Swyer综合征的分子遗传学分析

本文采用一组覆盖Y染色体长短臂及着丝粒部位的特异性DNA探针,对6例Swyer综合征患者进行了较全面的Southern印迹分析。研究结果表明,除了1例Swyer病人缺失了pDP34的检测片段外,在所有的患者中,未发现其Y染色体性别决定区内有任何可检测片段的丢失。因此,这些46,XY或47,XYY女性等Swyer综合征患者的病因可能有以下两种可能:一是Y染色体上的性别决定基因TDF或X染色体和常染色体上与性别决定有关的基因发生突变,致使这类病人发生性别反转;二是这些病人的Y染色体缺失了包括TDF在内的微小片段,但没有相应的探针将其检测出来。     

5'-非编码区型特异性引物检测HCV基因型

我们探索建立一种HCV基因分型方法,用5'非编码区(5'NCR)1,2,3,1b型特异性引物,应用逆转录套式PCR,对HCV RNA阳性血清进行分型 .对65份HCV RNA阳性血清的分型率为90.8%(59/65).59例中混合感染7例,1型50例,其中1b亚型46例;3型2例.从而认为:所用的型特异性引物可成功地对HCV基因分型,分型结果证实南京市HCV流行优势株为1b亚型.     

一种能精确检测人间期细胞核中21号染色体拷贝数的DNA探针

目的制备能精确检测人类间期细胞核中２１号染色体拷贝数的ＦＩＳＨ探针。方法利用万能引物ＰＣＲ法,从定位于人２１ｑ１１的ＹＡＣ克隆８８１Ｄ２分离制备ＤＮＡ探针,并用于与８例正常人和５例２１三体患者的外周血淋巴细胞中期相和间期核,及经细胞松弛素Ｂ（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎＢ）诱导的双核细胞进行ＦＩＳＨ分析。结果该探针具有以下特点：（１）长度集中于３５０～７５０ｂｐ;（２）其靶序列位于２１号染色体长臂上且紧靠着丝粒;（３）特异性强;（４）杂交信号明亮,容易辨认;（５）对中期相及间期细胞核中２１号染色体的检出率分别高达９９．６０％和９８．４０％。结论制备的ＤＮＡ探针能精确检测人类间期细胞核中２１号染色体的拷贝数,且适用于细胞分裂时２１号染色体分离情况的研究     

肺癌组织p16和Rb基因mRNA表达的双重原位杂交观察

目的：研究Ｐ１６和Ｒｂ基因在ｍＲＮＡ表达及其与肺癌的关系。方法：制备ｐ１６和Ｒｂ基因ｃＤＮＡ探针,采用双重原位杂交的方法,地８９例肺癌和正常肺组织进行了Ｐ１６ 一Ｒｂ基因ｍＲＮＡ表达的定位研究。结果：小细胞肺癌ｐ１６ｍＲＮＡ阳性表达率高达８２．４％,而非小细胞肺癌阳性率为４５．８％,两者差异有显著性。非小细胞肺癌ＲｂｍＲＮＡ阳性表达率为８１．９％,而小细胞肺癌一率仅５．９％,两者差异有高度显著性,     

CDKN 2/p16基因甲基化失活与肺癌关系的研究

目的 研究ＣＤＫＮ２／ｐ１６基因５’端调控序列区ＣｐＧ岛甲基化的状态与肺癌发展的关系。方法 采用甲基化敏感性核酸酶切基因组ＤＮＡ的方法,对８９例肺癌的ＣＤＳＮ２／ｐ１６基因进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析。结果 ８９例肺癌发现该基因甲基化２１例,甲基化频率为２３．６％（２１／８９）,其中１７例发生于４２例Ｐ１６蛋白 阴性表达的患者。结论 ＣＤＫＮ２ｐ／１６基因５’端ＣｐＧ岛甲基化可能是该基因失活的重     

一个能诱生戊型肝炎病毒中和抗体的ORF2编码蛋白短片段

目的：比较戊型肝炎病毒（HEV）第4基因型ORF2编码蛋白片段pN472-C617（aa472～617）和pN477-C613（aa477～613）的免疫原性，找到能诱生HEV中和抗体的ORF2编码蛋白的更短片段。方法：表达和纯化pN472-C617和pN477-C613，分别免疫BALB/c小鼠，以间接ELISA检测免疫血清的抗体效价，并以基于PCR的体外中和试验检测免疫血清的中和活性。结果：pN472-C617和pN477-C613可在大肠杆菌高效可溶性表达，纯化后的重组蛋白能在小鼠体内诱导出高效价的抗体。基于PCR的体外中和试验显示pN472-C617免疫血清可有效中和HEV，阻断其在敏感细胞表面的吸附和细胞内复制；而两端仅比pN472-C617各短5个氨基酸的pN477-C613的免疫血清不具有中和HEV的活性。结论：重组蛋白pN472-C617具有良好的抗原性和诱生中和抗体的能力，是目前文献报道中含有HEV中和抗原表位的最短ORF2编码蛋白片段，可作为重组亚单位候选疫苗用于HEV疫苗的开发。     

江苏地区献血者中TTVDNA的PCR扩增检测及部分基因序列分析

TTV是新发现的DNA病毒［1］,为了解TTV 的流行情况,笔者在不同人群中开展了TTV感染的分子流行病学调查。本文报告对江苏地区献血者进行TTV感染状况调查及对部分TTV感染株基因分析的结果。1 材料和方法1．1 标本采集 1999年5～10月期间,在南京市红十字血液中心参加献血的职业献血者和无偿献血者195人。其中96人为ALT正常献血者,99人为ALT异常献血者。采集静脉血2ml,分离血清,分装后置-20℃备用。     

一个非氨基糖甙类抗生素致聋家系mtDNA突变研究

目的：对１ 个有明确母系遗传的非氨基糖甙类抗生素致聋“线粒体耳聋”家系致病的分子生物学机制进行探索。方法：应用 Ｐ Ｃ Ｒ、 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 和 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析等分子生物学技术对其线粒体 Ｄ Ｎ Ａ突变进行研究。结果：家系中全部患者和１ 个母系亲属存在线粒体 Ｄ Ｎ Ａ１２ Ｓｒ Ｒ Ｎ Ａ 基因１５５５ 位点 Ａ Ｇ 的突变,家系中的正常后代和２０ 个正常对照个体未发现突变。结论：线粒体 Ｄ Ｎ Ａ Ａ１５５５ Ｇ 点突变是导致该家系耳聋的主要因素之一。     

口服避孕药服用者的姊妹染色单体互换

对口服避孕药的诱变效果的研究至今还很少见,Badr等的早期工作证明,雌性小白鼠大剂量服用该药后,显性致死突变率很高,但在口服避孕药引起服用妇女的染色体畸变率方面,后来的一些研究结果互相矛盾,因此作者对口服避孕药的服用者的姊妹染色单体互换(SCE)频率进行了研究,因为SCE是目前公认的测定药物诱变活力比较敏感的指标。作者选择了45名妇女作为试验对象,其中15人是正常健康妇女,15人是怀孕7～9个月的妇女,15名妇女为口服避孕药服用者。每人每天口服含d-甲基炔诺酮 15μg、乙烯基雌二醇30～50μg的避孕药,连续服药6～24个月(平均16个月),这些妇女的年     

CDKN2/p16基因存在状态与肺癌

目的　研究CDKN2 /p16基因缺失和蛋白丢失在肺癌发展中的作用。方法　采用免疫组化和改良标本处理的PCR技术 ,对 89例肺癌病人手术标本CDKN2 /p16基因第 1、2外显子纯合缺失和P16蛋白表达丢失情况进行分析对比研究。结果　CDKN2 /p16基因第 1或 (和 )第 2外显子总缺失率为2 5 8% (2 3/ 89) ,P16蛋白丢失率为 47 2 % (4 2 / 89) ,基因的缺失和蛋白的丢失集中发生于非小细胞肺癌(NSCLC) ,并与转移和分期有关。结论　CDKN2 /p16基因的异常可能是NSCLC区别于小细胞肺癌(SCLC)的特有的分子事件 ,其在NSCLC的发生发展中起一定的负调控作用