番茄细菌性叶斑病菌RPA检测技术研究

青枯菌为应对逆境胁迫,可进入活的但非可培养状态(viable but non-eulturable,VBNC).本文利用叠氮溴化丙锭(PMA)与PCR技术相结合,建立了一种快速有效区分青枯菌死活细胞的分子检测方法.基于hrcS基因序列,设计了一对青枯菌种特异性检测引物hrcSf/hrcSr;利用PMA对青枯菌Po82菌株的细胞悬浮液样品进行预处理,随后进行常规PCR扩增.结果表明,当样品中PMA质量浓度为3 μg/mL、曝光时间大于5 min时,PMA可有效抑制死亡菌体细胞中的DNA扩增;且对可培养和VBNC状态细胞中的DNA扩增没有影响;本试验建立的PMA-PCR方法能有效对包括VBNC状态在内的青枯菌活菌进行检测,避免了假阳性与假阴性结果的产生.     

大豆种传南方菜豆花叶病毒和烟草环斑病毒的GICA-RT-PCR检测

南方菜豆花叶病毒(south bean mosaic virus,SBMV)和烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,TRSV)是我国重要的进境检疫性有害生物,两种病毒均为种传病毒,可随大豆种子实现远距离传播.本研究以这两种病毒的大豆病种子为试材,先用胶体金免疫层析试纸条(GICA)检测,将检测完病毒后的胶体金免疫层析试纸条上的T线和C线剪下,再用RT-PCR的方法将T线和C线上捕获的病毒直接进行扩增,这种将血清学与分子生物学相结合起来所建立的GICA-RT-PCR检测方法,省去了烦琐的总RNA提取的环节,简化了病毒检测的步骤,提高了检测的灵敏度.     

北京怀柔地区樱桃上发现李属坏死环斑病毒

 李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)属雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)等轴不稳环斑病毒属(Ilarvirus),是我国二类检疫性有害生物。PNRSV主要危害李属和蔷薇属植物。如,樱桃、桃、李、月季等。春季感染PNRSV的樱桃早期幼叶会出现深棕色坏死斑和线纹,叶片展开期坏死斑脱落造成穿孔症状。受PNRSV危害后,果树树势减弱,产量降低,甚至死树。我国学者调查陕西、辽宁和山东等省的果树病害时发现并报道了该病毒^[1~3]。     

菜豆荚斑驳病毒RT-PCR扩增产物胶体金层析检测方法的建立

菜豆荚斑驳病毒是我国进境植物检疫性有害生物,为了能在现场快速检测出该病毒,将PCR核酸扩增的高灵敏度和胶体金层析方法快速简便、直观的优点结合起来,建立了PCR扩增产物的胶体金层析检测方法.该方法是用生物素标记上一个引物,用荧光素(或地高辛)标记上另一个引物,通过PCR扩增产生双标记的扩增产物.将兔抗生物素多克隆抗体与20～30 nm大小的胶体金颗粒结合上并固定在释放垫上,同时在硝酸纤维素层析膜上点上抗荧光素(或地高辛)的单克隆抗体作为T检测点,点上羊抗兔多克隆抗体作为C质控点.这种RT-PCR扩增产物可在T点上被检测到,同时C点也要显色.用所建立方法在15 min内可检测出菜豆荚斑驳病毒的RT-PCR扩增产物,免去了溴化乙锭染色和电泳的过程.     

藜草花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与RT-PCR检测

 The nucleotide sequence of coat protein (cp)gene of Sowbane mosaic virus (SoMV)was determined. The cp gene of SoMV consists of 726 nucleotides and encodes a putative protein of 241 amino acid re-sidues. Sequence comparison showed that SoMV was most closely related to Rubus chlorotic mottle virus compared to other sobemoviruses. A primer pair was designed for the detection of SoMV based upon the determined cp nucleotide sequence. An expected fragment with 510 bp could be obtained from SoMV, while no specific band was observed from the healthy control. The result showed that the RT-PCR assay with the primer pair was suitable for the specific detection of SoMV.     

黄瓜绿斑驳花叶病毒低风险参照物质的研制

采用RT-PCR方法扩增黄瓜绿斑驳花叶病毒的外壳蛋白基因与3,非编码区,并将其构建到马铃薯X病毒(PVX)载体中.重组质粒经线性化及体外转录后接种烟草,获得含有病毒外壳蛋白基因的感病植株.感病组织可用于分子检测的质控,也可作为毒源来繁殖阳性参照物质.基于PVX载体制备的参照物质可降低检疫性病毒的生物安全风险,尤其对稳定性强、可造成严重经济损失的高风险病毒的检疫更具实用价值.     

烟草环斑病毒、马铃薯X病毒碱性磷酸酶酶联诊断试剂盒的研制简报

利用血清学技术开发的酶联诊断试剂盒 ,由于快速灵敏 ,操作简便 ,可进行大量样品的检测 ,比较好地满足了生产上需要 ,具有广阔的应用前景。由于国内尚没有成熟的植物病毒诊断试剂盒供应者 ,缺乏可靠的产品 ,因而限制了植物病毒诊断在国内的应用和发展。一旦需要时 ,主要是依赖国外进口 ,由于价格昂贵 ,采购不便 ,不能及时供应 ,在国内推广尚有一定的困难。另外 ,国外有些试剂盒在技术上有一定的缺陷 ,造成一些假阳性反应的出现 ,其中在阳性对照和阴性对照处理上不很成熟 ,对于危险性病毒的阳性对照处理不当 ,还易造成危险性病毒的扩散 ,而阴…     

高温胁迫下不同皮色西瓜耐热性评价研究

[目的]研究高温胁迫条件下不同皮色西瓜耐热性,为耐热西瓜品种育种提供理论依据.[方法]采用大田试验,设闷棚和普通大棚（对照）两种处理,测定不同皮色西瓜相关生理和品质指标,采用隶属函数方法对其耐热性进行综合评价.[结果]与对照处理相比,闷棚处理不同西瓜品种的叶绿素总含量、MDA、脯氨酸含量均出现不同程度下降;POD活性均出现不同程度上升,SOD活性均出现不同程度下降,而CAT活性既有上升、又有下降;果实单瓜重、硬度、可溶性固形物含量、Vc和可溶性蛋白含量均出现不同程度下降.不同西瓜品种隶属函数平均值由大到小依次为R2、R3、R1、R11和R6.[结论]明花皮色的西瓜耐热性最好,暗花和墨绿色皮色的西瓜耐热性次之,黄皮和绿皮西瓜耐热性较差.     

设施中果型优质无籽西瓜新品种桂系5号的选育

[目的]选育适合设施栽培西瓜新品种,丰富广西优质无籽西瓜品种类型,为广西西瓜产业高质量发展提供品种支持.[方法]2013年春季以四倍体西瓜MT410n-1作母本、HLL40-3作父本,配组选育三倍体无籽西瓜一代杂交种桂系5号,2014年开始连续在南宁市武鸣区试验基地进行多茬新组合栽培观察及综合鉴定评价,2016—2019年同步进行多点、多造大棚设施环境栽培的品种比较试验、区域试验和生产示范试验.[结果]桂系5号为中果型三倍体无籽西瓜新品种,果实发育期27~35 d,全生育期春茬85~110 d,夏秋茬65~85 d,生长势强,抗病抗逆性强,不易早衰,极易坐果;果实高圆形,果皮绿色覆盖墨绿条带,果面光滑有光泽,皮厚0.8~1.0 cm,皮坚韧且硬,抗裂性好、耐贮运,商品率高;果肉大红色,剖面均匀,白秕子少,无籽性状好;肉质脆甜多汁,口感好,中心可溶性固形物含量11.0%~12.5%,果实品质优良.品种比较试验平均单瓜重2.54 kg,平均产量57103.5 kg/ha,比对照(蜜童,下同)增产22.5%;区域试验平均单瓜重2.49 kg,平均产量56137.5 kg/ha,比对照增产20.7%;生产示范试验平均单瓜重2.40~2.60 kg,平均产量43564.5~53023.5 kg/ha,比对照增产15.7%~23.9%.2019年9月通过国家非主要农作物品种登记.[结论]无籽西瓜新品种桂系5号适宜大棚设施栽培,可作精品西瓜生产,种植西瓜的地区均可推广种植.