基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱对临床常见细菌和酵母菌的鉴定能力评价

目的利用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统、ATB Expression微生物鉴定及药敏系统鉴定临床常见的细菌和酵母菌,比较鉴定结果的一致性,评价MALDI-TOF MS对临床常见病原菌的鉴定能力。方法连续5 d鉴定123株临床分离株,其中革兰氏阳性菌42株,革兰氏阴性菌71株,酵母菌10株。细菌鉴定同时使用法国梅里埃公司的VITEK MS(采用MALDI-TOF MS技术)和VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统,酵母菌鉴定同时使用VITEK MS和ATB Expression微生物鉴定及药敏系统。将MALDI-TOF MS与传统生物化学方法得到的鉴定结果进行比较,结果不一致的菌株采用16S r RNA测序验证。结果 MALDI-TOF MS与传统生物化学方法得到的鉴定结果相比较,革兰氏阳性菌鉴定符合率为78.6%(33/42),革兰氏阴性菌鉴定符合率为84.5%(60/71),酵母菌鉴定符合率为100.0%(10/10)。其中金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌及大多数肠杆菌科细菌、非发酵菌的符合率可达95.0%。19株鉴定结果在种的水平上不一致的细菌经16S r RNA测序验证,MALDI-TOF MS的正确率为73.7%,传统生物化学鉴定结果的正确率为49.2%。结论与传统生物化学鉴定手段相比,MALDI-TOF MS对临床常见致病菌具有较好的鉴定能力,鉴定时间显著缩短,可实现临床微生物的快速、准确鉴定。     

聚合酶链反应检测肿瘤细胞株的端粒酶活性

目的比较聚合酶链反应酶免法（ＰＣＲＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＣＲＰＡＧＥ）方法检测白血病细胞端粒酶活性的临床应用价值。方法ＰＣＲＥＬＩＳＡ以地高辛标记对端粒重复片段特异的探针与ＰＣＲ变性产物杂交，通过ＥＬＩＳＡ系统检；ＰＣＲＰＡＧＥ方法直接用电泳法分离ＰＣＲ扩增端粒酶的合成产物，经溴乙啶染色，分析端粒酶活性。结果ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法能准确特异地检测白血病细胞的端粒酶活性，检测灵敏度可达１×１０２细胞数。经ＰＡＧＥ分离显示，端粒酶的ＰＣＲ产物有含５０ｂｐ等６条梯带。结论两种方法均可用于临床检测。ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法似更简单、方便一些。     

靶向mecA基因纳米胶体金探针快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的建立

目的 用以纳米胶体金颗粒为载体的DNA探针杂交技术,建立快速、简便和特异的检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法.方法 以直径60 nm的胶体金纳米颗粒与巯基修饰的2条mecA基因特异性寡核苷酸探针共价结合,制备成纳米胶体金探针.直接提取金黄色葡萄球菌的基因组DNA,经超声破碎后与纳米胶体金探针进行液相杂交.杂交产物经高速离心后再用反向色谱反应盘检测有无胶体金颗粒沉淀产生.用该法和PCR扩增试验同时检测临床分离株的mecA基因,以PCR法为金标准,评价纳米胶体金探针液相杂交法的准确性.结果 在95株临床试验菌株中PCR法共检出71株MRSA,24株MSSA.在71株MRSA中,纳米胶体金探针杂交试验有69株为阳性,敏感度为97.2%,最低检测限为4.72 fmol/L.而在24株甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)中,纳米胶体金探针杂交试验无一株阳性,特异度为100%.95株临床试验菌株中纳米胶体金探针杂交试验正确检出93株,准确度97.9%.结论 纳米胶体金探针杂交试验与PCR检测MRSA具有很好的一致性.应用胶体金探针杂交技术检测MRSA具有快速、简便、准确的特点,有望成为MRSA的快速诊断的新方法.     

艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路的影响

目的:观察艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞焦亡NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路的影响。方法:将30只健康SPF级SD大鼠雌雄各半,分为正常组、模型组和艾灸预处理组。选取足三里(双侧)和中脘穴进行艾灸预处理7 d,再用无水乙醇灌胃法进行造模,观察胃黏膜组织形态,评估UI指数,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和白介素18(IL-18)3种细胞因子的表达量; Western blot检测大鼠胃组织炎性小体核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)及胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、消皮素(GSDMD)的表达水平。结果:艾灸预处理后,机体在应对致病因素刺激时可抑制IL-1β、IL-18及TNF-α的分泌,对比正常组和模型组均有明显下降(P<0.01),NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白的表达量均低于正常组和模型组(P<0.01)。结论:艾灸预处理通过NLRP3/Caspase-1/GSDMD经典通路途径抑制细胞焦亡,降低炎症发生的程度,达到保护胃黏膜的作用。     

橙皮素微量元素配合物的合成及其生物活性研究

目的 合成橙皮素钙、铁、硒、锌、铬配合物5种中药新药，并研究其抗菌、抗肿瘤活性和清除自由基的能力。方法 在碱性条件下通过合成得到橙皮素钙、铁、硒、锌、铬配合物，采用倍比稀释法测定橙皮素及其配合物对大肠杆菌等8种菌的抑制活性，采用MTT法测定橙皮素及其配合物对Tca-8113等6种肿瘤细胞增殖的影响，采用超氧阴离子自由基清除法测定橙皮素及其配合物对超氧阴离子自由基的清除能力。结果 合成的5种配合物配位比均为2∶1（橙皮素∶微量元素），产率均>70%，小鼠急性毒性试验显示5种配合物均无明显毒性，5种配合物最小抑菌浓度均低于橙皮素，抗菌活性至少提升至1~4倍；5种配合物对肿瘤细胞的IC₅₀均小于橙皮素，抗肿瘤活性至少提升至1.19~2.41倍；橙皮素及其配合物对超氧阴离子自由基均有一定的清除作用，且均呈浓度依赖性，配合物对超氧阴离子自由基的清除率均高于橙皮素。结论 5种橙皮素微量元素配合物的抗菌、抗肿瘤活性和自由基清除能力均强于橙皮素。     

肺Rosai-Dorfman病1例

Rosai-Dorfman病是一种少见的良性组织细胞增生性疾病, 多发生于淋巴结, 原发于肺孤立性Rosai-Dorfman病十分罕见, 本文报道1例32岁男性, 体检发现右肺下叶结节行右中下肺叶切除术, 右下叶支气管根部见肿块, 大小4.0 cm×3.5 cm×2.5 cm, 灰白灰黄色, 质硬, 界尚清。低倍镜下见肺组织结构破坏, 淡染区和深染区明暗相间分布。高倍镜下见淡染区主要为体积增大的组织细胞呈簇状分布, 胞质淡染嗜酸性或空泡状, 胞质内可见吞噬一至数枚形态完整的淋巴细胞。深染区主要是成熟的浆细胞和淋巴细胞。免疫组织化学组织细胞S-100蛋白、CD68及CD163阳性。分子检测KRAS基因G12D突变。术后随访21个月无复发。肺Rosai-Dorfman病术前常被误诊为肺癌, 病理诊断需要与多个疾病鉴别, 免疫组织化学S-100蛋白对正确诊断有帮助。