重组梅毒螺旋体表位抗原及多表位嵌合抗原研究

目的 :为梅毒检测试剂提供抗原性强、特异性高的重组表位抗原和多表位嵌合抗原。方法 :对梅毒螺旋体的主要抗原蛋白TpN15 ,TpN17,TpN44 .5和TpN47的优势抗原表位进行计算机分析 ,从中选取具有强抗原性的表位。根据大肠杆菌的偏性密码子 ,推断出这些抗原表位的基因序列 ,采用化学合成法合成表位抗原基因并克隆表达。结果 :获得了梅毒各抗原蛋白的优势抗原表位 ,构建了各表位基因及多表位嵌合基因的表达质粒 ,在E .coli中获得了高效表达。用获得的重组蛋白质纯品 ,对 12 2份心磷脂测定阳性血清样品进行测定 ,证明重组梅毒表位抗原和多表位嵌合抗原具有预期的抗原活性。结论 :重组梅毒表位抗原及多表位嵌合抗原具有较好的抗原活性 ,可用于研究不同类型的梅毒检测试剂     

HIV—1整合酶的纯化及活性检测

含整合酶基因的重组质粒ＰＥＴ－ｐ３１在Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中以包含体形式高效表达ＨＩＶ－１整合酶。初步纯化的包含体用８ｍｏｌ／Ｌ尿素变性溶解,经阳离子交换剂柱层析和分子筛柱层析纯化,并通过梯度透析的复性过程去除尿素,获得可溶性及高纯度Ｐ３１。测定证实,复性后的Ｐ３１蛋白呈现良好的３’加工,键转移及去整合活性。     

SARS病毒不同基因区抗原与SARS患者血清反应性的研究

目的研制非典型肺炎病毒(SARS病毒)不同基因区抗原,探讨SARS病毒感染机体不同基因区抗体免疫应答。方法根据目前已知SARS病毒的基因组序列及其编码的蛋白质,运用计算机抗原表位预测技术,筛选4种SARS病毒主要抗原表位。合成抗原表位基因,克隆到表达载体pBVILl,在E．coli中表达S蛋白和N-蛋白,E-蛋白和M-蛋白为合成肽。结果用SARS病毒编码的S(Spike)蛋白、M-蛋白、N-蛋白和E-蛋白分别与46份SARS患者恢复血清反应,检测血清中IgG抗体,结果S蛋白、N-蛋白、E-蛋白和M-蛋白检出率分别为71．7％(33／46),89．13％(41／46),30．43％(14／46),52．17％(24／46)。结论感染SARS病毒病人血清中S蛋白、M-蛋白、N-蛋白和E-蛋白的免疫应答有显著差异。     

金标渗透法快速检测血清中丙型肝炎病毒抗体

采用基因工程技术克隆表达了丙型肝炎病毒（HCV）－Core-Ns3-Ns4优势表位嵌合抗原，研制出金标渗透法快速检测丙型肝炎病毒抗体试剂，与抗丙型肝炎病毒抗体酶联免疫检测试剂（HCV－ELISA）和重组免疫印迹分析检测试剂（HCV－RIBA3.0)进行了比较，其特异性、敏感性均达到了ELISA试剂水平。     

抗HCV分片段酶联免疫检测试剂的临床评价

在克隆表达了丙型肝炎病毒不同区抗原（HCV－C、NS－3、NS－4、NS－5）的基础上，研制出抗HCV抗体分片段酶联免疫检测试剂。对该试剂特异性、灵敏度进行了临床评价。结果显示该试剂具有良好的特异性和灵敏度。     

多型别HCV-E1复合表位抗原研究

目的 设计多型别HCV-E1表位复合免疫原,通过免疫小鼠,探讨其在丙型肝炎治疗性疫苗与诊断试剂研究中的应用.方法 分析比较HCV-E1包膜糖蛋白B细胞表位序列,选取几个代表性基因型的中和性优势抗原表位,再结合泛DR辅助性T细胞表位(PADRE),构建含有不同HCV型别E1表位抗原基因和通用T辅助细胞表位基因的原核表达质粒.结果 成功构建了含有HCV 1a、1b、2a、3a、4a和6a等基因型E1中和性表位以及通用T辅助细胞表位的质粒pBVIL1/E1s-PADRE,该质粒转化大肠杆菌后获得的工程菌,通过诱导培养可以高效表达重组多型别HCV-E1表位复合抗原,所获得的多型别HCV-E1表位复合免疫原可在BALB/c小鼠体内诱发强烈的体液免疫反应,ELISA检测抗体水平可达到1:12 800.结论 新构建的HCV-E1表位复合免疫原具有很好的免疫原性,为进一步研究HCV疫苗奠定了基础.     

丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂的研制及初步应用

目的　研制丙型肝炎病毒核心抗原 (HCV cAg)ELISA检测试剂 ,用于诊断早期丙型肝炎。方法　用基因工程表达的HCV cAg ,免疫Balb/c小鼠 ,制备抗HCV cAg单克隆抗体 ,建立检测HCV cAg双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA) ;以此检测 12 5份抗 HCV、抗 HIV、抗 TP阴性 ,但单项ALT高的献血者血浆。结果　 12 5份单项ALT高的献血者血浆中检出 9份HCV cAg阳性。结论　HCV cAg双抗体夹心ELISA试剂 ,有望用于早期丙型肝炎诊断。     

白介素6生物活性简易测定法及其临床应用

报道了应用白介素６（ＩＬ－６）依赖细胞株７ＴＤ１，以及ＭＴＴ比色法测定ＩＬ－６生物活性的简便方法。本法测定结果和￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法一致；检测灵敏度为１ｐｇ或１Ｕ／ｍｌ以下；可用于正常人或病人血清中ＩＬ－６水平的测定。采用本法检测了我国正常成人５５例，血清ＩＬ－６活性为６．７５±２．９８Ｕ／ｍｌ；而１１例肺结核排菌者和１２例肺癌患者的血清ＩＬ－６活性分别为１４．２９±８．４６和１７．１４±９．１２Ｕ／ｍｌ，与正常人有显著差别（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．００１），为进一步临床应用奠定了基础。     

HCV核心蛋白诱导HepG2细胞凋亡作用的研究

多家实验室通过酵母双杂交等技术证实 ,Ｃ蛋白可与ＴＮＦＲ 1、ＬＴ βＲ、ＮＦ κＢ及ＡＰ 1等信号分子相互作用 ,影响有关细胞凋亡的信号转导 ,但这种影响的最终结果 ,是诱导凋亡还是抑制凋亡 ,尚有争议。在建立ＨＣＶＣ区转基因细胞模型的实验过程中 ,观察到Ｃ蛋白的表达对人肝源性肿瘤细胞具毒性作用 ,进而研究证实这种细胞毒作用是由于Ｃ蛋白诱导细胞凋亡所致。将原核表达的ＨＣＶＣ蛋白通过单细胞显微注射技术导入ＨｅｐＧ2细胞胞浆内 ,观察细胞生长与增殖变化 ,并用ＡＯ/ＥＢ荧光染色和ＴＵＮＥＬ试剂检测细胞凋亡情况。结果表明 ,与…     

丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂的临床评价

[目的]对研制的丙型肝炎病毒核心抗原（HCV—cAg）ELISA检测试剂进行临床特异性及敏感性评价。[方法]制备抗HCV-核心区（Core）抗原四株单克隆抗体，研制出双抗体夹心检测HCV～core抗原酶联免疫检测（ELISA）试剂。三家临床单位收集抗HCV阴性样品3040份，HBsAg阳性100份，抗HIV阳性40份，从10万份抗-HCV筛查出临界样品28人份。[结果]3040份阴性样品检测有3份HCV—cAg阳性，3份经HCVPCR检测有1份阳性，100份HBsAg阳性，40份抗HIV阳性样本检测均为阴性，在10万份抗HCV抗体筛查样品中，选择28份抗-HCV检测临界样品进行HCV—cAg检测，有4份阳性，4份HCV—cAg阳性样品中有3份HCV—RNA检测阳性。[结论]研制的双抗体夹心HCV-核心抗原ELISA试剂具有很好的特异性和灵敏度。