自体脂肪移植的组织病理学研究:动物实验

自体脂肪抽吸移植术已应用于整容外科,但有关的基础研究却很少。以往报告的脂肪移植存活率为30%～80%。作者用家兔脂肪自体移植,研究了不同时间移植的组织病理学改变。从兔背部肩胛区取脂肪,经空针抽吸,造成与脂肪抽吸术相似的病理性损伤,然后注入兔耳基底部。分别于术后5、10、15、20、40、100天处死,取移植组织切片。苏木精伊红     

去细胞喉支架的制备及喉肌细胞再生的可行性研究

Objective To prepare a deeelhilarized whole laryngeal scaffold by utilizing a perfusion-decellularized technique, reseed cells on it, and construct recellularized laryngeal muscles. Methods Perfusion decelluarized larynxes were obtained by common carotid arterious perfusion with detergents. Then they were performed by macroscopic view, histological examination, scanning electron microscopy (SEM) and cartilage viability. Decellularized laryngeal scaffold were then reseeded with inducted mesenchymal stem cells (MSCs). Composites were transferred into greater omentums of rabbits after one day' s adherence and harvested after eight weeks. Macroscopic view, histological examination and immunohistochemistry were performed. Results Perfusion larynxes became transparent after two hours. Histology and SEM indicated that perfnsion method shewed better deculluarized effect. More ventages and collagen fibers but no intact cell or anclei were retained in the decellularized martrix. Porosity measured by Image pro plus 6. 0 was 80. 4% ± 3.2% (x ± s). Chondrocyte vitality assay indicated chondrocyte vitality rate in the perfusion group was 86. 9% ± 1.5% . After eight weeks, vascularization formed and integrated cartilage frameworks still remained. Histological examination could clearly show the presence of muscle bundles and vessels. Immunohistoehemical examination indicated that sarcomeric-α actin expressed positively in corresponding areas. Conclusions It is feasible to reseed MSCs into the decellularized laryngeal muscle matrix for constructing tissue-engineered laryngeal muscles. This in vivo maturation into the omentum could be the first step before in situ implantation of the construct.     

豚鼠嗅神经鞘细胞的体外培养及在同种异体神经移植中的作用

目的 探讨成年豚鼠嗅球嗅神经鞘细胞( Olfactory ensheathing cells,OECs)取材、体外培养及纯化方法 ,为以豚鼠作为实验模型的神经移植实验及进一步研究其生物学特性打下基础. 方法 在立体显微镜下仔细分离出嗅球的第一二层,经剪碎、消化及吹打后去除沉淀,并行培养前差速贴壁法初步纯化及培养后第 7～ 10天用消化法行近一步纯化,用神经生长因子受体蛋白( p 75NGFR)行免疫组织化学鉴定及估算 OECs纯度. 结果 体外培养成年豚鼠 OECs形态与成年大鼠基本相似;未经纯化处理的嗅球组织中的 OECs,在培养 2周时被大量增殖的成纤维细胞所覆盖和取代.而经过精细取材、培养前纯化和培养后纯化的综合处理,可使 OECs纯度达到 70%. 结论 精细取材和综合纯化可培养出纯度较高的 OECs,为以豚鼠作为实验模型的神经移植实验及进一步研究其生物学特性打下基础.     

定向诱导人骨髓间质干细胞向软骨细胞分化的初步研究

目的　采用组织工程方法 ,将人骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSC)在体外培养后 ,诱导为软骨细胞 ,为软骨的修复和重建提供条件。方法　根据 5例的预实验经验 ,采用 12例开胸手术所取正常肋骨分别实验。将肋骨剪开 ,用含双抗的不完全培养基反复冲洗骨髓腔得到骨髓液 ,经密度梯度离心获得单个核细胞 ,体外培养、分离获得人骨髓MSC ,经无血清培养诱导液进行诱导培养 ,透射电镜观察细胞外基质形成及超微结构 ,免疫组化检测MSCⅡ型胶原表达。结果　 12例的肋骨骨髓MSC分别体外培养 2周后见细胞融合 ,传代培养并进行诱导 ,部分细胞开始由梭形转变为圆形 ,并分泌基质 ,甲苯胺蓝染色呈阳性 ;MSCⅡ型胶原表达阳性。结论　人MSC在体外能诱导为软骨细胞 ,可用于组织工程软骨组织的构建 ,是一种有重要意义的“种子细胞”。     

环状软骨前后裂开加移植物治疗严重声门及声门下狭窄

目的　总结采用环状软骨前后裂开加移植物治疗严重声门、声门下后壁狭窄经验。方法　回顾分析唐都医院近 10年来治疗严重声门、声门下后壁狭窄患者 2 5例 ,男 15例 ,女 10例。平均年龄 31岁 (9～ 4 6岁 )。病程平均 2年 (3个月～ 6年 )。 19例曾采用各种喉成形术 1～ 7次 (平均2次 )。全部病例术前均靠气管切开套管呼吸。手术采用喉气管裂开 ,环状软骨板正中裂开 ,加肋软骨 (17例 ) ;肌筋膜、软骨膜或裂层皮片 (15例 ) ;带蒂杓状软骨 (2例 ) ;甲状软骨块 1例。T形管支撑3～ 6个月。结果　 2 4例 (96 % )全部治愈拔管 ,恢复功能性发音。 1例伤口感染 ,软骨坏死排出失败。随访 1～ 10年 ,疗效可靠 ,未见再狭窄。结论　严重的声门及声门下后壁狭窄采用环状软骨前后裂开加移植物是比较安全有效的治疗方法。术中注意勿损伤食道壁 ,妥善止血 ,移植物缝合牢固 ,留置支撑器是成功的关键     

紫杉醇对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用研究

目的：通过体外实验评价紫杉醇对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用。方法：应用人喉癌细胞系Hep-2，将细胞暴露于不同浓度紫杉醇下，分别于6、12、24、48、72h收集标本，进行细胞形态观察；流式细胞仪细胞周期分析；MTT法检测细胞生长情况，绘制细胞生长曲线；应用琼脂糖凝胶电泳进行检测和观察。结果：人喉癌细胞系Hep-2在紫杉醇的作用下，细胞分裂阻滞在分裂期的中期，并诱导细胞发生凋亡；凋亡细胞表现为细胞固缩，核染色质凝聚或者断裂；细胞DNA裂解片段呈现典型的“阶梯状”排列的条带；紫杉醇对Hep-2的细胞毒性与剂量和时间有依赖关系。结论：紫杉醇诱发人喉癌细胞凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关，随浓度和时间延长，G2／M期细胞的比率也增高。     

带孔钛环外支撑游离皮片重建气管缺损的动物实验

目的探讨带孔钛环外支撑游离皮片重建颈段气管缺损的可行性。方法12只成年杂种犬随机均分为两组。实验组切除颈段气管前壁、侧壁约2／3周径，长约25mm（4个气管环），制作人工气管缺损模型，取腹部全厚游离皮片修复气管缺损，皮片外部由带孔钛环悬吊支撑。对照组手术模型及缺损修复与实验组相同，但未放置钛环。术后1个月及6个月行X线及纤维支气管镜检查，观察钛环固定情况及管腔情况。术后6个月处死动物，病理检查移植物组织学变化。结果实验组动物1只术后第5天出现伤口感染裂开，皮片坏死，钛环脱落排出，予以处死；其余5只存活，无呼吸困难；X线摄片示气管腔通畅，钛环固定良好，无移位、变形；纤维支气管镜检查见管腔通畅，管壁光滑，未见狭窄、挛缩及坏死，其中1只在远心端吻合口有少量肉芽，不影响呼吸。存活动物术后6个月处死后病理检查示移植皮片表面大部分覆盖假复层柱状上皮，但上皮覆盖不连续；未见到毛囊，毛发等皮肤附件结构。3只对照组动物术后24h内死于窒息，尸检发现管腔塌陷皮片水肿；另外3只术后出现不同程度的呼吸困难，最长存活16d，术后14d纤维支气管镜检查示管腔塌陷狭窄。结论带孔钛环可重建气管支架，游离皮片可作为气管黏膜替代物，是气管重建的简便方法之一。     

咽侧壁憩室

咽侧壁憩室最常见类型是咽粘膜穿过甲状舌骨膜与会厌谷在同平面的梨状窝的前外侧壁凸出形成。甲舌膜没有软骨或骨的支持,相对薄弱,咽中缩肌和咽下缩肌并不完全覆盖它,喉上血管与喉内神经穿过该区。另一处潜在薄弱部位是咽会厌皱襞,粘膜可通过这些部位膨出。当然,最常见的咽薄弱处还是在咽后壁,可形成Zenker氏憩室。本病临床表现主要是吞咽困难、声嘶、食物返流。其它如随空气压力而张缩的憩室可在颈部形成时隐时现的包块,细心观察即可诊断。确诊则靠憩室充气、吞钡或气钡造影。有时用探针可     

新兴细胞生物学技术-组织微阵列研究进展

肿瘤相关基因的研究在肿瘤病理学中占有重要的地位,新兴的细胞生物学技术-组织微阵列,具有批量性、快速性、准确性等特点,为肿瘤相关基因的研究提供了一种全新的方法。从组织微阵列技术的原理、主要优势、应用、研究进展、存在的问题和展望等方面作一综述。     

保存人鼻中隔软骨活性的3种体外方法比较

背景:软骨损伤后难以自身修复,以活性软骨进行修复效果较好,但活性软骨的可靠来源尚未根本解决。目的:以3种不同方法体外保存成人鼻中隔软骨块的活性比较。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2007-06/2008-03在解放军第四军医大学唐都医院耳鼻喉科实验室及西京医院全军耳鼻咽喉-头颈外科中心实验室完成。材料:材料为临床常规手术中切除的成人正常鼻中隔软骨20块,按国务院2006年《医疗机构管理条例》规定,已与患者签订知情同意书。方法:将所取软骨,块剪成大小约15mm×10mm×2mm软骨块,分别置于4,-20,-80℃冷冻及RPMI-1640液于37℃培养保存,于保存24h,7,14,21d和30d时取样品。主要观察指标:以苏木精-伊红、AB/PAS及Masson三色染色和锥虫蓝排斥试验检测软骨活性。结果:用RPMI-1640培养液保存的成人鼻中隔软骨,在整个保存期中均能保持较好活性,软骨细胞活性率保持在80%左右。以-80℃冷冻保存7d及-20℃保存14d时,软骨基本失去活性,当4℃保存在21d时,软骨可保持较好活性,保存30d时,软骨活性明显降低。结论:与低温保存方法相比,用组织培养法保存成人软骨块能较好地保持其活性,有望为临床治疗提供一种取材方便、新型有效的软骨修复材料。