TGF-β/Smad信号通路在Follistatin调节鸭骨骼肌卫星细胞增殖过程中的作用机制

【目的】卵泡抑素（Follistatin）能够调节骨骼肌肥大和脂肪沉积,可促进骨骼肌卫星细胞增殖。拟采用体外重组 Follistatin处理增殖期的鸭骨骼肌卫星细胞,阐明TGF-β/Smad信号通路在Follistatin调节鸭骨骼肌卫星细胞增殖过程中的作用机制。【方法】以孵化14 d的鸭胚为试验材料,采用差速贴壁的方法分离骨骼肌卫星细胞,待细胞长到70%-80%时,将培养基换成含有浓度分别为0、1、10、100 ng·mL^-1的Follistatin培养基,继续培养36 h后,采用CCK-8检测骨骼肌卫星细胞增殖情况;使用抗pax7抗体染色,DAPI染核,鉴定骨骼肌卫星细胞;采用real-time qPCR方法检测Follistatin对骨骼肌卫星细胞增殖过程中的标记基因PCNA、生肌因子基因MyoD和TGF-β信号通路中TGF-β、Smad2和Smad3的表达的影响。【结果】在倒置显微镜下观察,传代培养12 h鸭骨骼肌细胞一部分未贴壁呈圆形,一部分贴壁呈梭形。24 h后细胞全部贴壁,细胞略有变长。2 d后细胞继续增多,且呈长梭形。3 d后细胞数目增加,个别细胞融合。4 d后细胞数目进一步增加,细胞变粗,个别细胞融合。5 d后有少量细胞开始分化,细胞进一步融合。Pax7免疫荧光染色分析显示,95%以上的细胞中Pax7呈阳性表达;CCK-8检测细胞增殖分析表明,不同浓度的Follistatin处理鸭骨骼肌卫星细胞后,各处理组细胞增殖均显著高于对照组(P＜0.01),且10 ng·mL^-1 Follistatin处理鸭骨骼肌卫星细胞增殖效果最明显,为最佳处理浓度;与对照组相比,10 ng·mL^-1 Follistatin处理组的MyoD基因表达量显著下降(P＜0.05),PCNA基因表达量显著升高(P＜0.05),Myf5基因表达量显著升高,TGF-β和Smad2基因表达显著升高(P＜0.05),且Smad3基因表达量极限著升高(P＜0.01);Western blotting检测蛋白表达水平结果表明,与对照组相比,TGF-β、Smad2 和Smad3磷酸化水平也显著升高。【结论】10 ng·mL^-1 Follistatin能显著促进鸭骨骼肌卫星细胞增殖,这一过程可通过TGF-β/Smad信号通路实现。使用最佳Follistatin处理浓度能够显著促进鸭骨骼肌卫星细胞增殖,该研究为鸭骨骼肌生长发育调控机理研究奠定分子基础。     

灵昆鸡群体微卫星DNA遗传多样性研究

为阐明灵昆鸡群体遗传变异和遗传结构状况,采用23个家鸡特异性的微卫星标记对该鸡种自然群体中30个个体进行PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,检测其等位基因。结果表明,共检测到174个等位基因,23个座位都呈现出多态性,23个微卫星座位的等位基因数在3～12个,平均等位基因数为7.5个。群体平均杂合度和平均多态信息含量分别为0.758和0.723。分析结果表明灵昆鸡自然群体遗传多样性较丰富。     

太湖鸡PRL、PRLR和FSHβ基因多态与前期产蛋性状关系研究

采用PCR-SSCP法对太湖鸡催乳素(PRL)、催乳素受体(PRLR)和促卵泡激素β亚基(FSHβ)基因进行多态性检测,并分析其与开产50%后20周产蛋性状的关系。结果表明:PRL和FSHβpro2的基因型频率都是AA型最高,BB型最低,等位基因频率也是A高于B,FSHβ基因exon3位点没有多态;PRLR只有两种基因型,外显子3是AA型频率高于BB型,外显子6是CC型频率高于DD型,且等位基因A和C的频率分别高于等位基因B和D的频率。太湖鸡PRL、PRLR和FSHβ基因开产50%后20周产蛋性状的不同基因型间差异均不显著(P>0.05),但是PRLR基因外显子3的开产50%后9~11周蛋重平均数基因型间差异接近显著(P=0.08)。基因间交互作用分析发现,催乳素受体基因外显子3和外显子6有极显著的交互作用(P<0.01),产蛋量较高的合并基因型AADD可以作为太湖鸡选育的参考。     

鸽的雌雄鉴别技术

在总结前人经验的基础之上,通过对鸽胚胎和鸽的行为进行仔细观察,对鸽的雌雄鉴别方法进行了新的分类,分别从外观和体形、行为和反应及分子水平3个方面,介绍了鸽生长过程中的4个阶段(鸽胚胎、乳鸽、童鸽和成年鸽)的雌雄鉴别技术。     

东乡绿壳蛋鸡与苏垦黄鸡杂交后代的生长曲线拟合分析

利用Logistic、von Bertalanffy和Gompertz三种非线性生长模型,分别对东乡绿壳蛋鸡与本地培育的苏垦黄鸡的正反交后代以及东乡绿壳蛋鸡纯繁后代进行生长发育规律研究,并通过拟合度(R~2)和残差平方和(E)进行各生长模型的效果比较。结果表明:正反组的生长发育显著优于纯繁组,但正交组和反交组公母体重对应比较显示,组间无显著差异;3种模型均能较好地拟合3个群体的生长曲线(R~20.99),但综合考虑拟合度和E值后,提示Gompertz方程拟合效果最佳;由Gompertz生长模型得出的正反交组生长发育的拐点周龄在6.9~7.5周之间,较早于其他培育的蛋鸡品种2周,说明本研究正反交组合的体成熟和性成熟及开产日龄可能会稍早于纯种蛋鸡品种。这一结果提示,本研究的正反交组合后代可用于优质性早熟的金陵黑鸡新品种(系)培育,可进一步选育。     

家禽强制换羽的应用及生理学效应

禽类经过一段时间的产蛋后,卵巢机能衰退以及相应的激素分泌的改变,导致自然性的食欲减退,引起抱窝和休产等一些生理学效应导致自然换羽生理现象的发生,其换羽时间长达4个月之久。因自然换羽时间长,换羽先后不一,换羽期长短也不尽一致,所以恢复产蛋也有快慢,致使整个群体难以出现产蛋高峰,这对集约化饲养和管理带来很大的不便。家禽一个产蛋年结束后,以前国内一般整群淘汰,而美国30％的蛋鸡、日本40％的蛋鸡实施强制换羽。     

用PCR-SSCP方法检测猪Toll样受体4(TLR4)基因外显子3的SNP

Toll样受体(TLRs)能识别各种微生物成分并诱导免疫反应。作为TLR家族中一员的TLR4是识别革兰氏阴性菌内毒素-脂多糖(LPS)的主要受体,其多态性与动物对相关病原的免疫力有着明显的相关性。本文利用PCR-SSCP并结合PCR产物双向测序的方法,对梅山猪、新淮猪、大白猪、长白猪和杜洛克猪共203个样本TLR4基因外显子3部分片段的单核苷核多态性进行了研究。结果检测到了5个SNP,分别是T611A,G826A,G960A,G962A和C1027A,其中有4个非同义的SNP,有2个SNP的氨基酸性质发生了改变。猪TLR4的SNP出现频率在各猪种中有差异,其中T611A仅在新淮猪和大白猪中检测到,而G826A和C1027A仅分别在新淮猪和大白猪中检测到。     

雪山草鸡PRL基因的表达差异及其对繁殖性能的影响

从880只250日龄雪山草鸡中选取处于产蛋期、就巢期和恢复期的鸡各20只,屠宰采集下丘脑、垂体、输卵管和卵巢,用荧光实时定量PCR法检测其中催乳素基因mRNA的表达水平,并与繁殖性能进行相关分析,结果表明:PRL基因在4个组织中都有表达,但在垂体中的表达极显著高于其他组织(P<0.01),而且在其他3个组织之间PRL的表达差异并不显著(P>0.05);就巢期鸡PRL基因在垂体中的表达量显著高于产蛋期鸡和恢复期鸡(P<0.05),而在下丘脑、输卵管和卵巢3个组织中3组个体PRL基因的表达量差异不显著(P>0.05);PRL在垂体的表达与种鸡的繁殖性能旱负相关,相关系数为-0.328(P<0.05).     

甘草和芦丁配伍对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质以及抗氧化水平的影响

旨在研究甘草和芦丁配伍使用对产蛋后期海兰褐壳蛋鸡生产性能、蛋品质、血清激素和抗氧化水平、肠黏膜抗氧化水平的影响。选取产蛋数相近的380日龄海兰褐壳蛋鸡300只,随机分为5组,每组3个重复,每个重复20只。Ⅰ组为对照组,仅饲喂基础日粮;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组为试验组,分别在饲喂基础日粮的基础上添加甘草+芦丁(300 mg/kg+100 mg/kg、300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+100 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg)。预试期7 d,正试期42 d。结果表明,与对照组相比,在试验后3周,Ⅲ组和Ⅴ组产蛋率均显著提高(P<0.05)。Ⅴ组的平均蛋重较对照组有极显著提高(P<0.01)。各试验组的料蛋比较对照组均有极显著下降(P<0.01)。在试验第6周,Ⅲ组和Ⅴ组蛋形指数和蛋壳厚度较对照组均有极显著提高(P<0.01)。在血清激素水平方面,试验组与对照组相比,Ⅴ组血清中雌二醇(E2)和孕酮(P4)的含量均有显著增加(P<0.05);Ⅲ组和Ⅴ组血清中促卵泡素(FSH)的含量均有极显著增加(P<0.01);在抗氧化水平...     

不同来源鸡粪有机肥对西瓜-青贮玉米产量、品质的影响及效益分析

针对当前鸡粪利用率较低的问题,以施用无机复合肥为对照,比较施用3种不同来源鸡粪有机肥(自制有机肥T1、进口有机肥T2、国产有机肥T3)对一年两熟种植模式中西瓜和青贮玉米的生长、产量、品质及土壤理化性质的影响,并计算经济效益。结果表明:1)施用该3种有机肥均可显著提高西瓜叶片SPAD值,其中以T2对其营养生长的促进作用最佳,可显著提高西瓜的主蔓长及分枝数;2)T1及T3显著提高了西瓜感官品质,T2提高了西瓜中心可溶性固形物含量;3)施用该3种有机肥均可显著提高土壤碱解氮、速效磷、速效钾含量,其中T2显著降低了土壤pH;4)施用该3种有机肥均可显著提高青贮玉米株高、绿叶数及鲜草产量,提高粗蛋白、粗脂肪含量及相对饲喂价值,降低其酸性洗涤纤维及中性洗涤纤维含量;5)T1和T3可提高经济效益,其中T1提升幅度最大,达21.42%。综上,自制有机肥较其他2种商品肥更有优势可作为当地的推广用肥。