河北部分地区致犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定与耐药性及系统进化发育分析

正随着养牛业规模的不断扩大,牛场引进犊牛数量的增多,犊牛腹泻的发病率和死亡率有着明显的上升趋势。许多病原微生物均可导致犊牛腹泻,其中大肠杆菌是主要致病菌,占90%以上,大肠杆菌引起犊牛的肠道疾病,初期症状为腹泻、脱水,严重时甚至会引起死亡,牛场内一旦发生该病,将严重影响犊牛生长、发育、产能,对养牛业的发展和经济效益造成严重的损失。     

基于 ASFV EP402R 编码蛋白 CD2v 的生物信息学分析

为深入了解非洲猪瘟病毒（ASFV）的EP402R编码蛋白CD2v结构与功能的关系和病毒-宿主作用机制,本研究通过在线工具对Pig/HLJ/2018中国分离株CD2v蛋白进行了遗传进化和生物信息学分析。结果显示：Pig/HLJ/2018株与格鲁吉亚Georgia 2007、Georgia 2008以及其他中国毒株处于同一分支,基因型同为Ⅱ型;同一基因型CD2v蛋白氨基酸序列一致性高达100%,不同基因型间蛋白氨基酸序列表现出差异,氨基酸一致性在76.8%～81.7%之间;该CD2v蛋白表达的蛋白大小为41.008 89 kD;蛋白结构主要以无规卷曲为主;存在信号肽和跨膜区;存在4个优势B细胞表位和5个T细胞表位。结果表明：当前中国流行株为基因Ⅱ型;CD2v蛋白在ASFV入侵机体、免疫逃逸等过程中扮演重要角色,为ASFV的深入研究和ASF的防治奠定了基础。     

猪星状病毒4型SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立一种快速检测猪星状病毒4型(PAstV4)的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法,根据已知的猪星状病毒4型序列的ORF1a基因设计了特异性引物,并将扩增片段克隆到pMD19-T载体上;将构建的重组质粒作为标准品建立SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法,并对建立方法的灵敏性、特异性及重复性进行验证。结果显示,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法最低检测量为50.3拷贝·μL-1,其灵敏度是普通PCR的100倍;与CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、PDCoV无交叉反应,特异性较好;建立的标准曲线呈良好的线性关系,相关系数R2=1.00。应用该方法检测了2018-2019年收集的43份临床样品,阳性率为18.6%。本研究为猪星状病毒4型的临床检测建立了一种快速、灵敏、特异性强的方法。     

猪细小病毒结构蛋白VP2与猪圆环病毒多肽P21的串联表达

猪细小病毒与猪圆环病毒的混合感染较为普遍,给养猪业造成了较大的经济损失。从河北省部分地区病猪中分离猪细小病毒,通过PCR技术获得VP2蛋白的编码基因,采用PCR技术对猪圆环病毒的多肽P21基因进行扩增。分别将其连入Simple-T载体中,经酶切、PCR及序列测定法进行鉴定。测序正确后,将VP2基因与多肽P21基因插入到pET-32a(+)载体中构建原核表达载体。将此重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中,并用IPTG诱导,诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot可检测到分子量约为85 ku的目的蛋白,结果显示VP2基因与P21基因可以在大肠杆菌中获联合表达。Western-blot试验证明,该蛋白可以与猪细小病毒免疫血清以及猪圆环病毒免疫血清产生特异性结合反应,具有良好的反应原性。     

猪流行性腹泻病毒和猪丁型冠状病毒双重TaqMan qRT-PCR检测方法的建立与初步应用

为建立可同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪丁型冠状病毒(PDCoV)的双重TaqMan qRT-PCR方法,本研究根据GenBank中的PEDV M基因及PDCoV N基因设计了两对特异性引物和探针,构建重组质粒作为标准品,绘制标准曲线,建立其检测方法,结果显示,根据两种病毒质粒标准品构建的标准曲线的相关系数(R...     

含CSFV T细胞表位的猪细小病毒样颗粒的表达及小鼠免疫试验

将纯化的重组子pM-VP2-E290阳性质粒利用杆状病毒表达系统进行表达,表达产物应用SDS-PAGE、Western blot和Dot ELISA进行分析,确定所表达的蛋白分子量大小约为67kD,且具有天然蛋白的抗原特异性。应用免疫电镜对表达产物进行观察,可见到细小病毒样颗粒。病毒样颗粒在无免疫佐剂参与的情况下,免疫6～8周龄的BALB/c小鼠,同时设猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)的灭活疫苗免疫组及磷酸盐缓冲液(PBS)接种组作为参比对照,检测小鼠的细胞免疫和体液免疫学指标。结果表明,表达蛋白所形成的细小病毒样颗粒,不仅能诱导小鼠机体产生抗猪瘟病毒的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,还能刺激小鼠产生高效价的抗猪细小病毒的特异性抗体,而且机体所产生的抗体效价显著高于灭活疫苗对照组。     

鹅细小病毒河北株HBZF07 VP2基因的克隆与遗传变异分析

采用PCR技术,对鹅细小病毒（GPV）河北分离株HBZF07的VP2基因进行了克隆与测序,并与Gen-Bank中收录的GPV DY株、B株、HG5/82株和GD株进行了核苷酸同源性比较,绘制了基因进化树。结果表明：河北分离株HBZF07的VP2基因长1 772 bp,包含完整的VP2开放阅读框（1 764 bp）,编码587个氨基酸。与GenBank中其他毒株的VP2基因核苷酸序列相比,与DY（EF515837）的同源性为90.8%,与B（GPU25749）的同源性为96.5%,与HG5/82（AY506547）的同源性为95.4%,与GD（AY512830）的同源性为95.4%。说明该毒株与其他参考毒株的亲缘关系较为密切,同时亦表明GPV的VP2基因是高度保守的。研究结果可为其他学者研究GPV VP2基因相关特性提供科学依据。     

“兽医微生物学”案例教学法应用研究

为了改善教学质量,探索激发学生学习兴趣、提高学生学习积极性和主动性的"兽医微生物学"教学方法,在教学过程中,根据"兽医微生物学"课程体系的特点、学时与进程的安排,将动物医学专业学生分为实验班和对照班。对实验班实施案例教学法,对照班采用传统教学法。通过问卷调查、期末综合题得分、学生毕业后工作单位满意度调查等方面的统计,对实施的案例教学方法进行效果评价。结果显示,实验班学生的学习兴趣、解决问题能力、积极性与主动性、期末综合题得分统计、学生毕业后工作单位满意度均高于对照班学生,差异显著,教学效果得到了明显提高。     

牛病毒性腹泻/黏膜病病毒河北分离株的生物学特性

【目的】了解牛病毒性腹泻病毒河北分离株HB株的特性,阐明牛病毒性腹泻/黏膜病致病机理,更好的控制BVDV感染、流行提供理论依据特进行此项试验;【方法】用理化学及生物学方法对BVDV河北分离毒株HB的特性进行检测,与BVDV准毒株OregonC24V株进行比较,分析了其理化性及生物学特性。电镜负染检查可见直径为40￣60nm有突起的圆形或近圆形的病毒颗粒,病毒在蔗糖中的浮密度为1.13￣1.14g/cm3。与牛病毒性腹泻-粘膜病病毒颗粒相似。毒力测定TCID50为10-4.5。理化学研究表明,该病毒对氯仿、乙醚、胰酶敏感;不耐酸、对碱具有较强的耐受性。牛病毒性腹泻/黏膜病病毒对56℃30min较敏感,56℃70min可使其完全灭活。血凝试验表明,该病毒对鸡、兔、猪和绵羊的红细胞均无血凝性;5-碘脱氧尿核苷(5,-IUDR)不能抑制病毒的增殖,核酸分型试验表明该病毒株基因组为RNA;病毒纯化后经SDS—PAGE电泳出现了5条主要结构蛋白带,与BVDV国际标准毒株OregonC24V株结果一致;【结论】河北分离株HB株为牛病毒性腹泻病毒。