甘薯病毒病害(SPVD)的多重RT-PCR检测方法及其应用

根据甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)热激蛋白(Hsp70)基因和甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)外壳蛋白(CP)基因核苷酸序列的保守区域设计了4对引物,以单-RT-PCR反应体系为基础,分别对影响多重RT-PCR扩增的退火温度、Taq DNA聚合酶浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、引物浓度等条件进行了优化,建立了能同时检测SPVD两种病原的多重RT-PCR方法.该方法能有效区分SPFMV的主要株系类型.灵敏性试验表明,建立的多重RT-PCR方法对SPFMV-CH2、SPFMV-CH和SPCSV的最低检测浓度分别为1.42×104、1.32×104拷贝/μL和2.47×104拷贝/μL.该方法可用于甘薯叶片和薯块中病毒的检测,为SPVD的监测预警提供了一个有用的工具.     

PVP对烟草基因组DNA提取的影响

为克服烟叶组织中蛋白质、糖类、色素、烟碱及酚类等物质对烟草基因组DNA提取的干扰,防止DNA产生褐变,获得质量高且适于SRAP-PCR反应需要的DNA,采用改良CTAB法探讨了在提取液中添加不同浓度PVP对烟草基因组DNA提取质量的影响.结果表明:在1%、2%、4%PVP浓度下提取烟草DNA样品的OD260/OD280值均在1.7～1.9之间,OD260/OD280值随着提取液中PVP浓度的提高而增大,DNA褐化程度明显降低,获得的DNA能满足SRAP分析要求.     

地黄叶片遗传转化再生系统的建立

以地黄85-5无菌苗为材料,对叶片再生系统及其对卡那霉素和羧苄西林钠的天然耐性进行了初步研究。结果表明:MS 6 BA 2.0mg/L NAA 0.05mg/L是叶片再生的最适培养基;在地黄遗传转化中,卡那霉素的筛选压和羧苄西林钠的抑菌浓度分别以20mg/L和400mg/L为宜。     

甘薯脉花叶病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其抗血清的制备

 根据已报道的甘薯脉花叶病毒(Sweet potato vein mosaic virus,SPVMV)外壳蛋白（CP）基因的核苷酸序列合成引物,利用RT-PCR方法克隆了SPVMV河南分离物（SPVMV-HN）基因组3′端1.8 kb的基因片段,包括部分NIb 基因序列和完整的CP基因及3′端非编码区序列(3′UTR)。序列分析表明,SPVMV-HN的CP基因由996个核苷酸组成（GenBank登录号为FJ687211）,编码332个氨基酸残基。与已发表的SPVMV其他分离物相比,其推导的氨基酸序列一致性为95.2%～98.5%,与 SPVMV广东分离物的氨基酸序列一致性为97.9%。将CP基因克隆到原核表达载体pET-28a（+）上,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CP基因在大肠杆菌BL21(DE3) pLysS中得到了高效表达。以表达的蛋白为抗原,免疫家兔,制备了SPVMV外壳蛋白的特异性抗血清。ACP-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间甘薯样品的检测。利用SPVMV的抗血清,对采自全国14个省（市）的田间甘薯样品以及嫁接的巴西牵牛样品进行了检测,结果表明,SPVMV在我国甘薯上普遍存在。     

DDT和多菌灵对小麦种子生活力以及小麦生长的影响

小麦的质量日益受到重视 ,而土壤污染物对小麦的安全生产构成威胁。DDT是土壤中典型的持久性污染物 ,虽然我国于 2 0世纪 80年代初已禁止生产和在农业上使用 ,但由于DDT在土壤中的残效期较长 ,目前 ,土壤中仍存在着不同程度的DDT污染[1] 。当人体存在低剂量的DDT时 ,容易使人的内分泌紊乱[2 ] ,人体健康受到威胁。多菌灵是一种生产上常用的杀菌剂 ,长期大量施用也易在土壤中积累。我们通过水培法和盆栽法研究了DDT和多菌灵对小麦种子生活力和小麦植株生长的影响 ,现将有关研究结果报道如下。1　材料和方法1.1　材料供试农药为 2 0 %D…     

不同时期嫁接感染甘薯病毒病害SPVD对甘薯产量的影响

以苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、棉花枯萎病菌、柑橘炭疽病菌与白菜黑斑病菌为供试菌,采用生长速率法测定25种中药材甲醇粗提物的抑菌活性。结果表明,在浓度为5．0 mg／mL 时,大部分中药材的甲醇粗提物对至少一种植物病原真菌都表现出不同程度的抑制活性,其中知母、青蒿、细辛与白鲜皮对3种供试植物病原菌的抑制率大于75％,而茜草与姜黄对4种供试植物病原菌的抑制率均在80％以上,具有广泛的抑菌谱。进一步采用系统溶剂法得到的茜草不同溶剂萃取物中,水饱和正丁醇相抑菌活性明显优于石油醚及乙酸乙酯相,表明茜草抑菌活性成分主要为中等及大极性化合物。     

烟粉虱中甘薯褪绿矮化病毒（SPCSV）的快速检测技术

建立了利用NCM-ELISA、RT-PCR和半巢式RT-PCR检测烟粉虱中SPCSV的方法,比较了3种检测方法的灵敏性。结果表明,NCM-ELISA最低能从16头带毒烟粉虱中检测出SPCSV;RT-PCR能稳定地从3头以上带毒烟粉虱中检测出SPCSV;半巢式RT-PCR能稳定地从单头烟粉虱中检测出SPCSV。检测灵敏性研究表明,用体外转录的RNA作为核酸模板,RT-PCR可检测的最低浓度为5.69×104拷贝/μL,半巢式RT-PCR为5.69×101拷贝/μL,说明半巢式RT-PCR检测方法的灵敏性比RT-PCR高1 000倍。     

河南省植物病毒病发生情况及防治建议

植物病毒病是一类非常严重的病害 ,号称植物的“癌症” ,近年来发生面积有不断扩大的趋势。为了了解河南省重要农作物病毒病的发生和危害情况 ,河南省植物病理学会组织河南农业大学、河南省农科院、河南省植保植检站、郑州市植保植检站以及一些县 (市 )植保植检站的有关专家 ,对我省主要农作物病毒病的发生和危害情况进行了调查 ,现将有关调查结果汇报如下。1　河南省植物病毒病的发生和危害情况1 .1　蔬菜病毒病近年来蔬菜病毒病大流行频率增加 ,受害蔬菜种类增多 ,损失严重。调查发现 ,我省蔬菜病毒病的发生非常严重 ,全省发生面积已超过 …     

草莓花药培养脱毒技术研究

1999～ 2 0 0 1年 ,研究了草莓花药培养脱毒技术。利用花药培养技术获得了“日本 1号”和“星都 2号”两草莓品种的脱毒苗 ,两品种花药培养的最佳培养基分别为MS 6 -BA 3 0mg L IAA 1 0mg L和MS 6 -BA 1 0mg L IAA 1 0mg L。田间对比试验表明 ,脱毒苗的生长势明显增强 ,产量增加 ,“日本 1号”和“星都 2号”两品种的脱毒苗产量分别比对照提高 30 3%和34 3%。     

转基因抗病毒烟草的田间抗病性试验

烟草花叶病是烟草的重要病害之一，利用黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）和烟草花叶病毒（ＴＭＶ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因培育抗病转基因烟草已获得成功，并已在生产上应用，而利用病毒编码的运动蛋白（ＭＰ）基因，构建转基因植物，则是一种新的抗病毒策略。我们与中国农业大学等...