禽流感及其免疫防制

１　病原　引起禽流感的病原为Ａ型流感病毒,属于正粘病毒科流感病毒属,病毒粒子一般为球形,直径８０～１２０ｎｍ,有囊膜,表面有许多放射状排列的突起,长度约为１２～１４ｎｍ,突起可分两类,一类呈棒状（ＨＡ）,另一类呈磨菇状（ＮＡ）。病毒基因组为８个负链的单股ＲＮＡ片段组成,占０．８％～１．１％,蛋白质占７０％～７５％,除了ＮＡ和ＨＡ外,还有核蛋白（ＮＰ）、病毒膜蛋白（Ｍ）及其结构蛋白（ＮＳ）,脂质２０％～２８％,碳水化合物５％～８％。ＡＩＶ的ＨＡ决定病毒的致病性以及亚型的抗原特异性。该病毒与其它有囊…     

鸭副粘病毒弱毒株的选育

应用SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)连续传代培育出鸭副粘病毒弱毒疫苗株,并测定该弱毒株的部分生物学特性.结果显示:该弱毒株已失去对无母源抗体番鸭的致病性,在雏番鸭体内连续肓传5代,未见毒力返强现象;对CEF的TCID50稳定在10-6.0～10-6.5·(0.1 mL)-1;无母源抗体的番鸭免疫不同代次弱毒后7 d攻击鸭副粘病毒强毒,保护率均在90％以上.结果表明该弱毒株安全性好、遗传性稳定、免疫原性强,可用于制备鸭副粘病毒病疫苗.     

1株鸡新城疫强毒株的分离与鉴定

1998年 1 0月 ,福州郊县某鸡场的新城疫免疫鸡群发生以呼吸困难、拉黄绿色稀粪、气管出血、盲肠扁桃体出血、头颈歪曲为特征的疫病 ,发病率和病死率分别为 85%和 46 %左右 ,疑为鸡新城疫 ,但用ND I系疫苗紧急接种未能控制疫情 ,故采集病料进行病毒分离和鉴定。结果报告如下。1　材料与方法1 .1　材料　 9～ 1 0日龄鸡胚、雏鸡均来自新城疫HI抗体阴性鸡 ;新城疫标准阳性血清、标准强毒F4 8E8株和弱毒 La Sota株 ,均购自中国兽医药品监察所。1 .2　病毒分离1 .2 .1　病料处理　取病鸡的肝、脾、肾和气管 ,剪碎研磨 ,以 Hank' s液制成 1∶ …     

福建省番鸭细小病毒病流行病学及病原研究

从福建省番鸭主要饲养区共收集临床疑似番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)病病料65份,进行病原学检测、病原分离、动物回归试验、免疫攻毒试验、基因片段序列分析,旨在研究福建省番鸭细小病毒病流行情况及病毒遗传变异状况。结果显示:仅有10份为MDPV感染,占比为15.2%;其余均为其他病原或两种病原混合感染。MDPV一年四季均能发生,但主要以冬春季节多发(占80%)。从分离的10株MDPV来看,分离株均能致死番鸭胚,番鸭感染MDPV分离株后发病率为80%~100%,死亡率为40%~60%,与1985年分离的MDPV-P株特性相似。1日龄番鸭免疫番鸭细小病毒病活疫苗后,7日龄进行分离株的攻毒,未见发病和死亡现象。基因进化树显示10株分离株与MDPV-P株属于同一分支。基于2018年流行的MDPV毒株与1985年MDPV-P株致病性、抗原性和基因序列特性相似,无明显变化,可使用番鸭细小病毒病活疫苗进行免疫可有效防控该病。     

猪伪狂犬病病毒囊膜蛋白免疫刺激复合物的制备

以非离子去污剂Mega-10裂解病毒囊膜蛋白，与新型佐剂ISCOM基质作用，应用离心和透析相结合的方法制备了猪伪狂犬病病毒囊膜蛋白免疫刺激复合物（PRV－ISCOMs）。PRV－ISCOMs经磷钨酸负染后电镜观察见到囊膜蛋白分布在ISCOM颗粒表面，形成直径30－40nm的笼格状结构，同时将PRV－ISCOMs在－20℃冻融5次后经电镜观察仍见到典型的笼格状结构，与国外报道的形态一致，本结果证实我们成功地制备了具有良好稳定性的PRV－IS－COMs。     

鹅细小病毒弱毒株选育的研究

应用番鸭胚成纤维细胞（MDEFC）培育出适应MDEFC增殖并产生细胞病变的鹅细小病毒弱毒疫苗株，同时测定了该弱毒株的部分生物米特性。结果显示：该弱毒株已失去对1日龄雏番鸭的致病性，在雏番鸭体内连续肓传5代，未见毒力反强现象；该弱毒株对MDEFC的TCID50稳定在10^-5-10^-6/0.1ml；1日龄雏番鸭免疫接种后7天攻毒可获100％保护，表明该弱毒株安全、免疫原性良好。     

3种禽类呼肠孤病毒血清学相关性及致细胞病变差异分析

本研究旨在研究3种不同疾病型禽类呼肠孤病毒间的抗原性关系及病毒的培养特性。作者通过血清中和试验测定了禽呼肠孤病毒(ARV S1133株)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV 9710株)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV NP01株)3种禽类呼肠孤病毒的血清学相关性,统计抗原相关性R值;并应用部分禽胚原代细胞及哺乳动物传代细胞对这3种病毒的培养特性进行了初步研究。结果表明,3种病毒株之间的R值很小,抗原相关性较低;三者具有广泛的细胞亲嗜性,能在多种细胞中增殖,并产生细胞病变,但病毒致细胞病变特征有所差异,ARV和NDRV均以巨融合为主,而MDRV则以细胞圆缩坏死为主。上述结果表明导致禽类不同疾病的ARV、MDRV和NDRV三者之间的抗原相关性较低,病毒的细胞培养特性也不同,细胞病变类型的差别提供了一种初步鉴别禽类呼肠孤病毒的方法。     

番鸭源小鹅瘟病毒和番鸭细小病毒的结构蛋白及其抗原性

应用交叉免疫印迹方法,分析比较了番鸭源小鹅瘟病毒(MDGPV)和番鸭细小病毒(MDPV)结构蛋白抗原性的差异.结果表明:MDGPV和MDPV纯化病毒在SDS-PAGE分析中均呈现3种结构蛋白,分子质量分别为81、65和55 ku;在免疫印迹试验中,MDGPV和MDPV的VP1、VP2和VP3三种结构蛋白均可被同源抗血清识别,而异源抗血清均不能识别VP1蛋白;免疫番鸭血清和感染耐过番鸭血清识别的条带无明显区别.可见,MDGPV和MDPV的抗原性差异主要体现在VP1蛋白上.     

番鸭呼肠孤病毒弱毒株选育研究

应用番鸭胚成纤维细胞和鸡胚成纤维细胞(CEF)交替传代选育出适应CEF繁殖的番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗株。该弱毒株已失去对1日龄雏番鸭的致病性,对CEF的TCID50稳定在10-5~10-5.5;在雏番鸭体内连续盲传5代,未见毒力返强现象;1日龄雏番鸭免疫不同代次弱毒后7 d攻击番鸭呼肠孤病毒强毒,保护率均在88%以上,且不同代次弱毒的外源病毒检验结果均为阴性。上述结果表明该弱毒株无外源病毒污染、安全性好、遗传性稳定、免疫原性强,可用于制备番鸭呼肠孤病毒病活疫苗。     

一种新的鸭病（暂名鸭出血性坏死性肝炎）病原学研究初报

从临床表现为肝脏不同程度点/斑块状出血和坏死为主要病变的病死雏番鸭、雏半番鸭和雏麻鸭肝脾组织中分离到8株病毒。分离毒能致死番鸭胚和鸡胚,胚体充出血、胚肝肿大出血坏死;人工感染1-2日龄雏番鸭、雏半番鸭均能复制出与临床自然发病鸭相同的临床症状和病理变化,并能回收到病毒;分离毒能在MDEF中增殖并产生细胞病变,经电镜观察,病毒在细胞浆中增殖,呈大量散在、成堆和晶格状排列,病毒粒子呈球形、二十面体对称、无囊膜、双层衣壳、直径70nm左右;分离毒不能凝集鸡和鸽红细胞,对乙醚、氯仿、FUDR不敏感;病毒核酸为dsRNA,在SDS-PAGE中具有禽呼肠孤病毒10个RNA片段的特征(L1-3、M1-3 和 S1-4);应用MDRV特异性引物不能从分离毒中扩增出任何条带;鉴于分离毒的上述特性,暂将此分离毒归属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属新型鸭呼肠孤病毒。