钙螯合羊骨胶原多肽抑制骨质疏松发生的RANK/RANKL/OPG信号机制

OPG/RANKL/RANK信号通路在破骨细胞形成过程中起着至关重要的作用,本研究将探讨钙螯合羊骨胶原多肽(SBCP-Ca)对骨质疏松(OP)发生的抑制作用及其基于OPG/RANKL/RANK信号通路的作用机制。通过摘除大鼠双侧卵巢建立OP模型,SBCP-Ca(100mg·mL~(-1))的灌胃剂量为10mL·(kg·d)~(-1),持续8周。试验期结束后,股骨远端干骺端扫描电镜观察结果表明OP造模成功。模型组大鼠血液中反映骨形成和吸收的PINP和β-CTx水平均极显著高于假手术组(P0.01),股骨中的钙含量和羟脯氨酸含量则极显著低于假手术组(P0.01)。SBCP-Ca组的血清PINP、β-CTx水平则与假手术组无显著差异(P0.05),股骨中的钙含量和羟脯氨酸含量极显著高于模型组(P0.01)。荧光定量PCR结果表明模型组股骨组织中RANK和RANKL相对转录水平均极显著高于假手术组(P0.01),骨质疏松对OPG的表达没有显著影响。SBCP-Ca组的RANK和RANKL极显著低于模型组(P0.01),OPG水平则极显著高于模型组和假手术组(P0.01)。以上结果表明:SBCP-Ca可有效抑制OP的发生,通过抑制RANK和RANKL表达,促进OPG表达的三重作用来抑制破骨细胞的形成和骨吸收活性。     

鸡毒害艾美尔球虫早熟株的免疫原性研究

为制备早熟弱毒疫苗提供虫株和理论依据,对选育的毒害艾美尔球虫早熟株(P8)和亲本株(P0)的免疫原性进行了研究。试验分别用P0和P8,以每只鸡300个孢子化卵囊免疫7日龄雏鸡,免疫后14 d,分别以每只鸡1×104和10×104个P0孢子化的卵囊进行攻毒,以OPG、平均每只鸡的卵囊产量,卵囊减少率、相对增重率、病变记分减少率为指标。结果表明:(1)攻毒后每只1×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组的卵囊减少率分别为75.59%、84.66%;(2)攻毒后每只10×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组病变记分降低率分别为81.46%、76.66%。表明P8株的免疫原性与P0无明显变化,均有保护力,符合早熟株免疫原性保持不变的特点。     

柔嫩艾美耳球虫的分离鉴定与致病性测定

本实验采用单卵囊分离技术分离纯化球虫,并根据其临床病理变化、潜隐期、最短孢子化时间等指标综合判定其为柔嫩艾美耳球虫。用纯化所得球虫卵囊进行致病性试验,结果表明:该柔嫩艾美耳球虫致病力较强,半数致死量为7.52×104个/只。     

中草药在鸡球虫病中的应用研究进展

<正>鸡球虫病是造成现代养禽业经济损失最大的寄生虫病之一[1],为了更好地控制该病发生,世界各国对鸡球虫病都进行了深入细致的研究。目前,虽然国内外学者对球虫疫苗的研究有了一定进展,但仍存在诸多问题,短期内还难以推广应     

山西舍饲羊群羊痘病毒的分离和实验室诊断

为了分离舍饲羊群羊痘病毒并对其进行诊断研究,对山西舍饲羊群疑似羊痘发病羊的口唇痘状痴皮组织提取物进行细胞培养以扩增病毒,对病变细胞用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察,然后进行动物回归实验和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA).结果表明:扩增的病毒经连续培养3代后出现规律性细胞病变;用常规HE染色可见细胞中出现由于病毒感染产生的包涵体;动物回归实验表明已分离的病毒可导致动物发生痘性病变:用ELISA 检测出现显色反应,表明样品中存在与酶标抗体发生反应的病毒抗原,样品病毒浓度为6.835 IU·L-1.实验成功诊断并分离出山西舍饲羊群羊痘,为后续研究提供了理论基础.     

消毒药对柔嫩艾美尔球虫卵囊的抑杀作用

本实验就几种常用消毒药对柔嫩艾美尔球虫卵囊的杀灭作用进行了实验观察,现报告如下:1实验材料1.1实验动物1日龄海兰白公雏(韩村种鸡场提供),饲养于经严格消毒的铁丝鸡笼内,给予连续人工光照和标准日粮(不含抗球虫药),环境、饲料、用具等均严格消毒。1.2实验试剂及使用浓度氢氧     

基于电参数与神经网络的奶牛乳腺炎检测方法

通过准确测量奶牛新鲜乳汁的温度、电导率、电容和乳汁中的体细胞含量,建立了温度、电导率、电容为输入,体细胞数为输出的四层BP神经网络模型。并将结果与没有电容参数的网络模型结果进行比较。结果表明:电容参数的加入使检测精度有显著提高,验证集奶牛乳腺炎等级的正确检出率达到100%。     

日本血吸虫SjELAV-like 1的克隆、表达及功能分析

【目的】克隆和表达日本血吸虫胚胎致死异常视觉基因1（SjELAV-like 1）,分析其在日本血吸虫体内的表达情况及定位,探究该基因对日本血吸虫形态和生殖发育的影响。【方法】利用RACE技术扩增5′/3′末端,获得SjELAV-like 1基因序列提交至NCBI,Gene Bank登录号：MG515727,构建该序列的重组表达质粒 pET28-SjELAV-like 1,并在大肠杆菌BL21中利用IPTG诱导表达,收集不同诱导时间的菌体,SDS-PAGE法进行蛋白电泳。利用His镍柱亲和层析法纯化大量表达所得重组蛋白,用纯化重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用于Western blotting 分析虫体内该天然蛋白的免疫原性,以及间接免疫荧光检测该蛋白在虫体内的分布情况。小鼠腹部贴片法感染日本血虫尾蚴,收集虫体不同发育阶段混合和合抱分开的雌、雄虫体,以单钉螺逸出的尾蚴感染小鼠获得25 d单性雌、雄虫体,通过实时定量 PCR分析该基因的表达情况。通过尾静脉注射小干扰RNA（siRNA）于感染小鼠体内,使该基因表达沉默,筛选最佳干扰效果的siRNA,用于长期RNA干扰（RNAi）试验,分析其对日本血吸虫雌虫产卵及卵胚孵化的影响。利用扫描电镜和透射电镜观察RNAi对虫体体被结构及雌、雄虫生殖器官的影响。【结果】获得的1 797 bp的SjELAV-like 1基因序列含有poly A尾,其中编码序列为1 533 bp,编码510个氨基酸。重组质粒pET28-SjELAV-like 1在诱导4 h时表达量最高,主要以包涵体的形式存在,利用纯化蛋白获得了优质多抗,获得的重组蛋白具有良好的免疫原性,经分析发现SjELAV-like 1蛋白主要分布在虫体体被。RT-qPCR 发现SjELAV-like 1在不同时期雌、雄虫体内均有表达,在雄虫体内表达稳定,但在雌虫体内随着发育成熟其表达水平呈下降趋势;在不同感染状态的雌、雄虫体内,与正常发育雌虫相比,该基因在发育阻遏雌虫体内高表达,而在雄虫体内无明显差异。RNAi试验中,与NC组相比,长期干扰组小鼠肝减卵率、雌虫对肝卵贡献减少率和卵胚减孵化率分别为58.27%（P＜0.05）、40.59%（P＜0.01）和74.58%（P＜0.01）;电镜观察发现,干扰组虫体体被结构改变,雄虫体表粘附的泡状物消失,立体的褶脊结构塌陷,整齐排列的条索状皮脊变的疏松,网状结构消失,雌虫体壁表面组织间隙增宽,分布于其上的体棘减少、变钝,雄虫精母细胞数目减少,其内的染色质减少,细胞肿大,细胞间质增宽,雌虫卵黄细胞中卵黄球减少,其中包含的卵黄滴也减少,内质网肿大,皮质颗粒排列散乱。【结论】成功克隆和表达了在日本血吸虫发育阻遏雌虫中高表达的部分SjELAV-like 1基因序列,且发现该基因主要在虫体体被表达。该基因沉默使肝脏荷卵数、雌虫对肝卵贡献率和卵胚孵化率均显著降低,并改变虫体体被结构,抑制生殖腺的正常发育,提示该基因对日本血吸虫的生殖发育有重要的作用。     

柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对磺胺类抗菌药的耐药性研究

目的:检测柔嫩艾美耳早熟耐药株对4种磺胺类抗菌药的耐药性,为鸡球虫疫苗的临床应用提供依据。方法:采用鸡体实验法,以最适抗球虫活性百分数(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)四项指标综合判定接种5×104个柔嫩艾美耳早熟耐药株对消炎磺、磺胺嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺氯吡嗪钠4种磺胺类抗菌药的耐药性情况。结果:磺胺嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺氯吡嗪钠的POAA均小于界定值50%,为阳性,只有消炎磺的POAA值大于50%,为阴性。四种药物的RLS和ROP值均为阳性。消炎磺、三甲氧苄氨嘧啶的ACI值为160-179,具有中等抗药能力,磺胺嘧啶、磺胺氯吡嗪钠的ACI值低于160,为阳性,具有完全的耐药性。结论:柔嫩艾美耳早熟耐药株对消炎磺、三甲氧苄氨嘧啶具有中等程度的抗药性,磺胺嘧啶、磺胺氯吡嗪钠具有完全的耐药性。     

日本血吸虫ELAV-like 2基因的克隆、表达及功能分析

日本血吸虫成熟雌虫所产虫卵是造成宿主病理损害及疾病再传播的根源,因此从控制雌虫生殖发育入手对控制血吸虫病的发生具有重要意义。本研究通过5′-RACE和3′-RACE获得了在发育阻遏雌虫中高表达的SjELAV-like 2基因的全长序列,并对其进行克隆和表达,制备了相应的多克隆抗体,Western blotting分析结果表明该蛋白质具有良好的反应原性;实时定量分析发现该基因在血吸虫童虫时期高表达,成熟后趋于稳定,且在雌虫体内的表达量显著高于同时期合抱雄虫;该基因在雄虫体内的表达量基本恒定;免疫组化研究发现,在血吸虫成虫雌虫该蛋白主要定位于虫体体被。利用RNA干扰技术对该基因的生物学功能进行了初步研究,RT-qPCR结果显示,RNAi可明显抑制SjELAV-like 2基因的表达;对该基因表达的长期干扰导致受干扰虫体产卵能力及卵胚孵化能力的下降,统计分析发现,干扰组宿主每克肝荷卵减少达39.67%(P0.01),虫卵的卵胚孵化减少达75.56%(P0.01)。扫描电镜观察发现,与NC组相比,siRNA干扰组虫体体被上泡状突出物明显增多,这些结果表明SjELAV-like 2基因对日本血吸虫生长发育具有重要影响。