恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床效果评价

目的探讨恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效。方法选取 2014 年 4 月—2016 年 3 月于我院治疗的 64 例慢性乙型肝炎肝纤维化患者作为研究对象,按照随机、双盲、安慰剂对照原则将其分为对照组(恩替卡韦联合安慰剂治疗)和治疗组(恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片治疗),例数分别为 37 例和 27 例。治疗期间定期进行血常规、血生化、HBV DNA、肝脏硬度(liver stiffness measurement, LSM)的检查,并观察 2 组患者治疗前和治疗72 周时肝穿刺活检的疗效。结果入组 64 例患者,其中 59 例完成临床疗效观察。与治疗前相比,治疗后 2 组患者 ALT、AST、TBIL、HBV DNA 水平及 LSM 和肝纤维化评分均较治疗前明显下降(P 均< 0.05);在改善肝纤维化程度方面,治疗组有效率为 66.7%,明显高于对照组的 45.8%,差异有统计学意义(P < 0.05)。结论恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片治疗可改善慢性乙型肝炎肝纤维化患者的肝脏炎症和纤维化程度。     

HepG2肝癌细胞中干扰素-α对抑癌基因Diekkopf-1上调表达的研究

目的探讨重组干扰素-α（IFN-α）对肿瘤抑制作用的靶分子及可能作用机制。方法选用HepG2肝癌细胞系,分别应用1000U/ml、2000u／ml浓度的IFN-α作用于HepG2细胞,在药物作用6h、16h后应用RT-PCR;Dickkopf-1（DKK-1）方法分别检测各实验组DKK-1mRNA表达水平,Westernblot杂交法检测DKK．1蛋白表达水平。结果定量RT-PCR结果显示,IFN-α处理能增强DKK-1mRNA表达。2000U／mLIFN-α作用HepG2细胞16h组其DKK-1mRNA表达（0．00039±0．000057）高于处理6h组（0．000195±0．000021,t=6．994,P=-0．0022）以及1000U／mL作用16h组（0．000307±0．000012,t=2．876,P=0．0452）;Westernblot显示重组IFN．仪作用于I-lepG2细胞后,均能够导致细胞内DKK-1蛋白表达增强（P值均〈O．05）。结论IFN-α能够上调DKK-1表达,DKK-1可能是IFN-α作用的下游调节靶基因,这可能是IFN-α发挥抗肿瘤作用机制之一。     

日本戊型病毒性肝炎研究进展

日本专家Shunji Mishino报告了戊型肝炎（戊肝）在日本的发病、流行特点及最新研究进展。     

Expression of nitric oxide synthase in T-cell-dependent liver injury initiated by ConA in Kunming mice

To investigate whether nitric oxide synthase (NOS) is expressed in T-cell-dependent liver injury initiated by concanavalin A (ConA) in Kunming mice and study the possible effect of nitric oxide(NO) on liver injury models. Methods: Liver injury in Kunming mice was induced by administration of ConA through tail vein. Expression of NOS inthe liver was detected by NADPH diaphorase staining method. The possible effect of NO on liver injury models was obtainedby L-NAME injection to suppress synthesis of NO. Results: NOS has a strong expression in hepatocytes after ConA injection, especially in those close to the central vein, while only a weak expression was found in the epithelial cells in contrml group. Liver injury became more serious when NO symhesis was inhibited by L-NAME, accompanied by great malondlalde-hyde(MDA) increase in serum and severe intrahepatic vascular thrombosis. Conclusion: NOS markedly expressed in ConAinduced liver injury, which may subsequently promote nitric oxide synthesis. Increasement of nitric oxide has a protective ef-fect on ConA-induced liver injury.     

拉咪呋啶治疗乙型病毒性肝炎的研究近况

拉咪呋啶是新近用于乙型病毒性肝炎治疗的新一代核昔类似物,并显示了强大的抗乙型肝炎病毒(HBV)活性,预计不久可全面用于临床。本文综述了拉咪呋啶在乙型病毒性肝炎治疗中的研究近况。     

噬菌体展示技术筛选干扰素α启动子DNA结合蛋白

目的筛选干扰素α(IFN α)启动子DNA结合蛋白,探讨IFN α基因表达调节的分子生物学机制。方法应用噬菌体展示技术,以IFN α启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索。结果噬菌体经富集后,随机挑选40个克隆,成功构建了克隆载体,序列测定后经过同源性搜索,确定了和IFN α启动子结合的肝细胞蛋白,筛选到17种与IFN α启动子具有结合作用的蛋白。结论多种具有不同生理、生化功能的蛋白与IFN α启动子具有结合作用。     

噬菌体展示技术筛选重组干扰素-β蛋白结合蛋白

目的:利用噬菌体展示技术筛选重组干扰素-β(IFN-β)肝细胞结合蛋白,探讨IFN-β抗病毒的分子生物学机制.方法:应用噬菌体展示技术,以重组的IFN-β蛋白包被酶联免疫板,作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程.经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和生物信息学分析.结果:对肝细胞cDNA文库经过5轮的生物淘洗,从最后一轮筛选的顶层琼脂中随机挑选40个克隆,构建克隆载体,序列测定后经过同源性搜索和生物信息学分析,确定了和IFN-β蛋白具有结合作用的肝细胞蛋白.结论:筛选到与IFN-β蛋白具有结合作用的多种具有不同生理、生化功能的肝细胞蛋白.     

HepG2与HepG2．2．15细胞中P53表达及活性的比较

目的探讨HBV对抑癌基因P53表达及活性的影响。方法选用HepG2及转染了HBV表达质粒的HepG2．2．15细胞，采用Western blotting法检测两种细胞P53的表达状况；磷酸钙法将报告基因质粒PG13-CAT和P21-LUC分别转染细胞，通过检测报告基因的表达观察各细胞中P53的活性。结果HepG2．2．15细胞中P53蛋白表达水平高于HepG2细胞，而且两种报告基因的表达在HepG2．2．15细胞中也较高。结论HBV在肝癌细胞内的复制对P53的表达及功能具有一定的增强作用。     

MRI在肝腺瘤诊断中的应用

目的探讨MRI对肝腺瘤的诊断价值。方法回顾性分析10例肝腺瘤患者的MRI表现。结果病理证实肝腺瘤10例,其中MRI诊断为肝腺瘤5例。7例单发,直径为(5.2±1.9)cm;3例多发,最大病灶直径为(9.0±3.0)cm。8例T1WI序列和T2WI序列呈长T1和长(稍长)T2信号,1例呈长T1稍短T2信号,1例呈短T1等T2信号;9例回波序列见大量脂质成分。增强扫描时,7例动脉期病灶明显强化,门脉期及延迟期造影剂消退,病灶为等信号或稍高信号;2例动脉期轻度不均匀强化;1例动脉期病灶增强与肝实质近似,门脉期和延迟期造影剂较前消退。肝腺瘤呈现"快进慢出"信号特征;8例门脉期及延迟期病灶周围可见环形强化假包膜。结论肝腺瘤的增强MRI有特征性表现,有助于与其他肝内肿瘤鉴别,但明确诊断仍须要病理支持。     

内皮祖细胞作为干扰素基因载体的体外抑瘤实验

目的 研究用人骨髓诱导培养内皮祖细胞（EPCs）并以其作为免疫性基因载体治疗肿瘤的可行性。方法 采用梯度离心法从人骨髓中分离单个核细胞,加入人血管内皮生长因子(VEGF165）诱导培养,用流式细胞仪测定细胞表面标志CD133、KDR和CD34的表达情况。以增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）作为报告基因,用流式细胞仪检测携带EGFP基因的腺病毒载体（Ad-EGFP）对EPCs的感染效率。携带人干扰素γ（hγIFN）基因的腺病毒载体（Ad-hγIFN）感染EPCs（EPCs-hγIFN）,ELISA法检测细胞EPCs-hγIFN分泌 hγIFN的情况。将EPCs-hγIFN与肺癌细胞株H460、胃癌细胞株SGC7901、大肠癌细胞株LoVo混合培养,观察EPCs-hγIFN对肿瘤细胞的作用。结果 经过诱导培养2周后,贴壁的单核细胞开始表达CD133、KDR和CD34。Ad-EGFP的感染复数（MOI）为150pfu／EPCs时,感染率达90％以上。EPCs-hγIFN培养上清可以测得浓度稳定且高水平的hγIFN,第1天上清液中的hγIFN浓度为1305.28pg／ml,第14天为1419.10pg／ml。EPCs-hγIFN与H460、SGC7901、LoVo细胞株混合培养4天,肿瘤细胞的生长受到明显的抑制,肿瘤细胞存活率分别为（77.87 ± 6.50）％、（79.36 ± 4.35）％和（69.52 ± 3.78）％, 均显著低于对照组（P＜0.05）。结论携带hγIFN目的基因的腺病毒转染EPCs后基因表达情况良好,体外实验中表现为抑制肿瘤细胞的生长,可作为免疫性基因载体开展进一步的研究。