转位分子蛋白对人脑胶质瘤U251细胞增殖的影响

目的 利用相对分子质量为18000的转位分子蛋白(TSPO)的特异性配体1-(2-氯苯基)-N-(1-甲基丙基)-异喹啉-3-氨甲酰(pk11195)研究TSPO对人脑胶质瘤U251增殖的影响及机制,为人脑胶质瘤的治疗寻找新的靶点. 方法 体外常规培养U251细胞,应用100、50、25、12.5、6.25 μmol/L pk11195作用2h后MTT比色法检测细胞的增殖活性,同时设对照组(加入等量溶剂);台盼蓝染色法检测对照组和50、6.25 μmol/L pk11195组细胞死亡率的变化;Hoechst33342染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blotting和免疫荧光法检测细胞TSPO的表达;2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)探针法和GSH试剂盒分别检测细胞内活性氧(ROS)和GSH的水平;曲氟胸苷(JC-1)染色法检测线粒体膜电位;荧光素酶法检测细胞内ATP含量. 结果 MTT检测显示50、25μmol/L pk11195组细胞存活率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);台盼蓝染色显示50 μmol/L pk11195组细胞死亡率、GSH水平低于对照组和6.25 μmol/L pk11195组,差异有统计学意义(P＜0.05);6.25、50 μmol/L pk11195组细胞凋亡率、TSPO的表达量较对照组降低,且50μmol/L pk11195组低于6.25 μmol/Lpk11195组,差异有统计学意义(P＜0.05);6.25、50 μmol/Lpk11195组ATP的含量高于对照组,且50 μmol/Lpk11195组高于6.25 μmol/L pk11195组,差异有统计学意义(P＜0.05).pk11195组ROS水平较对照组降低,而细胞膜电位增高. 结论 TSPO具有促进U251细胞凋亡、抑制其增殖、类似于抑癌基因的作用.     

维拉帕米对裸鼠胶质瘤U251模型卡氮芥疗效的影响

目的探讨维拉帕米对裸鼠胶质瘤U251模型卡氮芥（BCNU）疗效的影响。方法制作裸鼠胶质瘤U251模型,分别给予BCNU和BCNU＋维拉帕米进行治疗,测量肿瘤大小,用免疫荧光染色检测肿瘤中P-糖蛋白（P-gp）,多药耐受蛋白1（MRP1）和肺耐药相关蛋白（LRP）的表达。结果 BCNU＋维拉帕米组中,肿瘤大小明显比BCNU组减小,尤其是第一至四周更加明显（P〈0.05）。肿瘤细胞中LRP,P-gp和MRP1均为阳性,主要在细胞膜表达,从形态学上两组差别并不明显。结论维拉帕米在体内有明显增加胶质瘤U251对BCNU的敏感性,逆转耐药的作用。     

自制新型便器在自发性蛛网膜下隙出血患者排尿中的应用

目的 探讨自制便器在自发性蛛网膜下隙出血(SAH)患者中应用时对促进床上排尿的临床效果.方法 将新入院符合条件的80例Hunt-Hess分级0～2级的自发性SAH患者随机分为观察组和对照组各40例.对照组采取普通便器和常规督导排尿方法,观察组采取自制便器和常规督导排尿方法,比较2组患者自行排尿成功率、诱导排尿时间、诱导排尿过程中患者血压的变化、膀胱残余尿量.结果 观察组患者自行排尿成功率显著高于对照组,诱导排尿时间和膀胱残余尿量及诱导排尿过程中患者血压的变化均显著小于对照组.结论 自制便器可有效促进自发性SAH患者床上排尿,缩短诱导排尿时间,减少因排尿困难引起的血压波动和膀胱残余尿量.     

维拉帕米对胶质瘤细胞卡氮芥化疗敏感性的作用

目的探讨维拉帕米对不同胶质瘤细胞（U251、SHG-44）卡氮芥（BCNU）化疗敏感性的作用及其机制。方法通过免疫组化测定BCNU化疗前后肿瘤细胞中的耐药基因的表达;用MTT实验评估BCNU及维拉帕米作用前后化疗的细胞生长情况。结果 U251细胞中BCNU化疗前耐药基因LRP表达阳性,MRP阴性,P-gp阴性;化疗后LRP仍为阳性,MRP转变为阳性,P-gp为弱阳性,加入维拉帕米后细胞生长情况无明显差异（P〉0.05）;SHG-44细胞中,BCNU化疗前,LRP为阳性,P-gp和MRP1为阴性,化疗后上述基因表达无差异,加入维拉帕米后细胞生长受到明显抑制（P〈0.05）。结论维拉帕米对细胞化疗前后表达不同耐药基因的化疗敏感性具有不同的作用。     

经外侧裂-岛叶与经皮质入路血肿清除术治疗高血压性基底节出血的比较

目的 比较经外侧裂-岛叶入路与经皮质入路行血肿清除术治疗高血压性基底节区脑出血的疗效.方法 回顾性纳入经外侧裂-岛叶入路与经皮质入路行血肿清除术治疗高血压性基底节区脑出血患者.比较2组人口统计学和基线资料以及术后3个月时的转归情况(改良Rankin量表评分0～3分为转归良好,≥4分为转归不良)和病死率.结果 共纳入68例(经外侧裂-岛叶入路40例,经皮质入路28例)高血压脑出血患者.2组人口统计学和基线资料均无显著性差异(P均＞0.05).术后3个月时,经外侧裂-岛叶和经皮质入路组转归良好率分别为52.50％(21/40)和21.43％(6/28),前组显著性高于后组(x2=6.642,P=0.010);经外侧裂-岛叶入路组和经皮质入路组病死率分别为2.50％ (1/40)和21.43％(6/28),前组显著性低于后组(Fisher精确检验,P=0.017).结论 高血压性基底节区出血采用经外侧裂-岛叶入路进行血肿清除的临床疗效优于经皮质入路.     

反义hTERT抑制恶性胶质瘤生长的体内外研究

目的 探讨腺病毒介导的反义hTERT在体内外对恶性胶质瘤细胞生长的影响.方法 构建含有hTERT反义序列的腺病毒载体在体内外转染恶性胶质瘤细胞系U251,检测肿瘤细胞生长情况、细胞周期变化、端粒酶活性、hTERT蛋白表达等.结果 腺病毒介导的hTERT反义治疗在体外明显抑制肫瘤细胞生长,增殖减慢,凋亡增多,细胞较多聚集在G1/G0期,转染后第6天细胞生存率为46.9%,端粒酶活性和hTERT蛋白表达都明显下降,在体内实验中肿瘤生长明显减慢.结论 腺病毒介导的反义hTERT在体内外能明显抑制恶性胶质瘤细胞的生长.     

人脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的分子免疫病理分析

目的：探讨不同类型人脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的变化。方法：细胞增殖用免疫组化检测增殖细胞标记Ki-67,增殖程度用增殖指数（Ki-67LI)来评估;细胞凋亡用原位末端标记法（TUNEL）检测,凋亡程度通过凋亡指数（AI）来评估;通过Ki-67LI和AI计算总体日常生长情况（KP）。结果：Ki-67作为细胞增殖的标志,与人脑胶质瘤的分型有很好的一致性,是病理诊断中可以参考的指标;在星形细胞的肿瘤中凋亡为少见现象,在恶性程度较高的肿瘤中凋亡细胞增多,提示与肿瘤分型有关。结论：增殖和凋亡的失衡是人脑胶质瘤恶性进展的重要原因。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导向神经细胞样细胞分化

目的：研究大鼠骨髓问充质干细胞(MSCs)离体分离和培养方法,诱导MSCs向神经细胞样细胞分化。方法：通过梯度离心从大鼠骨髓中分离有核细胞,进行培养,去除不贴壁的细胞,分离纯化MSCs,对其生长特性进行分析。分别用硫代甘油和β-巯基乙醇对MSCs诱导分化,观察细胞形态变化,免疫组化检测分化细胞中nestin,神经元特异性烯醇化酶(NSE),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,进行鉴定。结果：用含15％胎牛血清(FCS)的L—DMEM培养MSCs,原代细胞贴壁生长,细胞形态均一,为纺锤形,有克隆形成。传代培养时,形态变为成纤维细胞样,生长特征呈“S”形,有较强的增殖能力,于第10代以后开始出现衰老征象。MSCs经硫代甘油和巯基乙醇诱导分化后,细胞形态发生改变,nsetin,NSE和GFAP阳性,分化为神经元或胶质细胞样细胞。结论：大鼠MSCs可以离体分离,培养,并能诱导向神经细胞样细胞分化。     

cyclin D1/p16-pRB调控路径与脑胶质瘤

目前对细胞周期的研究表明 ,人的细胞周期中不同时相间存在关键的调控点 ,其中以Ｇ1→Ｓ调控点最为重要。在这些调控点中各调控因子的变化将会影响细胞周期的循环 ,若为超常加速运行 ,将导致癌瘤。一、ｃｙｃｌｉｎＤ1/ ｐ16 ｐＲＢ路径的结构及作用机制ｃｙｃｌｉｎ(细胞周期素 )Ｄ1,ｐ16 ,ｐＲＢ(视网膜母细胞瘤蛋白 )都是Ｇ1→Ｓ调控点中重要的调控因子。ｃｙｃｌｉｎＤ1为细胞周期素Ｄ家族中的重要成员 ,其基因定位于染色体 11ｑ13,ｃＤＮＡ长约 4 2ｋｂ ,编码蛋白分子量为 36ＫＤ。ｐ16为细胞周期素依赖激酶(ＣＤＫ)抑制物 (ＣＤＫｉ…     

氯丙咪嗪对人脑胶质瘤U251细胞增殖的影响

目的探讨氯丙咪嗪对人脑胶质瘤U251细胞体外增殖的影响。方法用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测不同浓度的氯丙咪嗪对U251细胞增殖活性的影响。根据结果,选取二个不同浓度组检测细胞形态学的变化、台盼兰染色细胞死亡计数、细胞凋亡染色、流式细胞术检测等。结果依据MTT实验结果,选取氯丙咪嗪57μmol/L和28.5μmol/L两个浓度进行台盼兰染色、细胞形态学、细胞凋亡染色和流式细胞术检验。结果证实,氯丙咪嗪对U251细胞有明显的抑制作用。结论氯丙咪嗪具有明显的抑制胶质瘤U251细胞增殖的功能,促进其凋亡,可作为胶质瘤化疗的备选药物。