转染腺病毒载体对雌二醇促垂体催乳素细胞增殖的影响

目的探讨转染腺病毒载体对雌二醇促垂体催乳素细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法应用BrdU标记法检测转染腺病毒载体后雌二醇促垂体细胞增殖作用的变化,实时荧光定量PCR方法检测腺病毒载体转染组雌激素反应基因ABCG2的mRNAs表达水平,Western Blot方法检测腺病毒载体对垂体前叶细胞磷酸化p38MAPK蛋白表达的影响。结果转染腺病毒载体显著下调了雌二醇的促催乳素细胞增殖作用(P0.01),腺病毒转染组磷酸化p38MAPK蛋白表达显著增加,ABCG2基因的表达显著下降(P0.01)。结论腺病毒载体转染下调雌二醇促垂体催乳素细胞的增殖作用,其机制可能与腺病毒载体改变p38MAPK和ABCG2的表达有关。     

单纯疱疹病毒腺苷激酶基因对髓母细胞瘤杀伤作用的研究

目的评估单纯疱疹病毒腺苷激酶(herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV-tk)基因对髓母细胞瘤细胞系Daoy的杀伤作用。方法 HSV-tk基因稳定转染人的髓母细胞瘤细胞系Daoy,获得Daoy-tk细胞;Daoy-tk细胞与Daoy细胞按不同比例混合,给予不同浓度的更昔洛韦(ganciclovir,GCV),7天后应用噻唑蓝(MTT)法测定细胞生存率。结果 Daoy-tk在GCV浓度为3μg/ml时,即可对Daoy细胞产生最大杀伤作用;Daoy-tk与Daoy细胞比例达到1:4时Daoy-tk仍有明显的抗肿瘤作用。结论 HSV-tk/GCV系统对人的髓母细胞有明显的杀伤作用。     

大鼠脑缺血时紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5表达的变化

目的研究脑缺血后血脑屏障通透性和紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的变化。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,采用伊文氏兰(EB)法检测缺血后血脑屏障通透性的变化。应用免疫组织化学的方法观察occludin和claudin-5在缺血脑组织中的分布,采用RT-PCR、Wesrern blot法检测大鼠缺血脑组织occludin和claudin-5的mRNA和蛋白的表达变化。结果脑缺血2h后血脑屏障通透性显著增加(P0.01),紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5在脑微血管内皮细胞上呈阳性表达,occludin和claudin-5的mRNA和蛋白均比正常对照组显著降低(P0.01)。结论脑缺血时血脑屏障通透性的增加可能与紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的降低相关。     

WWC3蛋白在胶质瘤干细胞中的表达及作用

目的 探讨WWC3在胶质瘤干细胞(GSCs)中的表达,以及通过调节Hippo通路调控GSCs增殖、迁移和侵袭的作用.方法 Western blot检测Hippo通路相关分子的表达.过表达WWC3后,检测MST1、LATS1和YAP的磷酸化与表达;免疫荧光检测YAP分布变化;CCK8和Transwell检测GSCs增殖、迁移和侵袭的变化.结果 WWC3、MST1和LATS1在GSCs中的表达均显著降低,而YAP的表达显著升高.过表达WWC3显著增加p-MST1/MST1、p-LATSl/LATSl、p-YAP/YAP的表达水平,抑制细胞核中YAP表达,抑制GSCs的增殖、迁移和侵袭.结论 过表达WWC3通过降低Hippo通路活性抑制GSCs的增殖、迁移和侵袭.     

ATP敏感性钾通道蛋白在缓激肽选择性开放血肿瘤屏障中的表达

目的 探讨ATP敏感性钾通道蛋白在缓激肽选择性开放血肿瘤屏障中的作用.方法 建立大鼠脑胶质瘤模型, 颈内动脉灌注缓激肽后,采用免疫组化SABC法和 Western blot法测定肿瘤组织ATP敏感性钾通道蛋白的功能亚基Kir6.2的分布和表达的变化.结果 脑胶质瘤大鼠经颈内动脉灌注缓激肽后,其肿瘤内血管内皮细胞的 Kir6.2蛋白表达比对照组显著增多, 且以灌注后10 min 增加最为显著. 结论 ATP敏感性钾通道蛋白表达上调可能是缓激肽选择性开放血肿瘤屏障的重要机制之一.     

缓激肽对大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞及胶质瘤细胞影响的体外研究

目的:体外探讨缓激肽(bradykinin,BK)的作用靶点细胞及BK选择性开放血脑屏障的可能机制。方法:通过免疫荧光测定脑血管内皮细胞、胶质细胞及C6细胞在不同剂量BK作用前后的细胞内钙离子变化,并且通过WesternBlot测定三组细胞的BKB2受体表达水平。结果:小剂量BK可以引起肿瘤细胞内的钙离子水平升高,而只有大剂量BK才能触发星形胶质细胞内的钙离子水平变化,脑血管内皮细胞对大、小剂量BK均无任何反应;三组细胞BKB2受体的WesternBlot整合密度值(integrateddensityvalue,IDV)分别为5000.12±1110.21(n=2)、18480.88±4119.86(n=3)和63032.13±2802.71(n=4),组间比较差异有统计学意义。结论:BK的直接作用靶点是星形胶质细胞及肿瘤细胞,两种细胞B2受体表达水平差异是小剂量BK选择性开放血肿瘤屏障的物质基础;BK可能通过某些细胞间信使起到调节脑血管内皮细胞通透性的作用。     

水飞蓟宾对胶质瘤细胞替莫唑胺化疗敏感性的影响

目的:研究水飞蓟宾在增加胶质瘤细胞对替莫唑胺化疗敏感性中的作用。方法:CCK-8法检测应用水飞蓟宾前后,替莫唑胺对胶质瘤细胞存活率的影响;Western Blot法检测水飞蓟宾及替莫唑胺对耐药细胞中Bcl-2、p-Akt蛋白表达水平的影响。结果:水飞蓟宾增加替莫唑胺对胶质瘤细胞的增殖抑制作用;替莫唑胺耐药的胶质瘤细胞中Bcl-2蛋白表达水平和Akt磷酸化水平显著升高;水飞蓟宾能够降低耐药细胞中Bcl-2的蛋白表达水平和Akt磷酸化水平。结论:水飞蓟宾能够增加胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性,并能够在一定程度上逆转胶质瘤细胞对替莫唑胺的耐药,其机制可能是通过下调PI3K/Akt信号通路和Bcl-2表达水平实现的。     

血脑屏障氧糖剥夺体外模型大鼠脑微血管内皮细胞miRNA表达变化

目的 研究体外血脑屏障氧糖剥夺模型大鼠脑微血管内皮细胞miRNA表达变化.方法 提取纯化大鼠脑微血管内皮细胞,建立血脑屏障氧糖剥夺模型,模拟在体缺血,在氧糖剥夺60 min,应用基因芯片技术检测氧糖剥夺前后miRNA表达谱.利用靶基因软件对部分高表达的miRNA进行靶基因预测.结果 共有278个miRNA表达,与正常对...     

神经干细胞移植对脑损伤大鼠皮层connexin43表达的影响

目的观察神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植治疗大鼠脑损伤前后大脑皮质神经元的缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)表达变化,探讨NSCs移植治疗对脑外伤功能恢复的作用。方法体外培养NSCs,自由落体撞击大鼠左脑大脑皮质运动感觉区以制作脑外伤模型,采用免疫组织化学、RT-PCR来检测脑外伤后2w和4w及脑外伤神经干细胞移植后2w和4w时的Cx43的表达变化。结果大鼠大脑皮质Cx43的表达水平创伤组明显多于sham组,移植组Cx43的表达水平明显多于创伤组(P<0.05)。结论 Cx43的表达变化可能与NSCs移植对脑外伤恢复作用有关。     

miR-19a对血肿瘤屏障通透性的影响

目的研究miR-19a对血肿瘤屏障通透性的影响。方法将miR-19a模拟物转染至人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3,应用real-timePCR法检测miR-19a的表达。用过表达miR-19a的hCMEC/D3细胞和人U251胶质瘤细胞建立体外血肿瘤屏障模型,跨内皮电阻测量系统检测血肿瘤屏障跨内皮阻抗值的变化;Western blot和免疫荧光法检测体外血肿瘤屏障hCMEC/D3细胞中,紧密连接相关蛋白ZO-1和occludin的表达。结果经miR-19a模拟物转染后,hCMEC/D3细胞中miR-19a的表达水平显著升高;血肿瘤屏障跨内皮阻抗值显著下降;体外血肿瘤屏障hCMEC/D3细胞中,紧密连接相关蛋白ZO-1和occludin的表达水平显著降低,在细胞膜上呈不连续分布。结论 miR-19a过表达能显著增加血肿瘤屏障的通透性,其机制之一可能与降低紧密连接相关蛋白相关。