抗CP4-EPSPS单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

目的制备可用于胶体金快速检测试条的抗CP4-EPSPS(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以重组蛋白CP4-EPSPS免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗CP4-EPSPS的mAb,以间接ELISA法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类,检测mAb的效价及相对亲和力,并进行mAb结合表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(Ⅲ5A3,Ⅲ13A2)。其抗体亚类均为IgG1;腹水效价分别为1∶106和1∶108;相对亲和力Ⅲ5A3在105以上,Ⅲ13A2在106以上。ELISA相加实验结果显示2株mAb识别相同或相近的抗原表位。结论成功地制备出抗CP4-EPSPS的2株mAb,为建立快速特异检测转基因植物(GMO)的实验方法提供了有力的工具。     

DHBV感染鸭特异免疫应答比较

目的 研究嗜肝病毒感染病毒清除向慢性化转变的免疫机理。方法 通过接种不同龄鸭、不同感染方案建立DHBV急性、慢性感染组及免疫组模型,并检测各组病毒复制及特异体液和细胞介导免疫反应。结果 成年鸭接种DHBV导致一过性病毒血症的形成,感染后抗－DHBs和抗-DHBc的水平比慢性感染组高（P＜0．05）,而免疫组抗－DHBs、抗－DHBc的水平又比急感染组高（P＜0．01）。特异细胞介导免疫反应（CMI）的分析提示急性感染组感染后10d外周血单个核细胞（PBMC）对特异抗原的体外增殖反应强于慢性感染组,但在感染5周内快速下降。而免疫组CMI与急性感染组比差异无显著意义。结论 感染宿主免疫应答特别是特异免疫反应是决定感染转归的重要因素。     

鸭乙型肝炎病毒体液免疫血清学指标的系统建立与应用

目的：建立简便,特异的鸭乙型肝炎病毒（DHBV）感染及免疫血清学检测系统。方法：制备、纯化检测所需同的抗DHVB前S区单克隆抗体腹水,DHBsAg和rDHBcAg , 对随机筛选的80份感染血清及实验感染1日龄重庆麻鸭系列血清分别进行DHBsAg 和抗－DHBc,抗－DHBs检测。结果：PCR方法检测出阳性66份,阴性14例,选用PCR阳性的66份标本,经HDBsAg ELISA检测出58份阳性,斑点杂交检出阳性份数为62份。与DHBVRCR相比较,灵敏度分别为87．9％和93．9％,而8只实验感染鸭仅2只在感染后第3周血清抗－DHBc阳性,抗体效价为1：10,至第4周一已为阴性,抗－DHBs则在所有标本均为阴性,结论：DHBV感染及免疫血清学酶联免疫方法的建立,为进一步研究DHBV感染后腹制规律及体风免疫应答状况奠定了基础。     

全长乙型肝炎病毒基因组的扩增及序列分析

目的 建立一种全长乙型肝炎病毒(HBV)基因组扩增及序列分析的新方法。方法 在HBV负链开环缺口处设计引物，使用TaKaRa LA Taq^TM DNA聚合酶进行扩增，聚合酶链反应产物克隆后进行全长序列测定。结果 用此方法成功获得HBV全基因组DNA序列。将已知序列的HBV全基因组重组质粒作为模板进行敏感性和保真性测定，其敏感性为10^2个初始模板，核苷酸的人为突变率为1．2bp／kb。结论 此方法可用于大规模HBV全基因组扩增和序列分析，为HBV的基础和临床研究提供了一种新方法。     

HBV DNA转染原代鸭肝细胞初步观察

目的：通过观测人HBV DNA在非哺乳动物－－鸭肝细胞中的复制和表达水平，探讨人HBV感染与复制的跨种属特异性，为建立人HBV DNA转染跨种属肝细胞模型奠定基础。方法：获取线性HBV DNA并电转染原代鸭肝细胞，电转后48h采用IMX系统检测鸭肝细胞中HBsAg表达水平，用Southern blot-ting和dot blotting检测HBV DNA复制情况。以单纯电击肝细胞为对照。结果：转染组原代鸭肝细胞裂解液中HBsAg为9．10（P／N值≥2．1为阳性），HBeAg为阴性；上清液中二者均为阴性。转染组原代鸭肝细胞裂解液dot blotting呈强阳性；转染组肝细胞总DNA Southern blotting显示约4.0kb以下分子涂抹带，为游离复制型HBV DNA，包括rcDNA,cccDNA与ssDNA等复制中间体，未见整合型HBV DNA－－高分子区（4.0-24.0kb)涂抹带，对照上述指标均为阴性。结论：人HBV DNA能在原代鸭肝细胞中复制和表达，可能为肝细胞内环境依赖性，无严格种属特异性限制。     

坤泰胶囊治疗子宫内膜癌术后绝经综合征的效果及对E2、FSH、β-EP、5-HT的影响

目的：探究坤泰胶囊治疗子宫内膜癌术后绝经综合征的临床效果。方法：选取2021年1月-2022年5月于清远市人民医院妇科门诊就诊的94例子宫内膜癌根治术后绝经综合征患者,采用随机数字表法分为两组,各47例。对照组予以一般治疗,观察组在对照组治疗基础上采用坤泰胶囊治疗。比较两组临床效果、症状改善情况、睡眠质量、生存质量、神经-内分泌指标变化及不良反应。结果：观察组总有效率高于对照组(P<0.05);观察组治疗4、8、12周后改良Kupperman指数(KMI)、围绝经期生存质量量表(MENQOL)及匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评分均低于对照组,5-羟色胺(5-HT)、β-内啡肽(β-EP)水平均高于对照组(P<0.05);两组治疗前后雌二醇(E₂)、促卵泡激素(FSH)水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：坤泰胶囊治疗子宫内膜癌术后绝经综合征取得较好效果,患者临床症状明显减轻,神经-内分泌功能显著改善,临床意义较高。     

腹腔镜诊治异位妊娠1082例

目的:探讨腹腔镜手术在异位妊娠诊治中的价值。方法:对2002年4月～2007年4月在我院行腹腔镜诊治的异位妊娠1082例进行回顾性分析。结果:1078例在腹腔镜下明确诊断并完成手术,行输卵管保守性手术694例,输卵管切除374例,卵巢妊娠物清除术11例,宫角切除术11例。诊断不明确4例,术后病理证实宫内早孕2例。发生持续性异位妊娠4例,其中1例追踪病理证实为癌变。无1例中转开腹。手术时间保守性手术组(86.8±11.2)min,术中出血量(90.5±18.4)ml;输卵管切除术组(30.5±8.8)min,术中出血量(15.9±5.6)ml。两组术后住院时间4～6天出院。术后监测血β-HCG,输卵管保守性手术血β-HCG转为正常时间为(14±3)天,患侧输卵管切除术(9±2)天,卵巢妊娠物清除术为(8±1)天,宫角切除术为(14±5)天。术后随访493例,随访时间6～18个月,经子宫输卵管碘油造影或通液术示输卵管通畅411例,随访期间自然宫内妊娠233例,妊娠率47.3%(233/493)。结论:腹腔镜有利于诊断早期异位妊娠,同时手术治疗异位妊娠疗效确切、安全、恢复快,属微创手术,应普及推广。     

产后抑郁症研究进展

产后抑郁症(PPD)是产科常见的精神和行为障碍,病因复杂,包括生理、心理、遗传、免疫等因素,具体病因目前尚未明确,针对PPD的治疗主要包括心理和药物干预。本文就PPD的发生现状、病因、治疗等进行概述。     

HCV核心蛋白抑制SFRP1基因启动子活性

 目的 探讨HCV 核心蛋白对Wnt信号通路抑制分子SFRP1启动子活性的影响。方法 以人肝癌细胞系Huh7基因组为模板,扩增SFRP1启动子区不同片段(-407～-27bp, -837～-27bp, -1202～-27bp, -1619～-27bp, -2029～-27bp),以pGL3-Basic为载体分别构建SFRP1启动子区截短报告质粒。将构建好的质粒与pRL-TK共转染HEK293细胞,确定启动子区活性最强区域;分别用编码HCV 核心蛋白的腺病毒或GFP对照腺病毒感染已转染重组报告质粒的SK-Hep1细胞,观察AdCore对SFRP1启动子活性的调控作用。结果 SFRP1启动子区域-407～-27bp片段活性最强;与pGL3-Basic对照组相比较,相对荧光素酶活性增加了37.31±4.45倍(P<0.01),pGL3-S2～S5的活性分别增加了28.74±2.47、13.56±2.52、12.97±0.87和8.29±0.09倍(P<0.01);HCV Core蛋白能够抑制SFRP1基因启动子区活性,其对pGL3-S1的抑制作用最强,与GFP对照组相比较,抑制率为63.8%±1.0% (P<0.01)。结论 HCV核心蛋白通过抑制SFRP1启动子区活性下调SFRP1基因的表达,可能参与Wnt/β-catenin信号通路的活化,并与原发性肝癌的发生密切相关。     

多房棘球绦虫ELP抗原在大肠埃希菌中的表达及其在免疫诊断中的初步应用

目的 实现多房棘球绦虫ELP蛋白在大肠埃希菌中的表达，制备高纯度、高特异性的重组抗原，为多房棘球绦虫感染的流行病学调查和临床诊断提供新的工具。方法 在建立了多房棘球绦虫elp基因克隆的基础上，应用亚克隆方法将目的基因插入原核非融合表达载体pQE30（＋）。经酶切鉴定，转化于大肠埃希菌，以IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE及Western blot进行鉴定。亲和层析纯化ELP蛋白，用于ELISA检测患者血清特异性抗体。结果 酶切鉴定、SDS-PAGE及Western blot分析证实，成功地构建了pQ-ELP原核非融合表达载体，该载体转化大肠埃希菌在IPTG诱导下能高效表达ELP蛋白。ELP重组抗原用于ELISA检测18份包虫病人血清均阳性，10份华支睾吸虫病、27份乙肝病毒感染者和10份健康人血清均为阴性。结论 多房棘球绦虫ELP抗原在大肠埃希菌中得到了高效非融合表达，初步实验结果显示该重组蛋白对包虫病具有较高的诊断价值。