罗伊氏乳杆菌原生质体的制备与再生条件的研究

研究细胞培养和溶菌酶酶解条件对罗伊氏乳杆菌原生质体形成率的影响以及罗伊氏乳杆菌原生质体在多种再生培养基中的再生条件,结果表明罗伊氏乳杆菌05-1和05-2原生质体形成的最适条件:在MRS培养基中接种量5%(两菌株活菌数分别为4.96×108 cfu/mL和8.04×107 cfu/mL),37℃静置培养至OD600值1.0(两菌株活菌数分别为2.36×1012 cfu/mL和6.56×109 cfu/mL)左右,酶解pH8.0、酶质量浓度20 mg/mL、酶解时间45min。在此最适条件下,两菌株原生质体形成率分别为90.2%和92.8%;在最适再生培养基RM1中,罗伊氏乳杆菌05-1和05-2原生质体的再生率分别为30.6%和23.2%;RM1中,胎牛血清(BSA)是罗伊氏乳杆菌原生质体再生不可获缺的物质。本研究为构建益生乳杆菌食品级基因克隆和表达系统,实现原生质体的转化及细胞融合育种与基因组洗牌分子育种,提供理论依据。     

湖北某高镁质磷矿反浮选试验研究

湖北某高镁质磷矿为硅钙质沉积型磷矿石,MgO含量较高,选别难度较大。本文主要研究浮选矿浆pH值,捕收剂种类和混合酸比例对胶磷矿、白云石分离效果的影响。结果表明,在pH=4.8时,采用选择性更好的GYP捕收剂,混合酸(硫酸∶磷酸=1∶2)作为抑制剂,闭路试验可以获得P_2O_5品位为33.26%,P_2O_5回收率为96.79%,MgO含量为0.74%的优质磷精矿,抑制剂成本降低约30%。     

基于活性蛋白的分离纯化及其功能结构整体研究方法的建立

本文对天然产物活性蛋白进行结构和功能整体研究方法的建立。首先,通过蛋白层析技术对其进行分离纯化,利用功能活性跟踪监测目标成分。其次,利用生物质谱技术进行肽指纹图谱的测定,找出同源蛋白进行序列比对;同时利用生物信息学从基因水平进行序列分析,最终得到活性蛋白一级结构。最后,利用同源模建进行高级结构和功能区域的分析,从而最终建立起蛋白质结构和功能的研究方法。     

玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测

建立了玉米转基因成分中35S启动子非同源模板的竞争定量PCR检测系统.竞争定量PCR的关键问题是内标物的制备.实验中非同源模板的构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严紧型扩增,回收预期DNA片段并将其构建到T-easy载体上.通过调整非同源模板浓度使竞争物PCR产物亮度与1%GMO玉米的亮度相同,从而确定转基因玉米的检出限为1%.然后以确定的内标物浓度与不同含量的GMO玉米样品进行竞争定量PCR反应,以此进一步确定样品中GMO的含量范围.     

番茄乙烯信号转录因子LeERF2在大肠杆菌中的表达和纯化

从破色期番茄果实中提取了总RNA,用RT-PCR方法从中克隆到了627bp全长LeERF2基因.测序结果分析表明,该LeERF2基因序列与已发表序列的同源性为100%.将LeERF2基因亚克隆至载体pET-30a上,构建了原核表达载体pE-LeERF2,将其转化到大肠杆菌BL21中.蛋白质诱导表达的温度为37℃,诱导剂IPTG浓度为1mmol/L,诱导时间为3 h,LeERF2表达蛋白在细菌沉淀中约占菌体总蛋白的58%.应用Ni-NTA亲和层纯化回收的LeERF2表达蛋白的纯度为99%.银染凝胶阻滞实验表明,LeERF2蛋白能与含有GCC盒的逆境相关的几丁质酶启动子基因TLBP1结合.     

多聚半乳糖醛酸酶(PG)反义基因转化加工番茄

通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404介导将多聚半乳糖醛酸酶(PG)反义基因导入新疆加工番茄(代号:99-162混)。卡那霉素抗性筛选,获得移栽成活的10株再生植株,PCR和Southern blot检测表明,其中4株再生植株的染色体中有外源基因的插入。所得4株转基因加工番茄在基因转化处理当代表现不同;果实饱满有光泽;Northern杂交结果表明,转反义PG基因加工番茄果实外果皮PG基因表达水平比对照低。转基因植株的表型观察和分子检测结果相吻合。     

低温消解-石墨炉原子吸收法高通量测定小麦中镉含量

通过对氧化剂的选择、硝酸浓度影响实验和基体改进剂的选择等方面的研究优化了实验条件,最终确定使用硝酸双氧水体系作为氧化剂,选择合适的固液比为:样品/硝酸/过氧化氢=0.25 g/6 m L/2 m L,选择背景较低结果准确可靠的200μg/m L Pd(NO3)2作为基体改进剂,同时选择合适的灰化温度500℃和原子化温度1200℃。对国家标准物质小麦粉进行测定,标准曲线相关系数大于0.999,检出限为0.0003 mg/kg,定量限为0.001 mg/kg,测定结果均在标准值范围内,低含量水平结果RSD为9.1%,高含量水平结果RSD为5.3%。该方法准确可靠、简便安全、总体成本低,尤其适合高通量谷物样品处理。     

1株产乳酸菌素植物乳杆菌的鉴定及功能研究

乳酸菌素是一种天然生物防腐剂。本试验鉴定了1株产乳酸菌素的植物乳杆菌并研究其所产乳酸菌素的理化性质。采用16S r RNA序列分析法鉴定菌株LD-1为植物乳杆菌,其发酵上清液具有抑菌活性。采用吸附法粗提所产乳酸菌素,经Tricine-SDS-PAGE分析其分子质量在4.6~6.5 ku之间。由乳酸菌素产量与乳酸菌生长的关系试验得出乳酸菌素的最佳收获时间为发酵培养14 h。管碟法抑菌试验表明,该乳酸菌素抑菌活性的最适p H范围为2~8;100℃处理90 min后抑菌活性仍很明显;对胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K敏感,在人体内可被消化吸收;对单核增生李斯特细菌、粪肠球菌、大肠杆菌、都柏林沙门氏菌有较强的抑制作用。该乳酸菌素为开发抑菌谱广的天然生物防腐剂提供研究基础。     

基于原生质体法保加利亚乳杆菌电转化条件的研究

目的:研究不同因素对保加利亚乳杆菌原生质体法电转化效率的影响,通过研究电转化的最适条件,以提高电转化的效率。方法:以保加利亚乳杆菌为受体菌株,大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒pMG36e为载体,通过原生质体电转化的方法研究溶菌酶浓度、质粒浓度、电转化参数、复苏培养基组成对电转化效率的影响。结果:用SMM在37℃下制备溶菌酶(30 mg/mL)对细胞进行酶解,直至通过显微镜发现约60%的原生质体形成。用1μL质量浓度为1.2μg/μL的质粒pMG36e,在电场强度7.5 kV/cm,电阻200Ω,电容25μF的条件进行电击转化,以含有0.5 mol/L蔗糖和20 mmol/L的MgCl_2、CaCl_2且无吐温80的MRS再生培养基复苏培养2.5 h,并以含红霉素的MRS平板筛选,获得1.42×10~5CFU/μgDNA的电转化效率。结论:本研究实现了保加利亚乳杆菌的高效遗传转化,并为遗传育种提供了技术支持。     

关于加强我国食品安全研究和管理的对策

1 我国食品安全研究和管理的现状 1.1 我国食品安全问题 同国外出现的食品安全性问题相比,我国的食品安全性问题更让人忧心.在我国,由于法制不健全,管理滞后、缺乏有效的监督机制以及落后的卫生状况及国民素质等原因,出售掺杂掺假、过期变质、有毒有害食品坑害消费者的事例屡禁不止,已成公害.1999年卫生部共收到食物中毒报告97起,其中百人以上大型食物中毒和食源性疾病暴发流行事故报告10起.中毒4 999人,其中103人死亡.其中细菌性食物中毒1 851人,死亡7人;天然毒食物中毒905 人 ,死亡18人;化学性食物中毒1 442人,死亡77人;其中由于农药残留引起的食物中毒共有3 7 起,中毒1 166人,死亡69人,为全年总死亡人数的67.0%.今年(2000年)第一季度,卫生部共收到全国重大食物中毒事件报告15起,中毒407人,其中死亡10人.中毒人数最多的为化学性食物中毒,共计339人.我国发生的重大食品安全性事件和国外有所不同,有很大一部分食品安全性事件是由于造假造成的社会公害.其中最惊心触目的是近20年中屡禁不止的制售假酒致死人命事件.1980年代中期,西南几省和江苏屡次发生假酒中毒事件.致死致残人数超过100人.而进入1990年代,山西朔州毒酒案和云南会泽毒酒案成为我国最大的食物中毒事件.江西赣州毒猪油案、山东单县小学生服用碘钙片中毒案、河北"延庆鸡"掺入罂粟壳案、福建福尔马林保鲜海产品案等特大恶性事件,已不单单是一种简单的食物中毒事件,而是涉及行政执法部门缺乏监管、处罚不力的问题.