辐射诱发基因组不稳定性肝细胞Ran基因过表达和RNAi模型的构建

目的构建基因组不稳定细胞Ran基因过表达和RNAi模型,为进一步研究该基因在辐射诱发基因组不稳定的功能提供研究工具。方法根据Ran基因信息,以慢病毒载体GV218设计合成2种重组质粒,分别包含Ran基因全长序列以及阴性对照序列;以慢病毒载体GV248设计合成2重组质粒,分别包含Ran基因的小干扰序列以及用于干扰对照的阴性序列。利用Western blot和qPCR进行过表达和RNAi重组质粒表达的检测;通过转染293T细胞进行慢病毒的包装;利用qPCR和荧光法分别进行滴度的检测;再用包装好的慢病毒感染辐射诱导基因组不稳定性HL-7702肝细胞,利用qPCR检测Ran基因表达量。结果测序结果表明重组质粒构建成功,并能够有效转染293T。过表达病毒滴度为2.0×108 TU/mL;RNAi病毒滴度为3.0×108 TU/mL。过表达慢病毒能有效地上调Ran基因的表达,过表达效率为85%。RNAi干扰慢病毒能够有效抑制Ran基因的表达,抑制效率为73%。结论成功构建基因组不稳定肝细胞Ran基因过表达和RNAi模型,为进一步研究Ran基因在辐射诱发基因组不稳定细胞中的功能提供了有效的研究工具。     

12C6+重离子束照射人淋巴细胞蛋白质组分析

目的 探讨¹²C⁶⁺离子束照射对人淋巴细胞蛋白质组的影响。方法 将人淋巴细胞Peng-EBV按照射剂量分为0.1、0.5和2.0 Gy组,未照射为对照组。使用¹²C⁶⁺离子束进行照射,吸收剂量率为0.3~0.5 Gy/min。利用同位素标记的相对和绝对定量技术（iTRAQ）分析受照淋巴细胞的蛋白质表达,筛选出差异表达蛋白质。对差异表达的蛋白质进行基因本体（GO）分析、相互作用网络分析及通路分析。结果 在4组样品中共鉴定到5 158种蛋白质,与对照组相比,0.1 Gy组差异蛋白质有91种,0.5 Gy组有191种差异蛋白质,2.0 Gy组有68种差异蛋白质;3组共同差异表达的蛋白质有11种,其中,7种蛋白质表达上调,4种下调。对3个剂量组的差异表达蛋白质进行生物信息学分析显示,这些蛋白质主要与生物代谢及其调节过程、蛋白结合以及催化反应过程等有关,纤维黏连蛋白-1（FN1）和热休克蛋白1B（HSPA1B）是蛋白质相互作用网络的关键性节点。结论 不同剂量重离子照射诱导人淋巴细胞蛋白质组发生改变的机制不同,而且SZT2、FN1、HSPA1B蛋白质可能在重离子照射的损伤机制中发挥重要作用,有望成为重离子诱发辐射损伤的分子生物学标志。     

重离子生物效应的研究进展

重离子是一种具有特殊物理性质的带电离子,在射程末端可形成Bragg峰。与X射线、γ射线等低传能线密度（LET）射线相比具有较高的相对生物效应。笔者从细胞水平和分子水平简要介绍了重离子的辐射生物效应,以及与低LET射线的主要区别。     

人外周血淋巴细胞照射后6小时差异基因表达谱的变化

目的 从基因水平上为放射性从业人员的健康损伤提供依据。方法 利用人全基因组基因芯片技术对离体人外周血淋巴细胞0.1Gy、0.2Gy、0.5Gy、1.0Gy四个剂量水平上照后6h的辐射差异基因进行了筛选和分析。结果 0.1Gy照后6h的差异基因有1 177条;0.2Gy照后6h的差异基因有1 922条;0.5Gy照后6h的差异基因有492条;1.0Gy照后6h的差异基因有2 615条;4个照射剂量点的共同差异基因有114条;同时RT-PCR结果显示,EGR1、TAIAP1及HLA-DMB 3个基因的相对定量结果与芯片检测结果趋势是一致的。结论 本研究在离体外周血淋巴细胞不同剂量照后6小时的研究过程中发现了许多有意义的差异基因,这将为进一步辐射差异基因的筛选和辐射损伤机制的研究提供依据。     

HAVCR2基因沉默对辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 研究HAVCR2基因沉默对辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响。方法 利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术沉默辐射诱发基因组不稳定肝细胞中HAVCR2基因的表达,通过流式细胞术检测HAVCR2基因沉默对细胞周期及凋亡的影响;利用实时荧光定量PCR方法检测HAVCR2基因沉默后p53基因的表达变化。结果 慢病毒介导的RNAi技术能有效沉默HAVCR2基因的表达（t=19.21,P<0.05）,与对照组相比,HAVCR2基因的沉默可导致基因组不稳定肝细胞G₂期阻滞（t=-3.41,P<0.05）,细胞凋亡率降低（t=3.65,P<0.05）;实时荧光定量PCR检测结果表明,HAVCR2基因的沉默诱发基因组不稳定肝细胞p53基因的表达下调（t=4.82,P<0.05）。结论 HAVCR2siRNA使辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡率降低,使基因组不稳定肝细胞发生G₂期的阻滞。     

γ射线累积照射对大鼠生化指标的影响

<正>本实验采用137Csγ射线对成年雄性SD大鼠进行累积照射,观察受照大鼠血液白细胞数(WBC)及血清γ-谷氨酰转移酶(GGT)活性等生化指标的变化,初步探讨累积照射对大鼠血液生化指标的影响及可能机制。1材料和方法1.1实验动物及辐照条件:SPF级SD大鼠,体质量310～360g,北京军事医学科学院实验动物中心生产,生产许可     

137Cs γ射线累积照射大鼠后血清蛋白质组分析

目的 探讨¹³⁷Cs γ 射线累积照射对SD大鼠血清蛋白质的影响。方法 将30只SD大鼠按随机数字表法分为3个剂量组：0.2 Gy累积照射组、2 Gy累积照射组和健康对照组。采用¹³⁷Cs γ 射线累积照射SD大鼠,剂量率为0.336 mGy/min。利用同位素标记的相对和绝对定量技术（iTRAQ）分析累积受照大鼠的血清蛋白质表达,筛选出差异蛋白质。对差异表达的蛋白质进行GO注释分析及相互作用网络分析。结果 在3组样品中共鉴定到363种蛋白;与健康对照组相比,0.2 Gy照射组差异蛋白质有50种,16种蛋白质上调,34种下调;2 Gy照射组有64种差异蛋白质,31种上调,33种下调;两组共同表达差异的蛋白质有29种,其中,10种蛋白表达上调,19种下调。根据细胞组成注释,多数蛋白为胞质蛋白、膜蛋白;根据分子功能注释,差异蛋白以蛋白质结合和酶活性调节等为主。两个剂量组共同差异表达的蛋白质构成相互作用网络。GSTP1、PGK1、P4HB、CAPZA1是蛋白质相互作用网络的关键性节点,这几个蛋白质直接或间接地与其他差异蛋白存在相互作用。结论 不同剂量累积照射可诱导大鼠血清蛋白质组的改变,GSTP1、PGK1、P4HB、CAPZA1蛋白可能在累积照射的损伤机制中发挥作用。     

单次60Co γ射线照射致大鼠尿液代谢谱变化及其时间相关性

目的：探讨γ射线单次照射对大鼠尿液代谢物的影响,初步筛选与γ辐射损伤密切相关的尿代谢物。方法：15只成年雄性SD大鼠接受60Coγ线单次全身照射,剂量6.0 Gy,剂量率0.7 Gy/min。照射前1 d及照射后第1、2、3、4、8、18、30、45 d分别收集大鼠尿液。检测尿样1H NMR谱,对1H NMR谱数据进行主成分分析（PCA）和偏最小二乘判别分析（PLS-DA）,寻找对照射后各时间点1H NMR谱与照射前1H NMR谱差异均有较大贡献并且变化趋势一致的差异代谢物（简称共同差异代谢物）,分析这些代谢物相对含量变化与照后时间的相关性。结果：60Coγ线照射可造成大鼠尿液1H NMR谱明显变化。对照后1～45 d大鼠尿液1H NMR谱变化贡献较大的共同差异代谢物有牛磺酸、氮氧化三甲胺、脯氨酸、肌苷、柠檬酸盐、琥珀酸盐、醋酸盐和乳酸盐。照后1～45d,脯氨酸和牛磺酸相对含量均比照射前明显升高,柠檬酸盐、琥珀酸盐相对含量均比照射前降低;而三甲胺氮氧化物、醋酸盐和乳酸盐相对含量则呈现先升高（照后1 d）后下降（照后2～45 d）趋势。结论：大剂量γ射线照射造成的大鼠机体代谢紊乱在照射后45 d仍未得到完全恢复,表现为受照大鼠尿中代谢物牛磺酸、脯氨酸、肌苷、柠檬酸、琥珀酸、醋酸盐和乳酸盐相对含量的持续变化。牛磺酸、脯氨酸有望成为大剂量急性辐射损伤的组合代谢标记物。     

^60Coγ射线诱发人外周血GADD45A基因表达的变化研究

目的探讨电离辐射诱导人外周血GADD45A基因的表达变化,为寻找急性照射条件下辐射损伤早期诊断标志物提供实验依据。方法采集无急慢性疾病、不抽烟、年龄在26～29周岁的3名男性非放射性工作者外周血各10ml,分为10组,每组1ml。利用中国辐射防护研究院。^60Co照射装置对采集的血样分组照射,剂量率为0．313Gy／min。吸收剂量分别为0．05、0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1、2和3Gy,照射后的人外周血于37℃培养箱中静置2h后提取RNA,利用实时荧光定量PCR技术对外周血GADIM5A基因进行检测。结果实时荧光定量PCR检测结果表明各剂量组与对照组相比,其基因表达均有显著变化。0．05～0．6Gy剂量组与对照组相比基因表达下调,其中0．05～0．2Gy之间,随着照射剂量的增加,基因表达量逐渐降低;0．2～0．6Gy之间,随着照射剂量的增加基因表达量又逐渐增加。0．8Gy时,基因表达量增幅较大,高于对照组和1Gy剂量组。1～3Gy剂量组基因表达量均高于对照组,且随着剂量增大,表达量增加,具有明显剂量相关性。结论电离辐射可以诱导人外周血GADD45A基因的差异表达,1～3Gy之间具有明显剂量相关性。0．05～0．2Gy之间外周血淋巴细胞表现出辐射刺激效应。     

中子的相对生物学效应及复合效应研究现状

随着科学技术的发展,核与辐射广泛应用于工业、军事、医学等领域,随之而来的辐射暴露也越来越多。当前核反应堆和核潜艇的运行、肿瘤放射治疗、太空飞行、核装置爆炸以及核泄漏等均涉及到中子辐射的暴露。中子是一种高传能线密度（Linear Energy Transfer,LET）射线,电离密度大,能量沉积严重,会对生物体造成严重的损伤效应。因此在辐射暴露事件中,进行中子辐射损伤效应的评估至关重要。相对生物学效应（Relative Biological Effectiveness,RBE）就是常用的估算中子暴露风险的一种手段。特定辐射条件下的RBE值取决于自身暴露条件,如中子本身的能量、剂量和剂量率以及所涉及的组织或细胞类型等,本文将从这几方面展开对中子RBE值的讨论。此外,当前绝大部分辐射暴露场均为混合场,因此充分考虑混合场中的其他成分所产生的影响同样重要。