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【目的】创造块茎高支链淀粉或纯支链淀粉含量的转基因马铃薯材料。【方法】以构建的由Patatin启动子驱动的pBI121g-PgABI为干扰表达载体,采用农杆菌介导法转化马铃薯优良品种甘农薯2号。用PCR、Southern blotting、半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR技术检测转基因植株,并对转基因植株的微型薯进行淀粉含量的测定。【结果】通过农杆菌介导法获得10个转基因株系。PCR和Southern杂交结果证明,目的基因已被整合到基因组中,通过半定量RT-PCR分析表明,转基因株系中GBSSI的表达均受到明显抑制,且在6个转基因株系中检测不到mRNA的表达。进一步通过real-time PCR分析表明,转基因株系中GBSSI的mRNA沉默效率为66.27%—93.53%;转基因株系微型薯的淀粉含量也发生明显变化,其支链淀粉含量高达90.16%—98.84%,比对照高出10.31%—20.92%。转基因株系GBSSI的mRNA沉默效率与支链淀粉含量呈显著正相关(r=0.937,P<0.01)。【结论】采用ihpRNAi技术可有效抑制马铃薯块茎中内源GBSSI表达,获得高支链或纯支链淀粉含量的马铃薯材料。 相似文献
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冠气温差能够反映植物在干旱胁迫下的生理适应性。本研究以耐旱型马铃薯品种冀张薯8号和陇薯10号; 干旱敏感型品种大西洋和夏波蒂, 以及从秘鲁国际马铃薯中心引进的10份具有不同耐旱性的种质资源为材料, 在半干旱和半湿润2种环境下对其植株表型性状(株高、叶面积、叶鲜重、植被覆盖指数)、光合生理指标(光合速率、气孔导度、蒸腾速率、叶绿素)以及冠气温差进行测定和耐旱性评价。结果表明, 所测性状指标中, 冠气温差、蒸腾速率和气孔导度对干旱胁迫最敏感; 冠气温差在不同供试马铃薯材料之间及干湿两种环境之间均表现出极显著差异性; 冠气温差的耐旱系数与植株表型性状及光合生理指标的耐旱系数均呈极显著正相关; 利用红外热成像技术监测冠气温差, 是进行马铃薯耐旱性评价的有效手段, 可为马铃薯耐旱育种研究提供理论依据。 相似文献
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以马铃薯普通栽培种“甘农薯2号”块茎为材料,利用RNA提取试剂盒提取总RNA,通过RT-PCR技术和DNA序列测定分析,证实获得了马铃薯颗粒结合淀粉合成酶(GBSSI)基因的cDNA序列。该cDNA全长1824bp,包括607个氨基酸和1个终止密码子序列,且与原序列(accessionnumberX58453)同源性为99.78%,但与其他科植物GBSS基因的同源性较低,注册该基因到GenBank中,注册号为EU403426。利用生物信息学相关软件分析预测GBSSI基因cDNA序列编码的蛋白质功能和结构,结果发现,该蛋白与其他15种植物GBSS蛋白一样,具有3个完全保守区域,并具许多重要功能位点,且与农杆菌淀粉合成酶具有相似三级结构模型,表明该蛋白具淀粉合成功能。 相似文献
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四个引自国际马铃薯中心的马铃薯试管苗耐盐性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】通过研究不同体积分数NaCl胁迫下不同马铃薯试管苗材料生长生理指标及离子分布的影响,为马铃薯耐盐性育种提供理论依据.【方法】以引自国际马铃薯中心的4个马铃薯试管苗种质资源CIP391047.34(简称A)、CIP385499.11(简称B)、CIP394611.112(简称C)和CIP391919.3(简称D)为材料,采用组织培养技术研究不同体积分数(0、0.3%、0.6%、0.9%、1.2%)NaCl处理对马铃薯试管苗生长生理指标及Na~+和K~+含量的影响,比较其耐盐性.【结果】不同体积分数NaCl处理下,4个引进马铃薯试管苗材料的新叶数、根数、最长根长、茎叶鲜质量、根鲜质量和根冠比均较对照显著下降,其中0.3%的NaCl逆境对试管苗根数影响较大,4个材料的处理与对照间均差异显著,且B材料下降幅度最小、D材料下降幅度最大;0.9%NaCl逆境下试管苗根或叶的形成及生长严重抑制,1.2%NaCl逆境下试管苗生长基本停滞,且C和D材料没有根的发生.盐逆境下,4个材料试管苗的脯氨酸含量、丙二醛含量及Na~+/K~+的变化趋势一致,均随盐体积分数的升高而上升,0.9%NaCl处理下,D材料的脯氨酸含量、丙二醛含量及Na~+/K~+(茎叶)分别是B材料的2.67、1.80和1.87倍.【结论】本研究选用的种质材料可耐受盐害体积分数为≤0.6%,B材料最耐盐、D材料对盐最敏感,脯氨酸可作为胁迫伤害的评价指标. 相似文献
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马铃薯块茎颗粒结合型淀粉合酶基因的克隆及其RNAi载体的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
GBSSI是马铃薯块茎中控制直链淀粉合成的关键酶, 为培育高支链淀粉含量或纯支链淀粉含量的转基因马铃薯材料, 根据GenBank登录号X58453设计特异引物, 采用RT-PCR技术获得马铃薯块茎GBSSI相似基因, 利用生物信息学相关软件分析, 预测GBSSI相似基因cDNA序列编码的蛋白质结构和功能。结果表明, 克隆的GBSSI相似基因与报道的GBSSI基因序列相似性达到99.78%, 其开放阅读框长1 824 bp, 编码607个氨基酸, 具有许多重要功能位点;三级结构预测结果表明该蛋白具有淀粉合成功能, 基因序列已注册到GenBank, 序列登录号为EU403426。以此基因CDS内542 bp的靶标序列作为干扰区段, 扩增GBSSI的正反向基因片段, 并引入237 bp的内含子序列, 构建由Patatin启动子驱动的具有“正义基因片段gbss A-内含子VP1-ABI3-like protein-反义基因片段gbss B”的植物干扰表达载体pBI121g-PgABI, 将为淀粉合成的进一步研究和高支链淀粉含量或纯支链淀粉含量的马铃薯品种的培育奠定基础。 相似文献