副猪嗜血杆菌感染猪的临床症状及病理学观察

在猪的饲养过程中,发现部分哺乳仔猪和保育阶段的小猪持续出现主要以多发性浆膜炎和关节炎以及高死亡率为特征的传染病。经过对病猪进行临床剖检、细菌分离培养、生化实验和PCR方法的检测,确定该传染病主要是由副猪嗜血杆菌所引起。     

规模化猪场生物安全措施调查与分析

<正>1引言近年来,我国生猪养殖模式发生了巨大变化,由农户散养模式正逐步向规模化养殖模式转变,养殖模式的转变给养殖场带来经济利益的同时,也带来了巨大的生物安全隐患。生物安全是近年来提出的有关集约化生产过程中保护和提高畜禽健康的系统化管理实践,是预防病原体和传染因子进入猪群生产的每一阶段采取的规定与措施。陆续发生的非洲猪瘟疫情凸显了生猪养殖过程中生物安全风险管理的重要性和必要性,尤其是在目前非洲猪瘟无苗可防、无药可治的大环境下,     

重组犬IFN-γ在大肠杆菌中的高效表达

提取Concavadin A诱导培养的犬脾细胞总RNA，经RT-PCR扩增出犬IFN-γ，克隆到pMD18-T载体并测序鉴定，然后把IFN-γ基因克隆到原核表达载体PJLA605，构建pRL-Ca／IFN-γ表达质粒；应用M9培养基通过摇瓶发酵，确定诱导时机和诱导表达时间。结果表明，工程菌pRL-CaIFN-γ在30℃培养至OD600为1．5于42℃诱导4h，菌体收获量湿重达20．0gm，目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的32％，外源基因在该基因工程菌中得到了高效表达。     

2019年石家庄市栾城区奶牛“两病”监测分析

正布鲁氏菌病和结核病(以下简称"两病")是危害奶牛健康的主要传染病之一,已被世界卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病,在我国被列为二类动物疫病,并且一直受到密切关注。布病的主要传播途径有消化道、呼吸道、皮肤黏膜以及生殖系统传播,其受侵害最为严重的是生殖系统,严重影响生殖功能。不仅给养殖业造成巨大的经济损失,也危害人类的健康。牛结核病在我国《动物防疫法》中被列为二类动物疫病,开放性结核病牛是传染源的主要组成部分,呼吸道和消化道为主要传播途径,由于我国奶牛养殖产业的进一步扩大且散养较多,导致我国奶牛跨区域交易日益频繁,不能得到有效地控制,致使我     

河北省猪繁殖与呼吸综合征血清学调查

应用ELISA试剂盒对2008年9月至2009年3月河北省不同地区规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的流行情况进行了血清学调查。共检测血清1 663份,检出阳性血清882份,阳性率53.04%。其中非免疫猪场861份血清,阳性血清289份,阳性率33.57%;免疫PRRSV疫苗的猪场血清802份,阳性血清593份,阳性率73.94%。非免疫猪场母猪阳性率为45.81%,仔猪为33.86%。提示河北省存在猪繁殖与呼吸综合征,应采取多种措施积极防制。     

猪流行性腹泻病毒中国地方流行株LJ/B03 M基因的克隆与序列分析

从黑龙江某猪场疑似猪流行性腹泻猪的粪便中提取总RNA，采用RT—RCR方法扩增，首次获得中国地方流行株PEDVM全基因序列，将其克隆到pMD18-T载体中进行测序，克隆的M基因核苷酸序列由681个核苷酸组成，含有一个完整的开放阅读框架，编码226个氨基酸。与国外已发表的其他毒株进行基因进化分析，GenBank中的6PEDV形成的基因进化树具有3个分支。其中分离株LJB／03形成一个独立的分支，说明LJB／03的M基因序列与其他毒株相比，发生了一定的变异。     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体(MAb),本试验将Vero细胞中增殖的PEDV超速离心纯化,作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术和PEDV重组S蛋白为基础的间接ELISA方法,制备并筛选能稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞;分别采用间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验,对单克隆抗体的亚型、特异性等生物学特性进行鉴定。结果表明,本试验成功获得了1株稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞株5C3。MAb亚类鉴定为IgM,轻链为k型。杂交瘤细胞连续传至20代,细胞培养上清液和小鼠腹水抗体效价分别稳定在1∶600和1∶10 000。特异性试验结果显示,MAb不与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病毒(PrV)、猪圆环病毒(PCV2)发生交叉反应。western-blot结果显示,MAb能特异性识别PEDV的重组S蛋白。IFA试验结果表明,MAb能与PEDV感染的vero细胞产生特异性荧光。说明本试验获得的MAb能特异性识别重组及天然的PEDV S蛋白,具有良好的抗原性和特异性。     

A型塞内卡病毒VP2蛋白抗原区的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立高效的A型塞内卡病毒(SVA)的血清学检测方法,本研究经PCR扩增SVA VP2基因的优势抗原区域(VP2-1基因)后构建重组质粒p ET-32a-VP2-1,将其转化大肠杆菌感受态细胞并经IPTG诱导表达重组VP2蛋白(rVP2),表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定,结果显示,在42 ku处出现特异性条带,表明r VP2可以与SVA阳性血清特异性反应。以r VP2为包被抗原,经反应条件的优化,建立了基于SVA VP2抗原区的间接ELISA抗体检测方法。本研究建立的间接ELISA检测方法的最适抗原包被浓度为2μg/mL,5%脱脂乳的PBST作为封闭液37℃孵育1 h,待检血清的最适稀释度为1∶500,兔抗猪Ig G-HRP稀释度为1∶10 000,最佳显色时间为10 min。当检测样品的S/P值<0.201时,样品检测结果为阴性;当检测样品的S/P值≥0.201时,结果为阳性。利用该方法检测SVA,猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)等阳性血清,结果显示,除SVA检测为...     

河北部分地区猪圆环病毒2型分离鉴定及遗传变异分析

为了解河北省猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)基因型感染及遗传变异情况,对采自河北省6个不同地区的32份疑似PCV2感染的组织通过PCR进行初步鉴定,并将鉴定为阳性的组织通过接种PK-15细胞分离病毒,通过PCR、间接免疫荧光、透射电镜对分离的病毒进行鉴定,利用特异性引物对PCV2进行PCR全基因序列扩增,测序后进行全基因及ORF2基因核苷酸序列分析。结果显示,32份疑似样品中有13份PCV2阳性组织,阳性率为40.65%。对其中1份仅感染PCV2的样品进行病毒的细胞分离及后续鉴定,得到1株可稳定感染和增殖的PCV2毒株。将初步筛选的阳性组织进行PCV2全基因扩增并测序,得到8株PCV2全基因序列,基因组全长均为1 768 bp; 8株PCV2全基因同源性比对结果为95%～99.8%,ORF2同源性比对结果为94%～100%;遗传进化分析显示,8个分离株归属于3个基因亚型(PCV2a、PCV2b和PCV2d),同源性氨基酸序列分析显示主要变异区在47～63 aa抗原表位区。本试验结果为进一步研究该地区PCV2分子流行病学及相关疾病的免疫防控奠...