抗克伦特罗单链抗体基因工程菌株发醇条件的研究

重组大肠杆菌BL21携带抗克伦特罗单链抗体(seFv)基因,研究了不同培养基、诱导时期、诱导时间、初始pH以及装液量对重组抗体表达量的影响,并对重组质粒稳定性进行研究.结果表明,在初始pH为7.2、装液量为25mL/250mL的LB培养基中,30℃培养菌体生长至A60onm为0.8时,42℃诱导表达6h,scFv表达量可达33.7%.工程菌在无选择压力条件下连续传代120代,保持稳定,100%的菌株携带重组质粒且经诱导后均有重组抗体的表达.     

基于QuEChERS前处理技术的水产品中喹诺酮类药物多残留ELISA检测方法的建立

建立了水产品中3种喹诺酮类(恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星)兽药多残留的新型Qu ECh ERS前处理技术结合酶联免疫快速检测的分析方法。基本流程为样品经90%乙腈(1%乙酸)均质提取离心后,上清液依次用C18净化、静置沉淀蛋白后用于测定,该前处理方法灵敏、快速、经济、实用性强。测试曲线线性范围为0.107~177.896ng/m L,检出限为0.0087μg/kg,IC50值为4.34ng/m L。样品批内和批间平均回收率分别为94.10%、93.70%,批内变异系数为4.09%~8.41%,批间变异系数2.78%~7.99%。检测结果与HPLC的相关系数R2=0.9897,表明酶联免疫检测方法及样品前处理方法适合喹诺酮类药物多残留检测。     

食品污染物残留的快速检测技术应用综述及展望

近年来,食品安全问题层出不穷,食品安全问题正受到人们前所未有的关注。食品中的有害物质严重威胁人类的身体健康,对其含量进行快速准确分析具有重要意义。快速检测技术比通常的检测技术具有更快的检测速度,且装置便携、易于实现在线现场检测,在食品安全分析中发挥了重要作用;本文简单介绍了快速检测技术在食品污染物残留检测中的运用,包括检测食品中的农药残留、兽药及饲料添加剂残留、重金属残留、生物性污染物残留等,对检测方法的优点和不足做了透彻的分析,并展望其发展方向,以期为进一步开展食品安全快速分析研究提供参考。     

有机磷农药三唑磷单克隆抗体制备及鉴定

采用活泼酯法和混合酸酐法将三唑磷半抗原(TZPM-Hap)与牛血清蛋白(BSA)和卵血清蛋白(OVA)偶联,分别制备出一种免疫抗原(TZPM-A-BSA)和两种包被抗原(TZPM-A-OVA和TZPM-M-OVA)。通过免疫小鼠及细胞融合,并对杂交瘤细胞进行经多次筛选和亚克隆得到1株产三唑磷单克隆抗体阳性细胞株(FC3),其抗体亚类为IgM。辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后的抗体经间接ELISA检测,该方法IC50=9.7μg/L,最低检测限(LOD)为1.0μg/L,定量检测线性范围(IC20～IC80)为2.5～100.0μg/L,与其他有机磷农药结构类似物无明显交叉反应,显示出高度的特异性。该抗体可进一步用于免疫分析试剂盒开发。     

抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白表达条件的初步研究

初步研究抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)的表达条件,提高CBLscFv-AP融合蛋白的表达量。采用液体发酵法培养抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)基因工程菌,研究不同宿主菌、初始pH、诱导时期、诱导时间和培养基对CBLscFv-AP融合蛋白表达量的影响以及重组质粒的稳定性。选用E·coliBL21(DE3)pLysS为宿主菌,在初始pH为7·4的LB培养基中培养至A600nm为0·8～0·9时,诱导表达8h,为CBLscFv-AP融合蛋白最佳表达条件。而且重组质粒pBV220-scFv-phoA具有较好的结构稳定性。在该表达条件下,提高了CBLscFv-AP融合蛋白的表达量,为进行大规模发酵生产CBLscFv-AP融合蛋白奠定基础。     

基于QuEChERS前处理技术的水产品中喹诺酮类药物多残留ELISA检测方法的建立

建立了水产品中3种喹诺酮类(恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星)兽药多残留的新型Qu ECh ERS前处理技术结合酶联免疫快速检测的分析方法。基本流程为样品经90%乙腈(1%乙酸)均质提取离心后,上清液依次用C18净化、静置沉淀蛋白后用于测定,该前处理方法灵敏、快速、经济、实用性强。测试曲线线性范围为0.107~177.896ng/m L,检出限为0.0087μg/kg,IC50值为4.34ng/m L。样品批内和批间平均回收率分别为94.10%、93.70%,批内变异系数为4.09%~8.41%,批间变异系数2.78%~7.99%。检测结果与HPLC的相关系数R2=0.9897,表明酶联免疫检测方法及样品前处理方法适合喹诺酮类药物多残留检测。      

胶体金免疫层析试纸条在猪尿β-兴奋剂多残留检测中的应用

本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,并对β-兴奋剂单克隆抗体进行标记。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数,研制出能同时检测多种β-兴奋剂的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,本方法对克伦特罗的灵敏度最高,检测线性范围（IC20^IC80）为0.31⁴.52μg/L,IC50为1.18μg/L,检出限（LOD,IC10）为0.14μg/L,猪尿样品无需处理,直接检测,单个样品检测时间只需8 min;与沙丁胺醇、马布特罗、溴布特罗、氯丙那林、西马特罗等β-兴奋剂类药物都有交叉,能实现β-兴奋剂的多残留检测。对阴性猪尿的加标回收实验中,试纸条批内实验回收率在83.6%¹02.2%之间,试纸条批间实验回收率在84.2%¹01.5%之间,且相对标准偏差均在10%以内,与ELISA、HPLC/MS法的对比实验表明,该试纸条能应用于猪尿中β-兴奋剂多残留的定量检测。      

食品中痕量丙烯酰胺检测方法研究进展

丙烯酰胺广泛存在于各类加工食品中,特别是高温加工淀粉类食品、早餐谷类食品或咖啡及其制品等。但是,由于其具有神经和生殖毒性,已被国际肿瘤机构列为2A类致癌物。因此,加强对食品中丙烯酰胺的检测,特别是在食品加工生产线上进行现场或在线监测十分必要。本文主要介绍了目前用于丙烯酰胺按检测的各种方法,主要包括实验室常规检测方法如气相色谱、液相色谱及毛细管电泳,以及有望进行现场或在线监测的检测方法如生物传感器法和免疫分析法等,并对各种方法的优缺点进行评述。      

直接竞争酶联免疫吸附法用于糖浆类保健食品中西地那非检测的研究

建立了一种在保健食品中检测西地那非的直接竞争酶联免疫吸附分析法(dc ELISA)。经优化最佳反应条件为:包被浓度为100ng/m L,酶标抗体稀释倍数为70倍,标准品稀释液为p H=9,0.01mol/L PBST溶液,抗体竞争反应50min。本方法的半抑制浓度IC50为1.47ng/m L,线性范围(IC20~IC80)为0.12~17.65ng/m L,检测限IC15为0.0845ng/m L,批内批间变异系数均小于20%,保健食品补肾糖浆的添加回收率在86.0%~111.0%之间,满足实际样品的快速筛检需求。     

基于光谱法研究异细交链孢菌酮酸半抗原-抗体的相互作用

本文采用紫外可见光谱(UV-Vis)、荧光光谱和圆二色谱(CD)技术研究了异细交链孢菌酮酸单克隆抗体(Mc Ab)与其半抗原(Ite AH)之间的相互作用并用ELISA方法对荧光结果进行了验证。结果表明,ITe AH对Mc Ab有荧光猝灭作用,淬灭机理主要为静态猝灭且遵循非辐射能量转移理论。在298、310、318 K 3个温度下,ITe AH与Mc Ab的结合常数分别为1.9×106、1.6×106、1.4×106 L/mo L,结合位点数n≈1,结合距离r为3.35 nm,经ELISA测得的结合常数与荧光分析的结果较一致。由结合作用过程的热力学参数可知,两者之间以静电引力为主要作用力,不同p H下,由ELISA结果可推测其影响了ITe AH与抗体结合。同步荧光光谱显示ITe AH的加入并未使抗体的酪氨酸和色氨酸残基附近的微环境发生明显改变,两者的结合位点更倾向于酪氨酸残基,圆二色谱分析发现ITe AH与Mc Ab相互作用后,抗体的二级结构发生明显变化。