猪冠状病毒通用荧光定量PCR检测方法的建立

已知感染猪群的冠状病毒有猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV);本研究拟建立针对这6种病毒的通用荧光定量PCR检测方法。依据NCBI公布的这6种猪冠状病毒序列，利用MEGA软件进行全基因序列比对，通过分析在ORF1b中找到1段长为196 bp的保守序列，设计兼并引物，建立了用于检测猪冠状病毒的通用荧光定量PCR检测方法；结果显示，该检测方法能扩增出6种猪冠状病毒，对PDCoV、PRCV、PHEV、SADS-CoV、TGEV的灵敏性均可达到10¹拷贝/μL,对PEDV的灵敏性可达到10⁰拷贝/μL;与CSFV、PRRSV、PPV、PCV、PRV无交叉反应，特异性良好；组内和组间变异系数均小于2.2%,重复性良好。利用建立的检测方法对62份病料进行检测，检测出27份样品呈现猪冠状病毒阳性，而利用普通RT-PCR方法共检测出24份阳性样品。选择2份猪冠状病毒阳性样品进行克隆测序，在NCB...     

不同前处理方法测定调味乳中甜蜜素含量的比较

探讨了《GB 5009.97—2016 食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定》气相色谱法中两种前处理方法对测定能力验证样品——调味乳中甜蜜素含量的差异性。结果表明：在甜蜜素含量较低的调味乳中,添加或不添加蛋白质沉淀剂最终测定的甜蜜素含量相当;在甜蜜素含量较高的调味乳中,不添加蛋白质沉淀剂直接衍生化的处理方法测定得到的甜蜜素含量值较添加蛋白质沉淀剂测定值更加接近特征值。通过添加回收率试验考察,验证了不添加沉淀剂的处理方法的准确性,为调味乳中甜蜜素含量准确及快速测定提供参考。