近缘新对虾PCNA基因的克隆及表达分析

增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)作为DNA聚合酶δ的辅助蛋白,在DNA复制过程中发挥重要作用。近缘新对虾(Metapenaeus affinis)卵巢发育过程中存在细胞增殖活动旺盛的阶段,但目前关于其卵巢发育的分子机制研究较少。利用RACE (Rapid amplification of cDNA ends)技术获得近缘新对虾PCNA (MaPCNA)基因的cDNA序列全长,并通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)对其进行卵巢发育相关的表达分析。MaPCNA全长为1 144 bp,包含140 bp的5’非编码区,221 bp的3’非编码区,开放阅读框(ORF)为783 bp,编码260个氨基酸。MaPCNA蛋白的相对分子质量为28.82 kD,理论等电点为4.5。多重比对分析表明,PCNA氨基酸序列在甲壳动物中较为保守。组织表达结果显示,MaPCNA基因在检测的组织中均有表达,其中在卵巢中的表达量最为显著(P<0.05)。在不同发育阶段的卵巢中,MaPCNA基因的表达出现变化(P<0.05),从Ⅰ期开始逐...     

斑节对虾7个全同胞家系间亲缘关系的微卫星分析

为了斑节对虾（Penaeus monodon）后续育种工作的需要,研究了斑节对虾7个全同胞家系的亲缘关系。从95对微卫星引物中筛选出16对,16个微卫星位点共发现79个等位基因（A）。每个位点的A为2～10个,平均4.9375,有效等位基因（Ne）1.7575～5.3980,平均3.3878,平均杂合度观测值（Ho）0.6679,平均杂合度期望值（He）0.6698。平均多态信息含量（PIC）0.6110。7个家系总近交系数（FIT）0.0099,家系内近交系数（FIS）-0.3725,家系间基因分化系数（FST）0.2709。根据遗传距离采用UPGMA法对7个家系进行聚类,F2和F6家系之间的遗传距离最小聚为一类,与F7家系遗传距离最远。结果表明,家系间基因交流较低,遗传分化程度较高,且很少发生近交,F7家系可以优先考虑与其他家系进行杂交选育。     

斑节对虾2个地理种群自交与杂交F1的生长性能

以三亚(S)、泰国(T)两个地理群体的野生斑节对虾(Penaeus monodon)为亲本,建立自交组合SS(S♀×S♂)、TT(T♀×T♂)和杂交组合ST(S♀×T♂)、TS(T♀×S♂)。对各组合F1的5个生长性状(体长、体质量、头胸甲长、头胸甲高、头胸甲宽)进行测量,对杂交组合进行杂种优势分析。结果表明,杂交组合在各个性状上均表现出一定的杂种优势(2.13%～19.70%),其中正交组合(ST)的杂种优势均高于反交组合(TS)(P<0.05)。对各性状进行单因素方差分析表明,4个组合的子代在体长、体质量、头胸甲长、头胸甲高性状上存在显著差异(P<0.05),但在头胸甲宽这一性状上无显著差异(P>0.05)。多重方差分析结果显示,正交组合(ST)的体长、体质量、头胸甲长性状显著高于自交组合(SS、TT)(P<0.05)。研究结果为斑节对虾杂交育种的具体应用提供了重要参考依据。     

不同饲料蛋白水平下斑节对虾家系生长和存活的比较研究

研究了蛋白含量为34%、38%、42%的3种饲料对16个斑节对虾家系生长的影响。试验结果表明,饲料中的蛋白水平影响家系的生长和成活率,除14号和15号家系的特定生长率在38%组和42%组近似外,其它家系的特定生长率均为34%组＜38%组＜42%组。11个家系在38%蛋白饲料组的成活率最高,5个家系在34%蛋白饲料组的成活率最高,4个家系在42%蛋白饲料组的成活率最高。16个家系间的生长差异随着饲料蛋白水平提高而缩小,表明斑节对虾在低蛋白水平饲料下显现出生长遗传效应的显著差异。研究发现父母本均来源于非洲的10号家系特定生长率最高,父母本来自同一地区的部分家系在不同蛋白饲料组内和组间生长存在显著差异。实验结果为通过家系选育筛选适应低蛋白水平饲料的快速品系提供了依据。     

斑节对虾泛素融合蛋白UbS27基因克隆与表达分析

从构建的斑节对虾（Penaeus monodon）肝胰腺转录组数据中筛选出泛素核糖体融合蛋白UbS27基因（ubiquitin/ribosomal S27 fusion protein,PmUbS27）片段,利用SMART-RACE技术克隆出PmUbS27基因cDNA全长,并利用软件对其结构进行分析;利用实时荧光定量技术检测PmUbS27基因在斑节对虾不同组织及卵巢不同发育期的表达情况。结果显示,PmUbS27基因cDNA全长为514 bp,开放阅读框465 bp,编码154个氨基酸,含有泛素（1~72 aa）和核糖体蛋白（101~147 aa）2个结构域。以DNA为模板克隆得到的基因序列由3个内含子和4个外显子组成。实时荧光定量结果显示,PmUbS27基因在斑节对虾各组织中均有表达,但是在卵巢中表达量最高,其次为肝胰腺、血淋巴和精巢。PmUbS27在卵巢发育前期（Ⅱ期）和成熟期（Ⅴ期）的表达量显著高于其他各期（P0.05）。结果表明,PmUbS27参与斑节对虾卵巢发育的过程并可能在卵巢发育进程中起到重要的调控作用。     

稻田垄沟式黄鳝养殖试验

黄鳝Ｍｏｎｏｐｔｅｒｕｓａｌｂｕｓ (Ｚｕｉｅｗ)属亚热带淡水鱼类 ,是名优水产品中的主要种类 ;其营养丰富 ,肉质鲜美 ,可食部分达 6 5 %以上 ,深受人们的欢迎。目前 ,黄鳝价格居高不下 ,特别是在节假日期间 ,价钱更高。江西省南昌市从1996年开始利用稻田进行垄沟式养殖黄鳝 ,经过 5年的试验 ,获得成功 ,取得了显著的经济效益。1　鳝池建造稻田垄沟式黄鳝养殖试验就是将稻田进行合理改造 ,让黄鳝白天在垄形土堆里栖息 ,晚上到垄沟中觅食。稻田是黄鳝的栖息环境 ,条件的好坏 ,会直接影响黄鳝的生长。因此 ,稻田垄沟式黄鳝养殖的鳝池应符合…     

斑节对虾cdc25基因的表达分析

在已构建的斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢组cDNA文库中筛选了cdc25基因的EST序列,使用实时荧光定量PCR获得了cdc25基因在雌性个体不同组织及卵巢不同发育阶段的表达情况。结果表明:cdc25基因在雌性个体的卵巢、淋巴、脑神经、血、肌肉、心脏、鳃、肝胰腺和肠9种组织中均有表达,并存在显著性差异,其中心脏的相对表达量最高。同时,cdc25基因在卵巢发育6个时期的时序表达结果显示,cdc25基因在卵巢中的相对表达量在Ⅰ期最大,与其他5期存在显著差异,而后骤降,直到Ⅴ期才稍微升高,随后又逐渐降低。     

斑节对虾谷氨酸脱氢酶基因的克隆及氨氮胁迫对其时空表达的影响

采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE)获得了斑节对虾(Penaeus monodon)谷氨酸脱氢酶基因(PmGDH)的cDNA序列。该序列全长2386 bp,开放阅读框(ORF)为1677 bp,3?非编码区(UTR)为688 bp,包括含有27个碱基的poly(A)尾,5?非编码区(UTR)为21 bp。ORF可编码558个氨基酸,预测分子量为61.837 kD,理论等电点为6.57。序列含有ELFV dehydrog N与NAD bind 1 Glu DH两个保守结构域,37个磷酸化位点,3个糖基化位点。通过同源性、相似性以及系统进化树分析,斑节对虾的GDH基因与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)GDH基因的同源性和相似性最高,并与其聚为一支。采用荧光定量的方法研究了PmGDH基因在斑节对虾不同组织、氨氮胁迫过程中差异表达情况。结果表明, PmGDH的mRNA在各组织中都有表达,其中,在肌肉组织中表达量最高,其次为眼柄神经,在血淋巴与肠组织中表达量最低。96 h氨氮胁迫后,荧光定量PCR分析结果表明PmGDH在肝胰腺和鳃组织中的表达与对照组相比都具有显著差异(P<0.05),都具有不同程度的表达上调。表明PmGDH在氨氮代谢方面具有重要的作用,参与了斑节对虾机体的急性氨氮胁迫应答反应。     

斑节对虾2种高血糖激素家族基因的基因组序列分析和表达研究

在斑节对虾(Penaeus monodon)体内新发现了2种高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone,CHH)家族基因Pm CHH和Pm HHLPP。基因组分析结果显示,其均具有CHH-Ⅰ型基因基本的"信号肽-CPRPKR/ER/RR-成熟肽"结构,且与已报道的CHHs基因的基因组结构相似;聚类分析结果显示,尽管Pm CHH和Pm HHLPP与多个CHHs基因序列相似性超过50%(最高达99%),但与其聚为一支的基因均不是CHH-Ⅰ型基因;生物信息学分析结果显示,Pm CHH和Pm HHLPP的转录起始位点"A"及其核心启动子区域分别位于开放阅读框(ORF)上游的99 bp和190 bp,同时在预测其空间结构后发现,两者的三维结构中均含有4个α螺旋构型;组织表达结果显示,2个基因均在肠中有较高的表达量,而Pm CHH在鳃、Pm HHLPP在眼柄中表达量也较高,但在肝胰腺和肌肉中表达量较低;幼体发育阶段表达结果显示,2个基因在无节幼体Ⅲ~Ⅳ期、溞状幼体Ⅰ期和糠虾幼体期表达量均有较大波动,与代谢强度呈弱相关关系。根据其一级结构的特征和相关表达情况,可推测Pm CHH和Pm HHLPP均为CHHs家族基因。     

大瓶螺的生物学特征及人工繁殖研究

阐述了大瓶螺人工繁殖和养殖方法以及大瓶螺喜食的水生维管束植物和蔬菜种类，为大瓶螺的养殖提供了可靠的技术依据。