基于RAD-seq数据开发烟草多态性SSR标记

采用RAD-seq技术对两份烟草材料"118-3"和"粤烟98"进行简化基因组测序,分别获得45 119 346和50 360 738个高质量干净读长（HQ clean reads）。通过序列分析,在22 145个reads覆盖的参考基因组序列中共检测到25 343个SSR位点,其中以二和三核苷酸重复基序最为丰富,占总SSR位点的71.59%;除单核苷酸类型外,SSR基序的重复次数主要集中在4~9之间。根据SSR位点两翼的序列,利用Primer 3.0成功设计出23 346对SSR引物,引物设计的成功率为92.12%。依据测序数据初步发现这些SSR中有323个（1.38%）SSR在两份测序材料间具有多态性,随机选择其中50个SSR在4份烟草材料中进行验证,结果发现在两份测序材料间的多态率为76%,存在24%的假阳性;在另两份烟草材料中多态率为20%。研究结果表明,利用简化基因组测序技术能够开发大量SSR标记和发现样品间具有多态性的SSR标记,可为SSR标记的开发和应用提供基础。     

烤烟品种K326及其耐低温抗早花变异系基因表达谱分析

为了解烤烟早花与抗早花的形成及调控机制,本研究利用安捷伦烟草全基因组芯片分析了烤烟品种K326及其抗早花品系华烟06茎尖端花芽分化过程中基因的表达。结果表明,K326与华烟06距离各自花芽分化相同时间的茎尖端未花芽分化时的差异探针数最多,有5295个;K326分化当天各品种(品系)之间相比较差异探针数量最少,有2116个。与分子功能相关的差异基因主要与催化性能、转运性能、结合性能和转录调节性能有关;与细胞组成相关的差异基因主要是与细胞、细胞组分、细胞器相关的基因;与生物学过程相关的差异基因种类最多最复杂,涉及到植株抗逆性、生长、发育等方面,这对进一步研究与从中搜寻与烟草开花相关的基因奠定了基础。     

烟叶中淀粉含量测定方法的比较

分别研究了烟叶中检测淀粉含量的三种方法,通过相对标准偏差和回收率的对比对三种检测方法进行了分析。结果显示：酸解法的相对标准偏差为2.26%,回收率为107.86%;碘显色法的相对标准偏差为1.0397%,回收率为98.45%;高氯酸萃取-连续流动法的相对标准偏差为1.33%,回收率为98.63%。酸解法的检测结果的精密度准确度明显不如其它两种,碘显色和连续流动法的精密度准确度则比较接近,且都较适合烟叶中淀粉含量的检测,适合广泛应用。     

利用基因芯片筛选烤烟早花基因初探

为研究与烟草早花有关的基因,本试验利用安捷伦烟草全基因组基因芯片对烤烟品种K326 及其抗早花变异系华烟06、K326LF 花芽分化过程茎尖端基因表达谱进行分析,筛选出其中与花芽分化可能有主要关系的基因:AGL20、CCR2、ELF4、ERD7、CBF1、COR413-PM1、EMF2、VIP4、COL1、AGL17、COL9、FPA、SWN 等,其中COL2、ELF4 的表达差异达到了5倍;AGL62、CBF1、SWN、NAP 与FPA 的差异大于或等于10 倍。该试验可为进一步研究烟草抗早花机理及培育抗早花新品种提供参考。      

烟草种质的SSR标记遗传多样性及青枯病抗性的关联分析

烟草青枯病是影响烟草产质量的主要病害之一,开发出与烟草青枯病抗病性密切相关的优异等位基因,可加速抗病品种的选育进程。据此,本研究选用94份烟草种质材料作为研究对象,运用236个SSR标记对这些材料进行基因分型和群体结构分析,开展基于连锁不平衡的关联分析探测与青枯病抗性相关的分子标记。结果表明,236个SSR标记在94份烟草种质中检测到904个等位变异位点,平均每个SSR标记为3.83个位点;这些SSR标记的多态性信息量（PIC）值在0.1361~0.8760之间,平均为0.5136。基于SSR基因分型数据,构建了126个标记单倍型;在此基础上进行群体结构分析,将94份种质划分为2个类群,表明本研究烟草种质的群体结构简单,有利于减少伪关联。二年田间抗病性数据与单倍型的关联分析发现7个单倍型与青枯病抗病性密切相关,其中有3个单倍型在二年的田间试验中均表现出与青枯病抗性密切相关,平均解释率超过10%。研究结果可为烟草青枯病抗病材料的分子标记辅助筛选提供参考。