五种食源性致病菌多重PCR的条件优化和检出限分析

对沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157∶H7、单核增生李斯特菌和福氏志贺菌5种食源性致病菌的多重PCR反应条件进行优化并分析方法的DNA检测限。方法 根据沙门菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的16S rDNA基因、大肠杆菌O157∶H7的eaeA基因、单核增生李斯特菌的hlyA基因和福氏志贺菌的ipaH基因设计5对特异性引物进行多重PCR,对反应条件包括镁离子浓度、引物浓度和退火温度进行优化试验,并确定该检测方法的检出限。结果 最佳反应条件为金黄色葡萄球菌、沙门菌和福氏志贺菌引物浓度为0.25μmol/L,单核增生李斯特菌引物浓度为0.4μmol/L,大肠杆菌O157∶H7引物浓度为0.3μmol/L,Mg²⁺浓度为2.25mmol/L,退火温度为60℃;在此条件下金黄色葡萄球菌、肠炎沙门菌、大肠杆菌O157∶H7、单核增生李斯特菌、福氏志贺菌的多重PCR的DNA检出限分别为6.4、32、32、800和160pg。结论 通过对5种引物的PCR条件进行优化和检出限的分析,为食品中该5种致病菌的快速检测奠定基础,对实际应用具有指导意义。     

奶牛场沙门氏菌分离株的流行特征及抗性分析

研究奶牛场沙门氏菌分离株的流行特征及抗性分析。从成都市某规模化奶牛场采集样品,对菌株进行分离鉴定和血清型分析,药敏检测,毒力基因、耐药基因和抗消毒剂基因检测,对常用消毒剂MIC值检测,以及有效巴氏灭菌温度分析。该研究共采集样品700份,分离16株沙门氏菌,得到4种血清型（肠炎沙门氏菌6株、甲型副伤寒沙门氏菌6株、鼠伤寒沙门氏菌3株、婴儿沙门氏菌1株）;菌株对头孢他啶、左氧氟沙星、亚胺培南敏感,携带24种耐药基因,检出率最高是tetB（93.75%）,其次是aaC4（75.00%）;检出12种毒力基因,sipA检测率最高为62.50%;抗消毒剂基因检出率最高为qacEΔ1（56.25%）。16株沙门氏菌对9种不同消毒剂MIC值普遍高于厂家推荐使用浓度的1~3倍;菌株在全脂乳和脱脂乳中100%杀菌温度分别为64.00 ℃和63.50 ℃。该奶牛场沙门氏菌分离菌株对消毒剂抗性较强,但在64.00 ℃能够对其有效杀灭。建议奶牛场加强沙门氏菌防控,规范消毒剂使用。     

食品中金黄色葡萄球菌检测方法研究进展

金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的重要致病菌之一,检测食品中金黄色葡萄球菌对于预防和控制金黄色葡萄球菌引起的食物中毒具有重要意义。论述和分析了传统培养方法、传统检测方法的改进、免疫学方法、以分子生物学为基础的快速检测方法以及商业化快速检测方法。     

抗菌肽BuforinⅡ衍生物的生物活性研究

研究了抗菌肽BF2-A/B的抗菌活性及其他的生物活性。两个肽均具有很强的广谱抗菌活性,BF2-B对细菌的抑菌活性比BF2-A强,它们没有体外溶血活性。BF2-A几乎没有细胞毒性,而BF2-B在100μg/mL时,能抑制大约20%的肿瘤细胞生长。两个肽均能结合脂多糖,中和内毒素,BF2-B与脂多糖的亲和结合力比BF2-A强。BF2-A/B经胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后,抗菌活力都略有下降,而经蛋白酶K处理一段时间后,就完全丧失了抗菌活性。     

乳源凝固酶阴性金黄色葡萄球菌挥发性代谢特征分析

为探究乳源金黄色葡萄球菌的挥发性代谢特征,从牛乳中分离得到5株凝固酶阴性金黄色葡萄球菌(31B、0250H、777H、S12-1和S2-2),采用顶空固相微萃取/气相色谱-质谱联用技术,分别对接种这5株菌的胰蛋白胨大豆肉汤(tryptic soy broth,TSB)和牛乳的挥发性代谢产物进行动态测定。结果表明,TSB中5株菌总计检出33个挥发性代谢产物,1-丁醇、乙酸、3-甲基-丁酸和2-丁酮是5株菌共同检出的典型挥发性代谢产物。牛乳中5株菌总计检出28个挥发性代谢产物,2-呋喃甲醇、辛酸和3-甲基-丁酸是5株菌共同检出的典型挥发性代谢产物。无论是在TSB还是牛乳中,3-甲基-丁酸始终是凝固酶阴性金黄色葡萄球菌稳定的挥发性代谢产物。不同菌株产生3-甲基-丁酸的强度不相同,同一菌株在TSB和牛乳两种不同基质中3-甲基-丁酸的产生强度也不相同。     

基于电子鼻和气相-离子迁移谱探究辣椒素对植物乳杆菌LP-CL-01产香特性的影响

本研究以传统发酵糍粑辣椒中分离出的植物乳杆菌LP-CL-01为研究对象,采用气相色谱-离子迁移谱（GC-IMS）结合电子鼻（E-Nose）探究辣椒素胁迫对植物乳杆菌发酵特性的影响。结果表明：E-Nose可以准确区分出辣椒素胁迫及不同发酵时间植物乳杆菌的风味差异。利用GC-IMS技术共检测出48种挥发性物质,在辣椒素胁迫下随着发酵时间的延长,植物乳杆菌LP-CL-01产生乙酸乙酯、2-庚酮和2-甲基丁基乙酸酯等的相对含量显著增加（P<0.05）;N-亚硝基吗啉和左旋香芹酮等的相对含量显著降低（P<0.05）。综上所述,辣椒素胁迫会影响植物乳杆菌产香特性。该研究为植物乳杆菌在辣椒素胁迫条件下代谢产物变化研究提供借鉴,同时为改善传统发酵辣椒制品的风味质量提供参考。     

恒温隔绝式PCR快速检测蜡样芽孢杆菌方法的建立及应用

该研究以编码旋转酶B亚基的gyrB基因为靶基因,利用恒温热隔绝式PCR（Insulatedisothermal PCR,IiPCR）,建立一种快速检测蜡样芽孢杆菌的方法。同时,将建立的方法与聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）和实时荧光定量PCR（SYBER Green Ⅰ荧光染料法和TaqMan探针法）检测方法相比较,并应用于不同类型零售食品中的蜡样芽孢杆菌检测。结果表明建立的检测方法能在40 min内迅速判定出结果（+、-、？）;与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、肠炎沙门氏菌等均无交叉反应,显示出良好的特异性;方法的最低检出限为1.5×102 CFU/mL,优于普通PCR,与实时荧光定量PCR检出限相当;对42份零售食品进行检测,共发现45.23%的样本被蜡样芽胞杆菌污染（19/42）。这一结果与常规PCR检测结果一致,但检测时间至少节省了4 h以上。该研究为蜡样芽孢杆菌提供了一种快速、便捷、特异性强、灵敏度高、适用于现场实时检测的检测方法。     

产蛋白酶波茨坦短芽孢杆菌的鉴定及产酶条件优化

该研究旨在提高一株环境分离菌株的产酶效率,为后续菌株及其蛋白酶的应用提供前期实验基础。通过水解圈法初步检测菌株S8的产蛋白酶能力,并通过16S rRNA序列比对确认其为波茨坦短芽孢杆菌。通过单因素试验确定了最佳培养条件和培养基添加成分。并采用Plackett-Burman设计和最陡爬坡试验对培养条件和培养基进行响应面优化。优化结果显示,在发酵时间为38.70 h、菌液接种量为1.84%（V/V）、发酵温度为35 ℃、酵母粉添加量为23.70 g/L、胰蛋白胨添加量为11.70 g/L、MgSO4添加量为20.20 g/L的条件下,菌株的产酶活力可达到114.79 U/mL,相比优化前提升了209.70%。研究结果为该菌株的后续发酵应用提供了科学数据。     

蜂蜜桑椹酒主要成分的分析

对不同品种的蜂蜜桑椹酒中主要成分进行分析,结果表明:各种酒样在糖度、酸度、酒度上差异很小,但蛋白质含量差异较大。矿物元素表现出高钾低钠的特点,镁元素含量较高。氨基酸总含量和必需氨基酸含量以红果1号桑椹蜂蜜发酵酒最高,而农用桑椹蜂蜜发酵酒最低。在检测的7种酚酸和5种黄酮醇中,不同酒样间存在一定差异,但原儿茶酸、咖啡酸、槲皮素和桑色素是含量较高的4种物质。此外,以3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丙醇、苯乙醇、4-羟基苯乙醇、2,3-丁二醇、乙酸乙酯、丁二酸单乙酯、S-乳酸乙酯、乙酸和癸酸等为蜂蜜桑椹酒的基本香气成分。     

竞争抑制酶联免疫吸附法快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素P

目的 建立一种稳定性强、灵敏度高的快速检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素P(staphylococcal enterotoxin P,SEP)的单克隆抗体竞争抑制酶联免疫吸附法(Enzyme-linked Immunosorbent assay,ELISA)。方法 根据ELISA的检测程序,利用交叉方阵滴定法确定SEP抗原的最佳包被浓度及单克隆抗体的最佳倍比稀释浓度,再对辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG(HRP-IgG)最佳稀释浓度及最佳反应时间进行筛选,然后通过测定450nm处不同SEP抗原包被条件(包被液类型、包被环境)、封闭液类型及浓度、封闭时间、竞争反应温度、反应方式(预混反应、直接反应)下的OD值对检测条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标样品回收率对方法进行评价。结果 SEP抗原最佳包被浓度为2.5 μg/mL,鼠单抗血清稀释度1:6000,酶标抗稀释度1:3000;反应1 h,最佳包被条件为磷酸盐缓冲液4 ℃过夜,10%脱脂乳封闭2 h,37 ℃直接竞争反应。此方法的线性回归方程为：y = 0.4166x - 0.7415(R2 = 0.9908),灵敏度为0.954 μg/mL,批内及批间变异系数均低于3 %,对人工污染的脱脂牛奶、LB液体培养基中肠毒素蛋白SEP的回收率高于98%。结论 本实验建立了一种能够快速检测葡萄球菌肠毒素SEP的ELISA方法。