农杆菌介导的反义LeERF2基因转化番茄

利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的叶盘法将LeERF2反义基因导入中蔬四号番茄(Lycopersicon esculentumcv.No.4 Zhongshu)进行遗传转化研究。在卡那霉素选择压力下获得的再生植株,经过PCR、点杂交和Southern杂交鉴定,证实了该反义基因已导入番茄基因组中,共获得了25棵转基因植株,并建立了一个高效的番茄转化体系。Northern杂交结果表明,转反义LeERF2基因番茄果实外果皮LeERF2基因表达水平比野生型番茄低。     

VIGS诱导番茄果实LeETR4沉默及其对乙烯生成的影响

与传统的转基因功能分析方法相比,病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)具有构建简易、周期性短、成本较低的优点.本研究利用VIGS方法成功抑制了绿熟期离体番茄果实成熟过程中LeETR4基因的表达,并进一步确定了乙烯受体LeETR4基因沉默对绿熟期离体番茄果实成熟过程中系统Ⅱ乙烯生成的影响.研究发现,绿熟期离体番茄果实乙烯受体基因LeETR4基因被沉默后,系统Ⅱ乙烯合成加速,果实提早成熟.     

不同发酵条件对重组猕猴桃果胶甲酯酶抑制剂表达量的影响

将已在毕赤酵母中成功表达的重组猕猴桃果胶甲酯酶抑制剂为研究对象,通过改变发酵培养时间、培养基装填量及培养基配方,对该重组蛋白的表达量进行研究。最终确定使用BMMY培养基、表达时间为96h、培养基装填量为10%时为最佳表达条件,在最佳表达条件下,该重组蛋白的表达量最高可达0.2g/L。     

酸奶后酸化中保加利亚乳杆菌关键基因表达分析

酸奶中的乳酸菌能将大分子蛋白质分解成人体易吸收的小分子营养物质,这对人体具有很重要的保健功能,然而酸奶的后酸化问题不仅严重影响风味,还大大缩短了酸奶的货架期,阻碍了我国酸奶行业的发展。研究证明,控制保加利亚乳杆菌在酸奶发酵后期的生长代谢,是解决酸奶后酸化的关键。本文在研究模式菌株保加利亚乳杆菌ATCC 11842在复原脱脂乳培养基中生长和产酸特性的基础上,利用半定量RT-PCR技术,分析酸奶后酸化中保加利亚乳杆菌不同时期关键基因表达的差异,选取后酸化过程中表达变化明显的丙糖异构酶基因,通过对该基因的过量表达,探究该基因在酸奶后酸化过程中的功能。结果表明,大多数关键基因受到后酸化的影响而上调或下调,其中丙糖异构酶基因过量表达后影响菌株产酸和生长。     

果汁DNA提取方法比较及柑橘属植物分子生物学检测技术的研究

以橙汁为研究对象,选取市售100%橙汁及橙汁饮料各3种,采用CTAB法、SDS-CTAB法以及改良CTAB法提取其DNA,对所提取的DNA的浓度、纯度及扩增效率进行比较;同时选取橙UDP-葡糖基转移酶蛋白基因设计柑橘属植物特异性扩增引物,通过定性PCR检测其特异性和灵敏度,并应用于果汁中柑橘属植物的检测。实验结果证明,由改良CTAB法获得的DNA模板质量较高,适用于果汁中DNA的提取。UGT基因引物可对柑橘属植物产生特异性扩增,最低检测限为10pg/μL。将该引用物用于市售橙汁的检测,其检测结果为阳性,从而证明UGT基因特异性引物可用于果汁中的柑橘属植物成分的检测及鉴伪研究。     

转基因棉籽的食用安全性及对大鼠抗氧化系统影响的研究

本文研究了转基因棉籽的食用安全性以及对动物肌体抗氧化系统的影响。实验中无动物死亡,并且所有动物都表现正常。结果表明,食用转基因棉籽的处理组与食用非转基因棉籽的对照组相比,动物体重增长率及食物利用率、血液生化指标、脏器重等均无显著差异。受试大鼠的大体解剖及脏器的组织切片镜检结果,均未发现异常病理性改变。大鼠在食用转基因棉籽和非转基因棉籽后,肌体的抗氧化酶活性无明显差异。通过对大量结果的统计分析,显示转基因棉花棉籽与非转基因棉籽在营养学方面具有实质等同性。     

ELISA方法定量检测转基因大豆及其产品的研究

以美国、阿根廷、巴西转基因大豆等为材料,建立了ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4 EP- SPS蛋白的方法,成功检测出美国转基因大豆含量为3.768%、阿根廷转基因大豆含量为2.820%、巴西转基因大含量为1.920%,转基因豆粉、转基因豆粕和中国大豆未检测到CP4 EPSPS蛋白。此方法具有简便、快速、稳定等优点,其检测灵敏度可达到0.0075%,并且稳定性良好,为抗草甘膦转基因大豆中CP4 EPSPS蛋白的定量检测提供了有效的手段。     

枳Ju子影响乙醇代谢机理研究

为了研究枳Ju子解酒保肝机理，实验建立了低剂量乙醇模型组（自由饮用2.5%乙醇、3.9g/kg体重／d）和高剂量乙醇模型组（自由饮用8％乙醇、12.6g／kg体重／d），枳Ju子浸提液＋低醇组 枳Ju子浸提液＋高醇组＋枳Ju子浸提液组（小鼠自由饮用3mg/ml枳Ju子浸提液），实验持续30d，测定小鼠肝脏乙醇脱氢酶（ADH）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽硫转移酶（GST)知性及丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量。结果表明，长期摄入乙醇引起肝脏ADH、SOD、GST酶活性降低，导致MDA含量升高和GSH含量下降，枳Ju子提取液可拮抗乙醇引起的上述变化，具有解酒保肝作用。     

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳快速染脱色方法的比较研究

本文对几种SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)快速染脱色方法进行了比较研究,从蛋白质回收,染色时间及其灵敏度的角度对它们的优缺点进行了比较,并且阐述了它们各自的染色机理。与常规考马斯亮蓝染色法相比,这几种方法染脱色的清晰度稍差,但是灵敏度相当,在实践上均是可行的。尤其是CaCl2、KCl法的灵敏度更高,染色时间短,     

微生物菌群多样性分析方法的研究进展

随着现代科学技术的进步,对微生物多样性的研究已经提升到了一个新的高度,特别是由于分子生物学在该分支学科中的应用,使得在微生物菌群多样性的研究中克服了传统培养的缺点,使分析方法取得了长足的进步。本文主要介绍了微生物多样性研究的多种方法,将其简要划分为三大部分：(1)传统纯培养技术;(2)现代分子生物学技术;(3)上述两种方法的联合使用,并重点阐述了这些方法的优缺点,展望了微生物多样性研究方法的发展前景。