML真核表达载体，转染293细胞，行免疫共沉淀实验及Western印迹检测。结果 成功克隆CAML基因，并构建CAML的酵母表达载体，在酵母细胞中回交验证HCV NS4A与CAML的相互作用，构建HCV NS4A及CAML的真核细胞表达载体，并利用免疫共沉淀技术验证了两者的相互作用。结论 CAML与HCV NS4A的相互作用可能对HCV感染细胞的钙离子浓度、细胞凋亡等生物过程产生影响，从而在HCV感染慢性化过程中发挥作用。     

索拉非尼治疗进展期肝细胞癌的疗效及预后因素分析

  目的  评价索拉非尼治疗进展期肝细胞癌（HCC）的疗效及分析其预后影响因素。  方法  前瞻性分析2007年8月至2009年7月间110例接受索拉非治疗的进展期HCC患者,评价其疗效、不良反应,以总生存期和无肿瘤进展生存期为预后指标进行单因素和Cox比例风险模型多因素分析。  结果  110例患者随访中位时间9（2~18）个月,服用索拉非尼中位时间6.5（2~18）个月。14例（12.7%）获得完全缓解（CR）,16例（14.5%）部分缓解（PR）,40例（36.4%）病情稳定（SD）,总有效率为70例（63.6%）。中位生存期和无肿瘤进展生存期分别为10.5个月（95%CI:8.7~12.3）和5.0个月（95%CI:3.7~6.3）。多因素分析显示:联合局部治疗（肝动脉化疗栓塞或氩氦刀）、美国东部肿瘤协作组活动状态评分（Eastern Cooperative Oncology Group performance status score,ECOG PS）和Child-Pugh分级是影响无肿瘤进展生存时间的独立预后因素,而联合局部治疗、ECOG PS评分和AFP（alfa-fetopro? tein）水平是影响总生存期的独立预后因素。亚组分析显示:在肝癌进展组患者中继续服用索拉非尼其总生存期明显长于终止索拉非尼治疗者（11个月vs. 7.5个月,P < 0.001）。  结论  索拉非尼治疗进展期HCC,ECOG PS评分是影响生存期的一个重要因素,联合局部治疗有益于改善生存期。      

LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系和肝源永生化细胞系增殖的调控作用

目的 研究反转座子LINE-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系以及肝源永生化细胞系增殖能力的影响.方法 构建针对LINE-1 ORF-1编码序列的siRNA表达载体(LINE-1 ORF-1p psilence2.1-U6-siRNA),转染肝脏肿瘤细胞系Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和肝源水生化细胞系LO2.采用Western blotting检测LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体对LINE-1 ORF-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p表达的影响,采用MTT法检测LINE-1 ORF-1p表达受抑对细胞增殖的影响.结果 在肝脏肿瘤细胞HepG2、Bel-7402、SMMC-7721和肝源永生化细胞LO2中,转染LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体均能降低LINE-1 ORF-1p的表达水平,并从第3天起显著抑制前述细胞的增殖(P＜0.05),其抑制率分别为63％、51％、40％、43％.结论 抑制LINE-1 ORF-1p蛋白表达后可使肝脏肿瘤细胞系和永生化细胞系的增殖受抑.     

不同肝癌细胞系中P53/P21/MDM2表达初步观察

选用P53状态不同的Hep3B、PLC／PRF／5、HCC—9204、HepG2、HepG2215细胞，通过Western印迹分析观察各细胞P53蛋白以及P53下游基因p21、mdm2蛋白表达情况；将报告基因PG13-CAT转染细胞，通过观察CAT酶表达水平反映各细胞中P53的反式活化功能；P21—LUC质粒细胞内转染，比较不同细胞中P53对P21启动子的活化情况。结果显示，PLC／PRF／5细胞中P53蛋白高表达、低功能，但P21蛋白以及报告基因P21—LUC转染细胞后荧光素酶均具有较高水平表达；Hep3B细胞中P53蛋白无表达、无功能，P21蛋白低表达，MDM2蛋白表达相对较高；HCC—9204细胞具有较高MDM2表达，P53蛋白表达及功能均较低，P21亦呈低表达；HepG2215较HepG2细胞具有较高的P53、P21蛋白表达，P53活化报告基因的活性也较强。结果提示，肝癌细胞中P53活性与其表达水平、存在状态有关；某些细胞中P21的活化表达存在不依赖于P53的途径；MDM2与P53的表达具有负性相关倾向。     

2012年EASL-EORTC《肝细胞癌临床管理指南》简介

欧洲肝脏研究学会和欧洲癌症研究治疗组织于2011年底首次联合颁布了《肝细胞癌临床管理指南》,对肝细胞癌的监测、诊断、分期系统、分子分类和治疗策略提出建议,旨在根据循证医学证据为医生、患者、保健人员和政策制定者提供实践指导。