基因2型牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立和初步应用

根据已发表的牛病毒性腹泻病毒基因1型(BVDV-1)和2型(BVDV-2)5非编码区(5-UTR)的序列,分别设计了针对BVDV-1型、BVDV-2型以及针对BVDV-1和BVDV-2两型的特异性引物和通用引物,以标准参考株BVDV-1 NADL株和BVDV-2890 株为对照,建立了分别能检测BVDV-1、BVDV-2和BVDV-1/BVDV-2的RT-PCR 检测方法.在此基础上,进一步对疑似BVDV-2感染牛的临床病料组织(脾、淋巴结、心肌、血液等)检测结果表明,在所检测的18份样品中,BVDV-2阳性8份(44%).经RT-PCR鉴定为阳性的组织病料,进一步通过MDBK 细胞进行病毒分离,病毒分离率为100%;结合感染细胞病变观察,间接免疫荧光试验RT-PCR和序列测定鉴定,所分离的病毒均为BVDV-2.上述研究表明,该RT-PCR检测方法敏感、特异;并证实我国牛群已存在BVDV-2的污染或感染.     

规模化羊场支原体感染的流行病学调查

试验通过血清学、PCR检测及病理剖检等方法对新疆南疆5个规模化羊场进行绵羊肺炎支原体感染和流行调查.血清学调查结果显示,5个规模化羊场绵羊肺炎支原体的感染率为52.07％.PCR检测结果显示,阳性率为30％.流行病学调查结果表明,5个规模化羊场绵羊均存在不同程度的肺炎支原体感染,其中沙雅县的感染最为严重.     

致猪腹泻的冠状病毒病的研究进展

冠状病毒在自然界广泛存在,其宿主多样,可引起鸡、火鸡、猪、牛、犬等动物传染病.冠状病毒传染性较强、高发病率,严重制约畜牧业的发展,威胁人类健康.文章对猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪急性下痢症候群冠状病毒病的病原、流行病学特征、临床病理变化、诊断及预防进行综述,进一步认识致猪腹泻的冠状病毒病的危害,为猪冠状病毒病的预防...     

山羊痘病毒疫苗株γ-IFNR基因的克隆与序列分析

为了获得羊痘病毒γ干扰素受体(interferon-γ receptor,γ-IFNR)基因,用绵羊睾丸细胞培养山羊痘病毒疫苗株G14-STV44-55,提取其基因组为模板,设计γ-IFNR基因特异性引物并进行PCR扩增,将其产物克隆至pGEM-T Easy载体,并进行了测序和序列分析.电泳结果显示,扩增出了2 600...     

山羊痘病毒毒力因子KLP1的表达及多克隆抗体的制备

为了研究羊痘病毒KLP1的特性及制备其抗体,研究通过PCR扩增了山羊痘病毒毒力因子KLP1的两个结构域KLP1-1、KLP1-2,并构建了重组表达载体pET42b-KLP1-1和pET42b-KLP1-2,将重组载体转化到大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,表达产物应用SDS-PAGE和Western-blot检测,表达蛋白经镍柱纯化或KCl染色切胶纯化,经弗氏佐剂乳化后免疫家兔,制备的抗体用Western-blot和ELISA检测评价。结果表明:克隆得到的KLP1-1基因的大小为762 bp,表达约为30 ku的蛋白,主要在上清液中表达,镍柱纯化蛋白浓度为3 mg/mL;KLP1-2的基因大小为927 bp,表达约为35 ku的蛋白,以包涵体形式表达在沉淀中,切胶纯化的蛋白浓度在1~2 mg/mL之间。免疫家兔后收集血清,经Western-blot检测可见明显的特异条带,ELISA检测的抗体效价分别为1∶512和1∶256。     

球虫感染后兔圆小囊病理组织学变化

为研究圆小囊在家兔球虫感染后的病理变化,试验收集自然感染病例的圆小囊,按HE染色石蜡切片方法制作病理组织切片,观察自然感染球虫后家兔圆小囊的组织病理学变化,并与正常圆小囊组织进行比较。结果表明,球虫感染病例的圆小囊集合淋巴小结生发中心反应活跃,粘膜杯状细胞和固有层散在淋巴细胞明显增多,淋巴小结周边及中心多见吞噬细胞成团聚集,或形成大的多核巨细胞,而集合淋巴小结结构基本完整.该研究结果说明圆小囊的局部免疫机制可能在机体抗球虫免疫中起着重要作用。     

山羊痘病毒南疆株P32基因的原核表达及其结构分析

为了研究新疆南疆分离的山羊痘病毒P32基因的特征,试验通过PCR扩增得到P32基因及其膜外区P32_(1～282)基因和膜外亲水区P32_(20～270)基因,分别构建了表达载体(pET42b-P32、pET42b-P32_(1～282)和pET28a-P32_(20～270))并进行了原核表达,对其核苷酸序列的同源性、遗传进化关系及推测的氨基酸序列、蛋白质二级结构进行了预测分析。结果表明:山羊痘病毒南疆株P32基因发生了较大突变,相对对照在第100～105位增加了6个核苷酸,编码K、N两个氨基酸,全长达到975 bp,编码324个氨基酸,与Gansu 2009株相似。跨膜分析显示P32蛋白膜外区为1～282位氨基酸,跨膜区为283～305位氨基酸,膜内区为306～324位氨基酸。二级结构分析发现其分子两端呈明显的疏水结构,抗原性较弱,而中间区域有较强的亲水性和较强的抗原性。蛋白质表达发现其全长在大肠杆菌中几乎没有表达,其膜外区可以表达,但表达量较低,难以纯化。说明山羊痘病毒P32蛋白是一个典型的膜蛋白,全长较难表达纯化,南疆株P32蛋白也具有这样的特性。     

塔里木河上、中游卡拉库尔羊放牧系统中铜、锌的测定

为了解塔里木河上、中游放牧羊群中卡拉库尔羊体内铜（Cu）、锌（Zn）的营养水平及相互关系,通过原子吸收光谱法对塔里木河上、中游4个盐渍化河滩草场的土壤、饲草、羊血清中的Cu、Zn进行测定.结果显示：塔里木河上、中游为缺Cu、缺Zn地区.该地区生长的饲草缺Cu.成年母羊血Cu低于正常水平,但未出现典型Cu缺乏症,而羔羊发生了Cu缺乏症,有的羊群发病率高达70%.母羊血中Cu、Zn存在负相关性.     

奶牛亚硝酸盐中毒的诊治

2003年11月下旬,正值新疆南疆地区收冬菜时节,部分养殖户将冬白菜叶、莲花白叶饲喂牛,引发多起奶牛亚硝酸盐中毒,轻者出现前胃驰缓,严重者出现死亡。笔者诊治了3起奶牛亚硝酸盐中毒的病例。现报道如下,供参考。     

新疆南疆地区奶牛乳房链球菌gapC基因原核表达载体的构建

为获得乳房链球菌(Streptococcus uberis)gapC基因的原核表达载体,通过PCR方法扩增出新疆南疆地区奶牛乳房链球菌临床分离株的gapC基因,并克隆到原核表达载体pET32a(+)中,构建了重组质粒pET32a(+)-gapC,将重组质粒转化宿主菌E.coli BL21进行重组蛋白的表达。实验结果表明,IPTG诱导5～9 h均可获得大量重组蛋白。重组蛋白分子量约为54.0 kD,介于43 kD～66.2 kD之间,与预期大小一致,说明表达载体构建成功。通过优化最佳诱导条件,获得乳房链球菌gapC基因重组蛋白的最佳诱导条件为0.5 mmol/L IPTG诱导6 h即可获得大量重组蛋白,为进一步确定蛋白的免疫保护性和制备疫苗奠定了基础。