浙江省副猪嗜血杆菌流行株分离鉴定及药敏试验

为了研究浙江省副猪嗜血杆菌流行菌株耐药性,试验从浙江省杭州、嘉兴、湖州、绍兴和金华等地区8个不同规模猪场典型病例中分离鉴定出了13株副猪嗜血杆菌临床分离株,采用纸片法检测了其对21种临床常用药物的耐药性。结果表明:浙江省副猪嗜血杆菌分离株对大多数常用抗生素敏感,如多西环素、氟苯尼考、阿奇霉素等,对氨苄西林、复方新诺明、头孢类抗生素有较强的耐药性;不同分离株的耐药性有较大的地域、猪场甚至是猪只或分离部位差异。     

马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株囊膜基因的优化及其DNA疫苗体外瞬时表达研究

马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)的密码子使用频率与哺乳动物间存在着明显差异。为此,对马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株(DLA-EIAV)囊膜全长基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行了重新设计和合成,并以此为基础通过重叠延伸PCR、限制酶切等方法得到结合型和分泌型囊膜基因,将其插入含有鸡beta-actin/兔beta-globin复合启动子(AG)的高效表达载体pCAGGS中,构建了EIAV驴白细胞弱毒疫苗株结合型和分泌型囊膜基因的DNA疫苗质粒pCAGGS-opti-bou-env、pCAGGS- opti-sec-env。将构建的质粒纯化后分别转染293T细胞,以间接免疫荧光和Western blot方法检测转染48 h后细胞及上清中囊膜蛋白的表达。结果显示,两种表达质粒均可正确表达EIAV囊膜蛋白,与相对应未优化的表达载体pCAGGS-wt-bou-env和pCAGGS-wt-sec—env相比,密码子优化的基因体外瞬时表达水平有极为显著的提高,而且蛋白表达部位也与预期的结果符合。这一结果为EIAV囊膜蛋白的单抗制备、表位鉴定、免疫试验、新疫苗的开发等奠定了基础。     

浅谈园林绿化工程施工现场管理

园林工程施工现场管理水平的高低决定着企业对市场的应变能力和竞争能力,同时也是目前多数园林公司的薄弱环节。文章探讨了园林工程施工现场管理中经常遇到的一些问题,并提出了一些解决方法及建议。     

重塑城乡形象助力“蕴势腾升”新讷河——讷河市城级规划局服务城乡建设纪实

在黑龙江省齐齐哈尔市的西北边陲，有一个美丽富饶的小城——讷河市。这里因讷谟尔河横贯境域而得名。这里是清朝皇后婉容祖居地、中国马铃薯之乡、中国甜菜之乡和优质大豆主产地，历史悠久，人文鼎盛。特别是新一届领导班子带领全市人民创新路、谋发展，狠抓大项目建设和城乡规划，一个文明富足的新城展示在外来投资者的面前。     

重组猪干扰素-α单克隆抗体的制备和鉴定

利用自动发酵罐培养毕赤酵母,甲醇诱导其分泌表达重组猪IFN-α(r Po IFN-α);经硫酸铵沉淀、G-25琼脂糖柱脱盐处理及阴离子交换柱和分子筛层析纯化。以纯化r Po IFN-α蛋白作为抗原免疫6周龄BALB/c鼠3次后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选和3~5次亚克隆,共获得5株均能稳定分泌抗r Po IFN-α单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体亚类鉴定、特异性和叠加试验结果表明,这5株抗体均属于Ig G1亚类,能与r Po IFN-α产生特异性反应,其抗原结合位点相同或相近。该研究有助于进一步推动r Po IFN-α单克隆抗体在猪免疫学以及猪疫病诊断中的应用。     

PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。     

规模猪场猪丹毒的诊治

近年来浙江省部分规模猪场发生急性猪丹毒,给养猪场带来巨大损失。通过对临床上疑似发病猪进行细菌分离和PCR检测、序列分析鉴定,判定为猪丹毒杆菌;同时经过药敏试验,证实头孢噻肟、头孢曲松钠、多西环素、头孢唑啉等对猪丹毒杆菌有效。     

规模猪场4大疫病的血清学检测及免疫抑制病因分析

选取杭州、绍兴、嘉兴和湖州4个地区的规模猪场为试验猪场,用正向间接血凝试验(IHA)检测猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)抗体合格率;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)抗体阳性率,分析免疫抑制状况。同时,采取临床可疑病料,用RT-PCR技术检测PRRSV、PCV2、CSFV和伪狂犬病毒(PRV)的感染率。结果显示:不同年龄猪群中,PCV2抗体阳性率都在96.0%以上,而CSFV、FMDV抗体合格率及PRRSV抗体阳性率呈现一致的变化趋势,即母猪最高,哺乳仔猪其次,培育猪和肥育猪最低;在病原检测中,PRRSV和PCV2检出率最高,分别为44.3%和60.7%。另外,双重感染和多重感染明显,特别是PRRSV+PCV2+CSFV三重感染,阳性率达7.6%。本试验结果为制定有效的免疫程序等防治措施提供科学依据。     

PRRSV浙江株ORF5基因的原核表达与免疫原性分析

根据GenBank中公布的PRRSV基因序列(EU709837),设计一对PCR引物,以浙江分离株为模板,通过RT-PCR扩增出ORF5基因全序列.以PCR技术构建了缺失信号肽及三处跨膜区的重组ORF5基因,命名为g-ORF5.将g-ORF5基因定向克隆到原核表达载体pET-28a中,转化入E.coli菌株BL21.经酶切和测序鉴定后,阳性菌株用1 mol/L IPTG诱导表达,用Ni-NTA纯化表达的重组蛋白.结果表明,重组GP5蛋白在大肠杆菌中获得表达.纯化后经ELISA和Dot-ELISA分析,表达蛋白具有免疫反应性,能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应.     

免疫胶体金技术检测猪繁殖与呼吸综合征

采用斑点胶体金技术建立一种快速、简便、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法。运用RT-PCR技术克隆出PRRSV核衣壳蛋白基因,经原核表达与蛋白纯化获得重组的核衣壳蛋白,作为诊断抗原。采用柠檬酸三钠还原法制备了直径为18~20 nm的胶体金,对兔抗猪IgG抗体进行标记后,进一步组装成斑点胶体金免疫检测试剂。经猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)阴性和阳性血清检测,斑点胶体金免疫检测试剂仅与阳性血清发生反应,特异性强,反应30~40 min内就可以在硝酸纤维膜上出现清晰的红色斑点,其灵敏度和Dot-ELISA法相仿。该检测方法可广泛应用于PRRS的临床诊断和流行病学调查,也可作为研究兽医快速诊断的技术基础。