柑橘抗CTV转基因与分子标记研究进展

综述了柑橘抗衰退病基因工程中两方面的研究进展。介绍多种来源于柑橘衰退病毒(Citrustriztezavirus,CTV)核酸序列的转基因柑橘和抗性种质资源中抗性基因的分子标记,以及所涉及的方法和遇到的问题。目前研究表明,虽然已成功实现对病毒衣壳蛋白(CP)等基因的转化和Ctv等抗性基因的标记,但尚未获得对CTV有高度抗性的转基因柑橘,而抗性基因亦不能实现定点克隆和转化。因此上述两方面研究还有待深入。     

组织培养条件下苹果Ty1-copia类逆转座子的转录活性

研究了苹果基因组中Tyl—copia类逆转座子的转录活性、多样性及其甲基化水平。在培养基MS＋2，4-D2mg／L＋BA0．2mg／L＋NAA0．5mg／L上诱导了1个月的愈伤组织中用RT—PCR方法检测到了270bp的目的条带，而对照、继代组培苗和不含2，4-D的愈伤中均没有目的条带的扩增，说明一定浓度的2，4-D可以诱导苹果中Tyl—copia类逆转座子的表达活性。将目的条带回收、克隆和测序后进行分析：所克隆的21条序列虽都为Tyl-copia类逆转座子逆转录酶保守序列，但存在很大的异质性，21个克隆的核甘酸序列变化范围为196—290bp；翻译成氨基酸后存在缺失、插入、移框和终止密码子突变，7个克隆在氨基酸保守序列‘SLYGLKQ’处有1—2氨基酸位点的突变，说明这些序列对应的逆转录酶多数可能已失去了其原有功能。将21条序列进行聚类分析，除ART20外，其它克隆可聚为3类，并分别与GenBank上某些物种的相应序列同源性很高，表明在不同物种间可能存在逆转座子的横向传递作用。甲基化试验表明苹果基因组内Tyl-copia类逆转座子甲基化水平高。这些都表明Tyl-copia类逆转座子对苹果基因型的多样性及基因组的进化具有重要意义。     

杨梅简易气调保鲜过程中气体成分变化及保鲜效果

以东魁杨梅为试材,研究简易自发气调贮藏(MA)和充氮气调贮藏(NA)条件下,杨梅贮藏小环境中气体成分的变化和对贮藏效果的影响。结果表明:在MA中,乙烯浓度在2d达到高峰;O2前4d浓度急剧下降,后维持在2.48%至1.78%;CO2一直呈上升趋势,试验过程浓度提高了124.3%。在NA中,乙烯高峰出现时间明显推迟、峰高降低;O2浓度维持在2.28%-1.82%,CO2变化与MA相似,浓度提高了131.3%。MA和NA均有效延缓杨梅鲜果的软化变质,减缓果实硬度和总糖的下降速率。贮藏至16d,NA和MA中果实变质率分别比对照下降31.6%和22.5%,硬度比对照增加25.93%和21.98%,总糖含量处理与对照无明显差异。     

柑橘裂皮病类病毒的一步RT-PCR法检测及其在甜橙体内的分布

柑橘裂皮病是由柑橘裂皮病类病毒(Citrusexocortisviroid,CEVd)引起的一种重要的柑橘病害。分别采用快速微量核酸提取法和SDS-KAc抽提法在表现症状的Etrog香橼中提取核酸,采用一步RT-PCR法对CEVd进行检测,结果显示SDS-KAc法可以消除带毒样品中非特异性条带。从嫁接接毒的铜水72-1锦橙植株的接穗部取嫩叶、老叶、皮,从砧木部茎杆上取老皮以及根皮分别提取总核酸进行RT-PCR检测,分析CEVd在甜橙体内的分布情况。初步检测结果表明在接穗的嫩叶、老叶、皮,砧木部茎杆的老皮和根皮上都可以检测到CEVd,以接穗部叶和皮检出稳定性高。     

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立

采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒（AIV）A／Goose／HLJ／p46／2003（H5N1）的NSl基因，将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上，转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞，经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析，表明筛选到了重组质粒pc2X-NS1。SDS-PAGE电泳结果显示，重组质粒转化TB1大肠埃希氏菌后，经0．3mmol／L的IPTG诱导，融合蛋白MBP-NS1得到大量表达，融合蛋白以可溶形式存在，分子质量约为67ku。Western-blotting检测结果表明，融合蛋白MBP-NS1能够与H5N1亚型AIV活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应，而不能够与H5N1亚型AIV灭活疫苗免疫鸭血清发生反应。试验初步建立了以纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的间接ELISA检测方法，为AIV灭活疫苗免疫家禽与AIV感染家禽的鉴别诊断奠定了基础。     

复合酶制剂对产蛋鸡生产性能的影响

选用41周龄的海兰褐商品蛋鸡1200只,随机分成两组,每组600只。组内设3个重复,每个重复200只。对照组喂基础日粮,试验组喂基础日粮+0.1%蛋鸡用复合酶制剂,试验期28d。结果表明在产蛋鸡的基础日粮中添加0.1%的复合酶制剂可以使产蛋率平均提高6.12%(P<0.05),料蛋比降低11.69%(P<0.05)。说明在蛋鸡的基础日粮中添加适当的复合酶制剂能促进蛋鸡消化吸收,降低饲养成本,提高饲料转化率和经济效益。     

不同月龄生长公牛日粮营养物质消化规律的研究

本试验选用3头6月龄左右断奶中国荷斯坦公牛,在试验全程喂以相对稳定的日粮,从2003年11月1日开始,到2004年6月20日结束,用以测定中国荷斯坦生长公牛在不同生长期对饲粮中各营养成分的代谢情况。试验结果表明:日粮中的DM、OM、NDF、ADF、淀粉和粗蛋白质的表观消化率随着生长犊牛的月龄的增加而增加(P<0.05);并且9月龄以后,DM、OM、NDF、ADF和粗蛋白质的表观消化率增长不明显(P>0.05),淀粉的表观消化率则在11月龄以后增长不明显(P>0.05)。氮的净吸收率随着生长犊牛的月龄的增加而下降(P<0.05),且在9月龄以后下降不明显(P>0.05)。     

Association of polymorphism of Fc receptor γ chain gene at position-29 in promoter with the susceptibility to systemic lupus erythematosus in southern Chinese

AIM:To detect the association between the polymorphism of Fc receptor γ chain gene at position-29 in promoter and systemic lupus erythematosus(SLE).METHODS:The genotypes at position -29 in promoter of Fc receptor γ chain gene were determined by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method in 180 patients with SLE and 140 ethnically matched controls in southern China.RESULTS:The frequencies of TT genotype(33.3%) and T allele (54.4%) at position -29 in patients with SLE were significantly higher than those in controls (17.2% and 42.9%, respectively), whereas, the frequencies of GG genotype (24.4%) and G allele (45.6%) in patients with SLE were remarkably lower than those in controls (31.4% and 57.1%, respectively) (P＜0.05). The TT genotype and T allele at position -29 were not associated with lupus nephritis in SLE patients (P＞0.05).CONCLUSION:Our results indicate that the T allele at position -29 in promoter of Fc receptor gene probably contributes to the susceptibility to SLE, but does not play a role in the occurrence of lupus nephritis.     

Effects of the juice of Fructus Hippophae (JFH) on thrombocytopenia induced by cyclophosphamide in rats

AIM:To investigate the effects of the juice of fructus hippophae(JFH) on thrombocytopenia in rats.METHODS:Forty-eight wistar rats were divided into control group, model group, Yixuesheng-Jiaonang (YSJN) group and JFH group. Rats were injected intraperitoneally with cyclophosphamide (CTX, 30 mg/kg) or saline once a day for 3 days. And then, Saline, YSJN or JFH was administered (ig) once a day for 11 days. On the second, fouth, sixth and eighth day, the thrombocyte were counted, the mean platelet volume (MPV) and PDW were examined. On the eighth day, the cAMP, cGMP in platelets and platelet aggregation function were also examined.RESULTS:JFH could shorten the time of blood coagulation, increase the count of platelet, and enhance the platelet aggregation function. The experiment also showed that the JFH could decrease cGMP content in platelet.CONCLUSION:JFH could enhance blood coagulation and quality of platelet and prevent thrombocytopenia induced by cyclophosphamide in rats.     

天然芸苔素内酯缓解胺苯磺隆对后茬水稻药害的作用机理初探

通过测定天然芸苔素内酯对水稻幼苗谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)活性以及在离体和活体条件下对水稻幼苗乙酰乳酸合成酶(ALS)活力的影响,研究天然芸苔素内酯减轻胺苯磺隆对水稻药害的作用机理。结果表明,其作用机理与水稻幼苗GSH含量、GST活性变化没有太大相关性,可能与其能间接激活水稻幼苗ALS活力有较大相关。