逆转录病毒介导IL－2基因导入肝癌细胞的研究

利用逆转录病毒载体系统ＰＡ３１７／ＬＮＣ－ＩＬ－２所产生的含有ＩＬ－２基因及新霉素抗性基因（ｎｅｏｒ）的重组病毒，经共培养转染ＳＭＭＣ－７７２１肝癌细胞株。ＩＬ－２基因受巨细胞病毒早期启动子调控，转染后的细胞置于含新霉素类毒性药物Ｇ４１８（４００ｕｇ／ｍｌ）培养基内培养、筛选３０天，结果果转染率约为１～２％。对存活下来的转染有ＩＬ－２基因和新霉素抗性基因的细胞形态和生长情况进行观察，同时从水平及蛋白质水平对外源性基因的转录和翻译进行检测。结果表明：ＳＭＭＣ－７７２１肝癌细胞在ＩＬ－２基因转染前后形态及生长情况无明显变化；培养上清活性检测发现转染后为转染前的２０～３０倍；逆转录ＰＣＲ分析显示转染后的ＩＬ－２ｍＲＮＡ量明显高于转染前。研究表明我们已成功地将ＩＬ－２基因导入肝癌细胞并获得持续、稳定、高效表达。     

电镜下观察人类染色体的超微结构

本文作者介绍了用电镜观察人类染色体标本的新技术。他们用HeLa S_3细胞悬浮培养经过胸腺嘧啶(1mM,16h)两次同步处理,继之用较高浓度(0.1μg/ml)秋水仙素,16小时后按常规方法制片得到80～90％的有丝分裂指数,分裂相为高度收缩的粗短染色体,作者将这样的染色体直接滴在包有碳和树脂类外衣的电镜网栅(grid)上,观察染色体的结构。其结果看到了粗大的染     

p16和Rb基因蛋白在肺癌中的表达

目的：研究ｐ１６和Ｒｂ基因蛋白的表达与肺癌临床病理学特征的关系。方法：采用免疫组织化学方法对８９例肺癌进行了ｐ１６和Ｒｂ蛋白的定位观察。结果：肺癌；ｐ１６基因蛋白的总丢失率为４７．２％，且与肺癌的组织学类型，淋巴结转移，临床病理分期有关。Ｒｂ基因蛋白的总丢失率为３１．５％，与组织学类型有关。     

抗人甲状腺素单克隆抗体的制备及其初步的临床应用

本文用甲状腺素(T_4)甲酯—BSA抗原免疫BALB/C小鼠,获得4株分泌抗人甲状腺素单克隆抗体的杂交瘤细胞系。亚类鉴定均属IgG_1型。将单克隆抗体应用在放射免疫分析(RIA)中,取代多克隆抗体,证实其在甲状腺疾病诊断中,甲状腺机能亢进的诊断符合率高于多克隆抗体,显示其特异性强、灵敏度高、亲和力好(亲和常数K=1.26x10~(10)L/M)、反应平衡时间短等优点。     

江苏地区献血者中TTVDNA的PCR扩增检测及部分基因序列分析

TTV是新发现的DNA病毒［1］，为了解TTV 的流行情况，笔者在不同人群中开展了TTV感染的分子流行病学调查。本文报告对江苏地区献血者进行TTV感染状况调查及对部分TTV感染株基因分析的结果。 1 材料和方法 1．1 标本采集 1999年5～10月期间，在南京市红十字血液中心参加献血的职业献血者和无偿献血者195人。其中96人为ALT正常献血者，99人为ALT异常献血者。采集静脉血2ml，分离血清，分装后置-20℃备用。     

46,XY女性和47,XYY女性的分子遗传学分析

采用Y-DNA特异性探针对4例46,XY女性和1例47,XYY女性进行Southern印迹分析,结果表明除1例46,XY女性有pDP34检测片段丢失外,其他46,XY女性和47,XYY女性均无任何可检测Y-DNA片段丢失。X-Y异常交换学说不能解释这些ZFY阳性的46,XY女性和47,XYY女性的病因,提示可能存在其他遗传机理。本文就基因突变、性腺受体缺陷等可能发病机理进行探讨。     

用套式PCR检测新生儿先天性巨细胞病毒感染

选取HCMV AD169棘EcoRI J片段区的IEA基因第四外显子为扩增靶序列，合成两对引物，外引物扩增242bp片段，内引物扩增146bp的片段，此方法很灵敏，可检测5-10fg HCMV DNA．我们随机采集51名新生儿脐带血，应用NaI法提取垒血DNA为模板进行扩增，结果表明；32名为HCMV DNA阳性，以口腔粘液DNA(40名)为模扳进行扩增，24名为HCMV DNA阳性。因此，套式PCR可用于临床上快速准确地检测HCMV。     

人亲环素A基因克隆及在大肠杆菌中表达

目的 :用基因重组技术表达人亲环素 A( Cy PA) ,以避免从人组织材料中提取纯化该蛋白的麻烦。　 方法 :应用反转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术从人淋巴细胞系 ( MT4 )总 RNA中扩增得到 Cy PA基因片段 ,并用重组 DNA技术对该基因片段进行克隆 ,构建表达载体 ,转入大肠杆菌进行表达。　 结果 :DNA序列分析表明 ,得到的基因片段与设计编码 Cy PA的结构基因序列完全相同。所构建的表达载体 p ET11/Cy PA转入大肠杆菌获得表达 ,重组蛋白表达量占菌体可溶性蛋白的 4 1% ,经测定具有肽基脯氨酸顺 /反异构酶活性。　 结论 :利用基因重组技术使大肠杆菌高效表达出有生物活性的人 Cy PA。     

进行性肌营养不良(Duchenne型)的早期诊断

本文介绍了血清肌酸激酶(SCK)活性对进行性肌营养不良“Duchenne型”(D.M.D.)进行早期诊断的方法,从而使已有D.M.D.儿子出生的家庭避免再次出现此种病例。常规的血清酶分析表明,SCK的正常范围是:成年人为0—50U/l,3周到1岁的儿童为0—80U/l,醛缩酶为0.9—2.5U/l。而D.M.D.患者及其携带者则不同,其SCK和醛缩酶的活性都大大超过正常值,特