利用浓醪酒糟培养单细胞蛋白的研究

利用玉米原料酒精浓醪发酵产生的酒糟，对其培养热带假丝酵母生产SCP进行了初步的研究。经过优化后的发酵条件为：酒糟中添加0．2‰CaCl2和1．0‰KHEP04，起始pH为4．5，装液量为30mL／500mL三角瓶；发酵26h，获得的最高菌浓为11.3亿／mL；发酵过程中酵母基本消耗完酒糟中的糖，同时还消耗了酒糟中的有机酸。发酵得到的SCP样品中含水分9．47％，粗蛋白47．73％，真蛋白45．09％，取得了较好的效果。     

大孔树脂分离提取发酵液中灵芝三萜类物质

利用大孔树脂富集提取发酵液中灵芝三萜。通过比较4种大孔树脂对灵芝三萜的吸附和解吸性能，发现AB-8树脂最适合灵芝三萜的提取。结果表明：控制体积流量为2mL／min、pH值2，AB-8树脂的饱和吸附量达到最大，为8．837mg／g（以干树脂质量计）。确立了最佳洗脱方案，依次用水、体积分数20％、40％、95％乙醇溶液分段洗脱。     

重组枯草芽孢杆菌分泌表达腺苷酸脱氨酶

目的：利用基因重组技术,构建腺苷酸脱氨酶高效表达的重组菌株。方法：以前期构建的产腺苷酸脱氨酶重组大肠杆菌BL21（DE3）/pET28α-AMPD中来源于鼠灰链霉菌（Streptomyces murinus）目的基因为模板,设计特异性引物扩增腺苷酸脱氨酶基因,亚克隆至游离型表达载体pHY-WZX,转化枯草芽孢杆菌WB600。结果：成功筛选获得了一株产腺苷酸脱氨酶重组枯草芽孢杆菌WB600/pHY-AMPD,进一步在摇瓶中探究了发酵培养基成分对重组酶发酵的影响。获得了较优发酵培养基为：葡萄糖10 g/L、 酵母膏30 g/L、CaCl2 0.5 g/L、柠檬酸三钠1 g/L、NaH2PO4 10 g/L、K2HPO4 10 g/L、(NH4)2SO4 5 g/L,37 ℃、200 r/min发酵60 h摇瓶发酵液酶活力可达到（2 230±50） U/mL。结论：本研究实现了鼠灰链霉菌来源的腺苷酸脱氨酶基因在枯草芽孢杆菌中表达。     

基于亚甲基蓝还原法指导酵母的培养

亚甲基蓝还原实验法(MBRT)是一种新的评价酵母活力的方法,该文首次使用该方法考察了几种主要离子及无机氮源对酒精酵母生长的影响,并指导了劣质原料木薯渣糖化清液中高活力酵母的培养.从几种主要离子及无机氮源对酵母活力的影响结果初步分析得出如下结论,酵母生长过程中K+的作用最为明显,最适浓度为0.015mol/L;Mg2+是必须的,但当浓度超过0.004mol/L时,就会抑制酵母生长;低浓度的Na+与Ca2+对酵母生长有促进作用,最适浓度分别为0.0025mol/L、0.001mol/L.与硫酸铵相比,尿素是较好的无机氮源,最适浓度为2g/L.利用木薯渣糖化清液培养酵母时,添加2g/L的尿素及0.015moi/L钾离子后,可使培养出的酵母数增加6倍,酵母活力值为105s(空白为256s).     

混合碳源对灵芝多糖发酵及其抗肿瘤活性的影响

为了高效生产活性灵芝多糖,以葡萄糖液体发酵的基本碳源,同时添加两种灵芝多糖的主要单糖组分——半乳糖和甘露糖,研究混合碳源对灵芝生长、多糖合成及其抗肿瘤活性的影响。结果表明,以不同的混合碳源作为灵芝液态发酵的碳源,发现不同比例的单糖碳源对灵芝多糖产量和生物量影响较小。不同的灵芝多糖剂量对皮肤基底癌细胞A431和人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖均有抑制作用,碳源比例对灵芝多糖活性影响较大。葡萄糖和半乳糖以质量浓度比1∶1作碳源时抑制率可达到50%~60%;葡萄糖和半乳糖质量浓度比1∶2作碳源时抑制率可达到75%~85%;葡萄糖和甘露糖质量浓度比1∶1作碳源时抑制率可达到60%~65%;葡萄糖和甘露糖质量浓度比1∶2作碳源时抑制率可达到80%~85%;葡萄糖、半乳糖和甘露糖质量浓度比1∶1∶1作碳源时抑制率可达到80%~85%。初始培养基中半乳糖和甘露糖所占比例大有利于灵芝多糖抗肿瘤活性的发挥。     

牛樟芝液体发酵过程挥发性物质分析

目的:分析牛樟芝发酵液中挥发性物质在液体发酵过程中的动态变化并以此为依据进行统计分析。方法:采用顶空-固相微萃取-气相色谱-质谱技术对挥发性物质进行定性定量分析,并利用主成分分析和聚类分析对牛樟芝进行综合评价。结果:牛樟芝液体发酵过程中,不同阶段呈现出不同的香味,此过程共鉴定出50种化合物,其中醇类10种,酯类16种。主成分分析结果表明,主成分1和主成分2的方差贡献率为62.786%,能够代表牛樟芝的主要挥发性物质;聚类分析结果表明,整个发酵过程随挥发性物质变化规律聚集为3类。结论:牛樟芝液体发酵过程产生的香味物质可以作为化妆品、食品等领域的重要天然资源,同时,挥发性物质的综合分析为将来对牛樟芝相关产品的质量评价、价值评估以及新产品开发提供了重要的技术指标。     

一种灵芝三萜皂甙新物质的分离鉴定和结构推断

通过凝胶色谱和反相硅胶柱色谱从灵芝发酵液中分离得到一种新物质,定性检验该物质为灵芝三萜皂甙,通过反相高效液相色谱鉴定其纯度为94.45 %.进一步用质谱,红外,紫外对其分子结构进行初步推断,这种皂甙是一个连有1个糖基的母核荷质比为402 、相对分子质量为564 的皂甙.     

转运系统集成改造提升大肠杆菌胞外蛋氨酸积累

通过构建大肠杆菌(Escherichia coli)W3110 MetD吸收系统编码基因metI、metN、metQ单个缺损菌株,获得胞外蛋氨酸吸收速率最小菌株;游离及染色体整合表达YjeH和YeaS分泌系统编码基因yjeH和yeaS,研究增强蛋氨酸分泌与弱化蛋氨酸吸收集成改造策略对菌体胞外蛋氨酸积累和生物量的影响,为理性构建蛋氨酸高产菌株提供可行策略。实验结果表明,基因metI的缺损对胞外蛋氨酸的吸收影响最大,吸收速率降低了16.7%;游离表达基因yjeH和yeaS,胞外蛋氨酸开始积累,胞外蛋氨酸最大积累量为0.21 g/L和0.18 g/L;染色体整合表达基因yjeH和yeaS,胞外蛋氨酸的最大积累量为0.48 g/L和0.25 g/L,与游离表达相比提高了128%和38.9%。增强蛋氨酸分泌与弱化蛋氨酸吸收集成改造策略对于促进胞外蛋氨酸的积累效果显著,可以作为理性构建蛋氨酸高产菌株的策略。     

代谢改造酿酒酵母生产番茄红素

番茄红素是一种具有较高商业价值的萜类化合物,具有良好的抗氧化性,对心血管疾病有预防作用,可通过微生物发酵法高效生产。为了提高酿酒酵母胞内番茄红素积累,过量表达了三酰甘油途径(TAG途径)的关键基因dga1(酰基辅酶A:二酰基甘油酰基转移酶)、pah1(磷脂酸磷酸酶),同时敲入ldp1(脂滴附着蛋白);继续在ypl062w位点敲入来源于肠沙门氏菌的acs1^L641P(胞内乙酰CoA合成酶),为番茄红素和脂质载体提供充足的前体;过表达pap1(聚腺苷酸聚合酶)以满足多个基因过表达的转录需求。综上,该文构建了一个适合番茄红素累积的细胞工厂,番茄红素单位产量为109.26 mg/g DCW。该研究通过代谢改造得到1株高产番茄红素重组菌,研究结果为后续进行发酵优化奠定了基础。     

根癌土壤杆菌产辅酶Q10的补料分批发酵工艺

以根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens Q14)为生产菌株,在15 L发酵罐内对补料分批发酵生产辅酶Q10的工艺进行优化.通过逐步添加限制性营养物质,考察其对发酵的影响,获得了较优的补料分批发酵工艺,即流加葡萄糖和KH2PO4溶液,将葡萄糖和磷浓度分别控制在5～15 g/L和50～120 m...