蛋白免疫印迹法在G蛋白检测中的应用

目的：建立一项用蛋白免疫印迹法测定鸟苷酸结合蛋白（Ｇ蛋白）含量的技术。方法：取冷冻组织块２００ｍｇ置于４℃预冷的匀浆缓冲液中匀浆、离心后，ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，电转移法转移至硝酸纤维素膜上，经５％脱脂奶粉封闭后，依序与抗Ｇ蛋白抗体和辣根过氧化物酶标记的ＩｇＧ反应，化学发光法检测。结果：所得的Ｇ蛋白目标带清晰、明显，重复性好。不同种属大鼠主动脉、心房、心室、脑组织中Ｇｏα和Ｇｉα均为单一带，     

纳米金基因芯片结合通用引物1次PCR法同时检测多个病原菌的研究

目的基于基因分型技术构建通用引物1次PCR法的样品制备技术,并结合纳米金基因芯片检测系统实现1次对多个病原菌的检测分析。方法针对rDNA保守序列设计通用引物,实现1次PCR完成对各靶细菌ISR序列的扩增;设计针对各靶细菌的特异探针,构建纳米金新型基因芯片,并用芯片进行实际检测。结果设计的通用引物可实现对12种待检靶细菌的正确扩增;选用的各探针特异性强、可靠性好;芯片具有较好的灵敏度、特异性及可靠性;检测敏感性达到50 fmol/L;临床检测显示本方法准确可靠。结论与多重PCR样品制备法芯片比较,本芯片检测的步骤和复杂性大为减低,且有较好的检测性能,可用于各靶病原菌的检测。     

不同品系小鼠急性胰腺炎预后差异及其机制探讨

目的观察C57BL/6和BALB/C两品系小鼠急性胰腺炎预后差异,并探讨其预后差异的机制。方法腹腔内注射L-精氨酸的方法诱导两品系小鼠急性胰腺炎模型,观察其急性胰腺炎后24h病死率的差异,RT-PCR方法检测两品系小鼠肝、肺组织白细胞介素-1β(1L-1β)表达。结果急性胰腺炎时C57BL/6小鼠24h病死率(10%)与BALB/C小鼠病死率(40%)相比有显著性差异(P＜0．05)；两品系小鼠肝、肺组织1L-1β的表达在相同时相点有显著性差异(P＜0．05)。结论两品系小鼠急性胰腺炎时其组织炎症因子表达的差异与其病死率差异有明显相关性。     

人PPARα受体cDNA全长序列的克隆及测序

目的对人过氧化物酶体增殖物激活受体α(hPPARα)全长cDNA序列进行克隆并测序,为构建含hPPARα基因真核表达载体奠定基础。方法通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从HepG2细胞总RNA克隆hPPARα全长cDNA序列,胶回收目的条带后与pMD19-T载体连接并转化DH5α感受态菌,用BamH I、Sal I双酶切及基因测序筛选鉴定阳性克隆pMD19-hPPARα-T载体中hPPARα基因的完整性和忠实性。结果经酶切和DNA测序证实pMD19-hPPARα-T载体中插入的hPPARα基因序列与GeneBank中提交的序列(NM001001928)一致。结论成功克隆了hPPARα基因,构建了pMD19-hPPARα-T中间载体,为含hPPARα基因真核表达载体的构建奠定了基础。     

狗冲击伤血浆组织蛋白酶-D变化与损伤程度的关系

由冲击波造成的损伤(简称冲击伤)的诊断较为困难,特别是合并其他损伤时易被忽视,有文献报道多数常规指标在冲击伤时变化不明显,因此寻找一生化指标以判定冲击伤的有无及其发展与转归十分重要,也是广大临床医生所希望的,本实验在这方面作了初步尝试,现报告如下: 1 材料与方法 成年杂种狗52只,体重12.3±1.8kg,动物随机分成两组,置于BST-1型生物激波管内,用1.7～2.9     

创伤后肺损伤与中性粒细胞、肺泡巨噬细胞及氧自由基变化

本实验通过对循环中性粒细胞(PMN)和肺泡巨噬细胞(PAM)的氧自由基产生释放量、肺含水率、支气管肺泡灌洗液(BALF)中白蛋白浓度、肺组织匀浆脂质过氧化物(LPO)量和过氧化氢酶(CAT)活性等的测定,以探讨烧冲复合伤后PMN和PAM产生释放氧自由基的变化规律及其与创伤后肺损伤间的关系。实验结果显示,致伤后上述各指标除CAT活性外均明显增加,而肺组织中CAT活性却明显下降。提示致伤后循环PMN和PAM被激活,氧自由基增加可能与创伤后肺继发性通透性损伤的发生发展有密切的关系。     

基于表面等离子体共振检测原理的基因芯片的构建

我们首先采用Frens法制备纳米金胶体液,然后以氯金酸/羟胺法铺制二维纳米金单膜层,进行单分子自组装层技术(Self-assembled monolayer,SAM)固定探针,从而制备出具有表面等离子体共振(Surface plasmon resonance,SPR)响应的基因检测芯片,并进一步对芯片的自组装时间、探针浓度、灵敏度、特异性等指标进行优化验证. 结果表明2.5 nm胶体金所铺金膜芯片具有较好的SPR响应特性,且当固定探针浓度为1 500 nmol/L,自组装时间为4.5 h时,可以获得较好的SPR检测效率,能够准确识别碱基的错配,其检测灵敏度大约为10 fmol/L,可应用于SPR传感器的检测中.     

纳米金新型基因芯片检测系统结合限制性酶切非PCR法同时检测多种病原性微生物的研究

目的 研究将纳米金新型基因芯片检测系统与限制性酶切非PCR法结合以实现同时对多种病原性微生物进行检测的方法.方法 以幽门螺杆菌、肺炎支原体、沙眼衣原体、白色念珠菌、解脲脲原体、EB病毒作为检测目标,选择Hha Ⅰ内切酶作为工具酶.对所有待检样本核酸进行Hha Ⅰ酶切,对酶切产物进行同聚A加尾处理,并结合纳米金新型芯片检测系统,分别与特异性探针及通用探针进行两次杂交以完成对目标微生物的检测.通过对168份临床样品的检测,考察新构建芯片的检测结果与荧光定量PCR检测结果的符合率;对构建芯片的稳定性及检测灵敏度进行测试.结果 新构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术实现了对选定目标的检测.对168份临床样品的检测结果显示,该芯片检测与荧光定量PCR检测的结果有150例完全相符,符合率为89.2%;进一步芯片检测性能实验结果表明,该芯片检测稳定性为100%,检测敏感性为50pmol/L.结论 本研究构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术可以同时实现对细菌、真菌、支原体、衣原体及病毒等微生物的检测.适用性广且对大幅度提高检测通量有积极意义.     

失血致低血容量性休克大鼠心脏G蛋白表达及纳络酮的影响

目的：探讨纳络酮对失血致低血容量性休克大鼠的治疗作用及其对休克大鼠心脏组织Ｇ蛋白含量的影响。方法：颈总动脉放血,使平均动脉压降至６ｋＰａ（１ｋＰａ＝７．５ｍｍＨｇ）稳定１小时完成失血致低血容量性休克大鼠模型。２１只大鼠随机均分为：休克组（ＨＳ组）、纳络酮治疗组（ＮＡＬ组）和正常对照组（ＮＳ组）。在观察动脉血压、血气等指标的同时,采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ技术测定大鼠伤后６小时心脏组织中Ｇｓａ、Ｇ     

糖皮质激素的"非基因组效应"及其临床应用前景

糖皮质激素用于临床疾病的治疗具有悠久的历史,对于糖皮质激素作用的机制,最经典的理论就是基因组模式,即糖皮质激素与细胞浆中的受体结合,在分子伴侣蛋白如热休克蛋白系列的参与下转位到细胞核内,通过与靶基因上的负性激素反应原件或正性激素反应原件结合,通过下调（与负性激素反应原件结合）或上调基因的表达发挥生理或药理学效应,例如通过下调炎症介质的表达抑制炎症反应。但在研究中发现,糖皮质激素的某些效应极其迅速,用常规的基因组机制似乎难以解释,于是逐渐提出了糖皮质激素非基因组效应的概念,