HMGB1在肝脏炎症微环境及肝细胞癌发生发展中的作用

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种具有多种功能的核相关蛋白,在肝脏肿瘤的发生发展中作用巨大,尤其是在其中的一个重要环节即炎症微环境中发挥着重要作用。在肝细胞癌中,HMGB1作为一种重要的炎症介质通过一系列信号通路促进肿瘤进展,同时在肿瘤自身的炎症微环境中,HMGB1也通过相关信号分子促进炎症微环境本身的发生,并进一步引起肝细胞癌的发生发展。HMGB1在炎症微环境中促进肿瘤发生发展的机制是肿瘤诊断、治疗研究中的热点。本文就目前HMGB1在肝脏炎症微环境中的作用及其在肝细胞癌发生、发展及治疗中的作用作一综述。     

腹膜播散性平滑肌瘤病1例

病人，48岁．孕2产1，因不规则阴道流血6月余，头晕恶心1周，晕厥1次急诊入院。病人曾行子宫黏膜下肌瘤摘除术。查体：心率88min^-1，贫血貌，心肺无异常。妇科检查：宫颈外口可见一约6．0cm×5．0cm×3．5cm大小赘生物，质硬，有蒂，蒂粗1cm。子宫大小正常，表面光滑，活动，无压痛。双侧附件未扪及异常。辅助检查：WBC4．6×10^9/L，RBC2．8×10^12／L，血红蛋白54g／L，     

利用噬菌体表面展示技术构建人肝癌细胞的cDNA表达文库

目的:筛选对人肝再生增强因子(hALR)高反应性的肝癌细胞株,以此作为细胞来源,利用噬菌体展示技术构建出含有其cDNA表达文库,为进一步从文库中筛选hALR相互作用蛋白奠定基础.方法:hALR刺激不同肝癌细胞株,从中筛选出对hALR刺激有高反应性的细胞株.以Poly ATtract System1000提取mRNA,用T7Select10-3 Orient Express cDNA CloningSystem和Random Primer构建它的cDNA噬菌体表面展示文库;以噬菌体滴度分析和PCR评价文库质量.结果:hALR对不同肝癌细胞株均有不同程度的促增殖作用,且呈明显的剂量依赖关系.对QGY促增殖作用最强,以它作为建库细胞.对所建文库进行噬菌体滴度分析,表明原始cDNA文库含有2×107独立的重组子;随机挑取重组子进行PCR鉴定,发现插入长度在0.2～2kb,平均为0.6kb,能够较好地代表来源细胞中mRNA所表达的几乎所有信息.结论:hALR对所检测的肝癌细胞株均有促增殖作用;QGY细胞对hALR刺激有最高的反应性;以它为基础,构建出库容量为2×107的高质量噬菌体表面展示文库.     

表没食子儿茶素没食子酸酯通过减弱HMGB1/TLR4/NF-κB/NLRP3途径改善脓毒症后急性肝损伤

目的　探究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在脓毒症后急性肝损伤中的保护作用及潜在机制。方法　采用盲肠结扎穿刺术（CLP）建立脓毒症模型小鼠,以及使用脂多糖建立脓毒症后急性肝损伤细胞模型。8～10周龄雄性C57BL/6J小鼠88只随机分为CLP组、CLP+EGCG低剂量（4 mg/kg）组、CLP+EGCG高剂量（8 mg/kg）组和假手术组。正常肝细胞（L02细胞）根据干预方式不同分为脂多糖（LPS）（400 ng/mL）组、LPS（400 ng/mL）+高迁移率族蛋白B1（HMGB1）（100 ng/mL）组、LPS（400 ng/mL）+EGCG（100 μg/mL）组和对照组（PBS）组。术后24 h,采用全自动生化分析仪检测小鼠肝功能,镜下分析肝组织病理变化;ELISA法检测血清炎症因子;Western blot检测HMGB1、TOLL样受体4（TLR4）、NF-κB p65、NOD样受体蛋白3（NLRP3）、焦亡相关蛋白[消皮素D（GSDMD）、caspase 1、caspase 11、IL-1β、IL-18]的水平变化;采用免疫组织化学染色观察小鼠肝组织中HMGB1、GSDMD的表达及定位情况。L02细胞干预24 h后,采用ELISA法检测细胞上清液中炎症因子以及采用Western blot检测细胞中HMGB1、TLR4、NF-κB p65、NLRP3及焦亡相关蛋白的水平变化。结果　动物实验（样本量n=6）表明：CLP组小鼠白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、单核细胞计数均低于假手术组（P均<0.01）。与CLP组相比,CLP+EGCG低剂量、高剂量组小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、HMGB1、TNF-α、IL-6表达水平明显降低（P均<0.05）,且CLP+EGCG高剂量组较低剂量组降低更为明显（P均<0.05）;HE染色结果提示CLP+EGCG低剂量、高剂量组小鼠肝组织损伤明显减轻,且以高剂量组为甚;Western blot提示CLP+EGCG低剂量、高剂量组肝组织中HMGB1、TLR4、NF-κB p65、 NLRP3、焦亡相关蛋白的表达水平明显下降（P均<0.05）,且以高剂量组降低更为明显（P均<0.05）;免疫组化提示CLP+EGCG低剂量、高剂量组中HMGB1和GSDMD的表达明显减少（P均<0.05）,且CLP+EGCG高剂量组降低更为明显（P均<0.05）。细胞实验（样本量n=8）表明：与LPS+HMGB1组相比,LPS组、LPS+EGCG组以及对照组的细胞上清液中HMGB1、TNF-α和IL-6的表达水平明显减少（P均<0.05）,且LPS+EGCG组较LPS组明显降低（P均<0.05）。Western blot结果提示LPS+HMGB1组中HMGB1、TLR4、NF-κB p65、 NLRP3以及焦亡相关蛋白表达水平较其余三组明显升高（P均<0.05）,且LPS+EGCG组较LPS组明显降低（P均<0.05）。结论　EGCG对脓毒症后急性肝损伤有保护作用,其机制可能与通过减弱HMGB1/TLR 4/NF-κB P65/NLRP3途径降低肝细胞焦亡有关。     

益安感冒胶囊治疗上呼吸道感染（外感风热证）临床观察

目的：验证益安感冒胶囊对上呼吸道感染的疗效,并对其安全性作出客观评价。方法：本设计方案采用安慰剂平行对照、分层随机、双盲观察上呼吸道感染患者共64例,其中试验组32例,对照组32例;试验组：益安感冒胶囊口服,1次4粒,1日3次,连续用药3d。对照组：安慰剂胶囊口服,1次4粒,1日3次,连续用药3d。结果：临床总体疗效比较：试验组愈显率81．25％;对照组愈显率18．75％。中医症候疗效比较：试验组愈显率81．25％;对照组愈显率12．50％。益安感冒胶囊治疗上呼吸道感染（外感风热证）及改善中医证候方面的疗效显著,明显优于安慰剂组,二者间有显著的统计学差别（P〈0．0001）。结论：益安感冒胶囊临床疗效确切,未发现明显毒副反应,优于安慰剂．     

B超单侧肾积水在输尿管肿瘤诊断中的价值

0 引言输尿管肿瘤早期诊断困难,B超为其方便、无创的筛选手段,单侧肾积水是其常见的间接征象,因B超的局限性,对肿瘤的诊断率较低. 我院自1991年以来,对B超单侧肾积水采用多种检查方法综合诊断并术后确诊输尿管肿瘤20例,报告如下.……     

热毒宁注射液治疗流行性感冒高热（热毒袭肺证）临床观察

目的：验证热毒宁注射液治疗流行性感冒高热（热毒袭肺证）的疗效,并对其安全性作出客观评价。方法：采用随机、双盲双模拟、平行对照试验,观察流行性感冒高热（热毒袭肺证）患者共38例,其中试验组19例,对照组19例;用药方法：试验组用热毒宁注射液及磷酸奥司他韦胶囊模拟剂治疗,对照组用磷酸奥司他韦胶囊及热毒宁注射液模拟剂治疗。结果：两组在改善流行性感冒高热症状方面及改善中医证侯方面两组均有明显的疗效,二者间的差别无统计学意义。两组在退热起效时间及体温复常时间方面无显著性差异。『临床观察中,无明显不良反应与严重不良事件。结论：热毒宁注射液治疗流行性感冒高热（热毒袭肺证）临床疗效确切,未发现明显毒副反应,与磷酸奥司他韦胶囊相仿。     

朱启勇教授治疗肺纤维化经验探析

肺纤维化是各种肺间质疾病的共同病理结局,西医无明确有效的治疗手段,朱启勇教授治疗肺纤维化临证理验俱丰,疗效显著。朱教授认为肺纤维化基本病机属于阴虚血瘀,当以活血化瘀、养阴利咽贯穿整个治疗过程。     

内毒素诱导巨噬细胞HMGB1表达的实验研究

目的:探讨内毒素(脂多糖,Lipoplysaccharide,LPS)刺激巨噬细胞后高迁移率族蛋白B1(High mobility group protein B1,HMGB1)的释放和表达水平.方法:用100 ng/ml的LPS刺激RAW264.7细胞,分别于刺激后0、6、12、18、24、30、36 h和48 h,用Western blot检测细胞培养上清、细胞浆和细胞核内HMGB1蛋白的含量;用RT-PCR检测细胞中HMGB1的mRNA表达情况;用免疫细胞化学、激光共聚焦显微镜观察LPS刺激后细胞浆和胞核内HMGB1的含量变化.分别于LPS刺激后0、1、2、4 h和6h,用酶联免疫吸附实验(Enzymelinked immunoassay,ELISA)测定细胞培养上清中TNF-α、IL-6的含鼍.结果:LPS刺激后0～12 h细胞培养上清中无法检测到HMGB1蛋白,18 h后细胞培养上清中HMGB1蛋白的含量开始增加,于24 h达到高峰,以后稳定维持在较高水平;LPS刺激前,HMGB1主要分布于细胞核内,胞核中HMGB1蛋白含量较高,胞浆中HMGB1蛋白含量少;LPS刺激后12～48 h细胞浆中HMGB1蛋白含量逐渐增加;而LPS刺激后12～24 h细胞核内HMGB1含量逐渐减少,30 h后细胞核内HMGB1含量又逐渐增多.RT-PCR结果显示,LPS刺激后0～18 h,培养细胞中HMGB1的mRNA表达量无明显变化,24～36 h培养细胞中HMGB1的mRNA表达量明显增加.ELISA结果显示,LPS刺激后1 h,细胞培养上清中TNF-α、IL-6的含量明显增高,2 h达到高峰.结论:LPS可诱导单核-巨噬细胞内HMGB1、TNF-α、IL-6表达和释放增加,LPS诱导巨噬细胞释放HMGB1的时间明显晚于TNF-α、IL-6的释放时间;LPS诱导巨噬细胞内的HMGB1从细胞核向细胞浆转位,并释放到细胞外;LPS诱导巨噬细胞HMGB1 mRNA基因表达上调的时间和蛋白合成的时间出现较晚.     

慢性乙型肝炎患者iNKT细胞PD-1表达的变化

目的检测慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中iNKT细胞比例、细胞因子分泌能力以及其表面程序性死亡因子1(programmed death 1,PD-1)的表达情况。方法采集慢性乙型肝炎患者外周血,利用CD3、TCR Vα24、TCR Vβ11、CD279单克隆抗体标记后经流式细胞术直接检测iNKT细胞比例及其PD-1表达比例;采用PMA+Ionomycin体外活化iNKT细胞后流式细胞术检测其胞内IFN-γ分泌情况。结果慢性乙型肝炎患者外周血iNKT细胞比例[(0.09±0.04)%]与健康对照者[(0.11±0.07)%]相比无明显差异,但体外活化后胞内IFN-γ分泌量减少[(24.64±7.71)%vs(42.35±11.60)%],且iNKT细胞PD-1表达升高[(36.7±9.7)%vs(16.2±5.4)%]。结论慢性乙型肝炎患者外周血iNKT细胞功能的下降可能与其表面负性刺激分子PD-1表达上调密切相关。