新鲜奶油中黄嘌呤氧化酶的纯化及其酶学性质

采用正丁醇处理、硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等分离技术,从新鲜的稀奶油中纯化得到SDS-PAGE电泳纯的黄嘌呤氧化酶,其最终回收率为19.9%,纯化倍数为82.42,酶比活为8.65U/mg。该黄嘌呤氧化酶的相对分子质量约为280kDa,最适作用温度为40℃,在35℃以下比较稳定;最适pH值是8.5,在pH6.5～8.5时较稳定;Zn2+、Fe2+和K+对黄嘌呤氧化酶活性有促进作用,Ag+、Mn2+、Ca2+和SDS对黄嘌呤氧化酶活性有抑制作用。     

添加辅酶前体及流加诱导物提高黄嘌呤氧化酶发酵产率

通过对产黄嘌呤氧化酶菌株进行16S rDNA序列分析,构建系统进化树,确定该菌株为球形节杆菌(Arthrobacter globiformis)。添加辅酶前体(核黄素、硫胺素)及诱导物(次黄嘌呤,3.6 g/L),提高了发酵产酶;通过两种方式流加葡萄糖及次黄嘌呤,结果表明,发酵至24 h,一次性补葡萄糖质量浓度4.0 g/L,流加次黄嘌呤质量浓度至3.6 g/L,酶产率可达8 952.7 U/L,比未补料时提高25.7%,平均产率系数达1 041.0 U/g。测定流加发酵过程中铵根离子浓度变化,发现一定质量浓度的铵根离子抑制发酵产黄嘌呤氧化酶。     

果醋发酵液残留乙醇含量的快速检测

在康维皿比色法的基础上,建立了一种快速测定果醋发酵液残留乙醇的新方法。结果表明:采用康维皿作为反应容器,乙醇反应体系在580nm处具有最大吸收峰。果醋中的乙醇浓度在0.5%～10%（v/v）之间呈良好线性,回归方程为Y=0.07389X-0.00886,相关系数R2=0.9995。该方法具有取样量少、快速、准确、无需复杂仪器等优点,不仅适于测定果酒或果醋终产品的乙醇含量,也便于跟踪果酒或果醋生产过程的乙醇含量动态变化,具有较好的应用推广价值。      

用于分离小分子肽的凝胶电泳的改进研究

为了有效分离小分子肽,对SDS-PAGE方法进行改进,调整分离胶分子组成,并在分离胶中加入36%的尿素或13%甘油。实验结果证明:当凝胶的交联度为7.5-10,浓度大于15%,并加入36%的尿素或13%甘油,可以有效分离相对分子质量大于4.1 kDa的小肽。     

发酵过程在线检测系统在谷氨酸发酵中的应用研究

发酵过程在线检测系统包含原位微量取样、级联稀释和微型生物传感器。选择标准葡萄耱溶液作为系统的校正液，符合测试方便、检测线性范围宽、对系统无污染的要求：葡萄耱酶传感器在谷氨酸发酵周期28小时内测定次数15次，平均误差率为1．686％，酶传感器测定抗干扰性强。稳定性较高。     

高密度培养重组E-coli产胆固醇氧化酶的乳糖诱导策略

研究了乳糖诱导重组大肠杆菌表达胆固醇氧化酶。结果表明,乳糖不仅可以作为诱导剂诱导外源蛋白的合成,而且能作为碳源促进菌体的生长。通过对诱导条件的优化,实现了重组大肠杆菌的高密度培养,最高密度达68.9(OD600);在此基础上确定了最佳的诱导时机为发酵中期,菌体产酶水平达6005.66U/L,生产强度为200.19U/L.h,实现了胆固醇氧化酶的高效生产。     

太湖蓝藻培养单细胞蛋白的可行性

以蓝藻原料为氮源发酵生产酵母单细胞蛋白,考察了碳源、维生素、微量元素、矿物质元素、培养温度、接种量、初始pH、通气量等对酵母产量的影响,优化了发酵条件,1 g/dL(干重)的蓝藻培养基最终使酵母产量达到6.2 g/L,并利用高效液相色谱法检测酵母产物胞内微囊藻毒素.结果表明,酵母中微囊藻毒素含量为390 μg/kg.     

不同培养模式对微藻Chlorella vugaris代谢与蛋白质组分的影响

研究不同培养模式对小球藻蛋白合成的影响。分别采用自养、异养和混养模式培养小球藻生产蛋白质。结果为混养时藻细胞更易积累生物量,其比生长速率和产率高达0.526 d-1和0.318mg/(L·d),且其蛋白质质量分数和产率分别为35.6%和0.097 g/(L·d),自养时蛋白质质量分数却最高为52.1%;3种方式培养小球藻均含18种氨基酸,且必须氨基酸比例均超过总的40.0%;异养和混养方式下各氨基酸组成比例基本相似,而与自养时相比,Cys-s、Tyr和Met比例差异显著,Cys-s比例分别高了约78.57%,而Tyr及Met分别低27.59%和33.33%左右。营养方式显著影响小球藻蛋白质合成及氨基酸组成比例。     

复合诱变提高节杆菌黄嘌呤氧化酶活力

以节杆菌(Arthrobacter)X7为出发菌株,经超声波联合亚硝基胍的复合诱变处理,获得1株黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,简写为XOD)高产菌株M3,其酶活力达到76.04 U/g(干菌体),较出发菌株提高了107%。通过优化实验对该菌株生产黄嘌呤氧化酶的营养要求和发酵条件进行了研究,优化后,该菌株的产酶活力达到了273.24 U/g(干菌体),每升发酵液总酶活力达到724 U/L,总酶活较诱变前提高了7.33倍。     

乳糖诱导E.coli发酵生产FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶

黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）为辅基的葡萄糖脱氢酶（FAD-GDH,EC1.1.5.9）,具有辅基结合紧密、催化效率高的优点,可替代目前诊断用葡萄糖氧化酶应用于血糖指标的临床生化检测。本文选取Burkholderia cepacia的葡萄糖脱氢酶基因（gdh）构建表达质粒pTrc99a-gdh,转化E. coli BL21(DE3)。异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导发酵,通过酶活测定及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得可溶性表达的FAD-GDH,分子量约为60000。利用乳糖替代IPTG作为诱导剂,摇瓶水平初步探索诱导条件,酶活达到994U/L。7.5L发酵罐放大培养该菌,采用梯度流加补料策略,分阶段温度控制,并采用不同的乳糖流加速率进行诱导。当采用0.3mL/min的乳糖流加速率时,酶活达22200U/L,菌体量达69.48g/L。经过镍柱层析,最终获得纯酶的比酶活104.5U/mg。为医用诊断原料用酶葡萄糖脱氢酶新酶种的工业化生产提供借鉴。