喷施赤霉素和硝酸钾对烤烟上部叶同步成熟和烤后质量的影响

【目的】为解决烤烟上部叶一次性采烤中出现的成熟状态差异大的问题,探究赤霉素、硝酸钾喷施浓度及喷施时间对烤烟中川208上部6片烟叶同步成熟、烤后烟叶质量的影响,以期为促进烤烟一次性采收提供理论依据。【方法】采用响应曲面优化设计中的Box-Behnken法,对赤霉素(0、15、30μmol/L)和硝酸钾(0、0.5、1.0 g/L)的浓度以及打顶后喷施时间(20、25、30 d)进行三因素三水平设计,共16个处理。测定从烟株顶部从上往下第1～3片烟叶(记为T_上)和从上往下第4～6片烟叶(记为T_下)成熟相关的生理指标,并计算各处理指标的同步成熟值,作为衡量同步成熟的依据,该值越小,说明同步成熟状态越好。【结果】各处理的同步成熟值明显小于对照,烤后烟叶外观质量、化学成分总分高于对照,以打顶后25 d喷施15μmol/L赤霉素和0.5 g/L硝酸钾(T2、T5、T9、T16)处理的同步成熟状态最好,外观质量总分、化学成分总分最高;响应曲面结果显示赤霉素、硝酸钾对综合得分具有极显著影响,且影响曲线相似,喷施时间对综合得分同样具有极显著性影响。模型验证及优...     

分离中的社会认同

个体有专属于自己的意志,希望与他人的分化带来物质的好处与行动的自由。然而个体却始终无法摆脱由于和群体分离带来的偏离焦虑,归属感是人类的基本需要和动机,人们通过不断地加入群体来回归集体,达到社会认同。本文主要对近年来社会认同的有关研究进行梳理。     

猪瘟病毒EO基因在CHO细胞中的表达

将EGFPEO融合基因插入哺乳动物细胞表达载体pCI-dhfr中,构建重组质粒pCI-EGFPE0.将重组质粒转染CHO(dhfr'),在荧光显微镜下观察到少数细胞呈现绿色荧光,表明转染成功.通过MTX加压筛选后,在荧光显微镜下观察到多数细胞呈现强绿色荧光,表明重组融合蛋白EGFPE0在CHO细胞中得到大量表达.高效表达重组融合蛋白细胞克隆的获得为进一步大量制备可溶性的猪瘟病毒E0糖蛋白、制备其单抗筛选抗原表位及研究E0蛋白的生物学功能奠定基础.     

三黄鸡CD8α/βcDNA克隆与表达及其多克隆抗体的制备

为了获得鸡CD8α/β蛋白及其多克隆抗体,进一步研究其结构与功能,本实验从三黄鸡cDNA文库中克隆了其CD8α/β胞外区片段,构建了pQE30/ChCD8α/β原核表达系统,并经诱导表达、亲和层析纯化,获得了纯化的重组蛋白(rChCD8α/β),然后用rChCD8α/β分别免疫Balb/c小鼠制备了其多克隆抗体。结果表明:本实验克隆的ChCD8α长483 bp、编码161个氨基酸、可在E.coliJM109中高效表达,蛋白质分子质量为24.0 ku,表达量占菌体蛋白量的25.0%,由该蛋白质所制备的多克隆抗体抗rChCD8α的ELISA效价为1∶1 024 000;另外,克隆的ChCD8β长447 bp,编码149个氨基酸,蛋白质的分子质量为18.5 ku,表达量占菌体蛋白量的20.0%,抗rChCD8β多克隆抗体ELISA效价为1∶64 000。本实验所得鸡CD8α/β的多克隆抗体将用于四聚体研究。     

虹鳟Ⅰ型干扰素基因的表达与纯化

为了获得能用于抗虹鳟(Rainbow trout,学名,Oncorhynchus mykiss)病毒性疾病生物制剂开发的高纯度Ⅰ型干扰素(rtIFN3)蛋白,克隆了虹鳟rtIFN3,构建了pET21 a-rtIFN3/BL21 (DE3)原核表达与发酵系,并对rtIFN3进行了表达.重组的rtIFN3分子质量约18.5 ku,以包涵体形式表达,表达量占全菌蛋白量的16％.随后,提取2L发酵瓶的包涵体蛋白,经变性与复性后,再经分子筛和阴离子交换层析进行纯化.纯化后,rtIFN3 SDS-PAGE电泳结果表明蛋白纯度达98％,复性率为3％.本研究获得的高纯度复性蛋白为生物制剂的研制提供了材料.     

鸡白细胞介素-18基因的原核表达及多克隆抗血清的制备

将编码鸡白细胞介素-18(interleukin-18，IL-18)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pPROEXTMHT中，构建重组质粒并进行确证性序列测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌DH5α并用IPTG于37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在，目的蛋白表达量占菌体蛋白的30％。SDS-PAGE和Western blot分析显示，表达的鸡IL-18融合蛋白相对分子质量约为23000。包涵体被6mol／L盐酸胍裂解后，通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡IL-18融合蛋白及其纯化产物经3次肌肉注射豚鼠，制备豚鼠抗鸡IL-18多克隆抗血清，并用琼脂扩散试验多克隆抗血清进行了证明。本试验成功的原核表达、纯化了鸡IL-18融合蛋白，并制备了抗鸡IL-18多克隆抗血清，为下一阶段关于鸡IL-18重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础。     

拉布拉多犬和德国牧羊犬干扰素alpha基因克隆及测序

本研究采用ＰＣＲ技术扩增和克隆了拉布拉多犬和德国牧羊犬的扰素基因ａｌｐｈａ ＩＰＮ。测序结果显示拉布拉多犬和德国牧羊犬的ａｌｐｈａ ＩＦＮ基因序列一致,全长均为５１３个核苷酸,共编码１７０个氨基酸。两种犬ａｌｐｈａＩＦＮ蛋白分子量均为１８．５０４ＫＤ。结果也揭示了犬属动物的ａｌｐｈａＩＦＮ基因十分保守,公丰在０．３％的变异。     

禽流感病毒T细胞表位与体外重建鸡MHC Ⅰ类分子结合试验

为探讨体外重建的MHCⅠ复合体BF2-linker-β2m鉴定病毒抗原肽系统能否在体外结合抗原多肽，以及不同类的MHCⅠ类分子结合相同和不同抗原多肽表位能力的差异，本研究采用人工合成的禽流感病毒的3条多肽，猪口蹄疫病毒的2条多肽，以及来源于草鱼呼肠孤病毒的2条多肽分别与4类体外重建的串联鸡MHCⅠ类分子复合体BF2-linker-β2m进行了体外结合试验。BF2-linker-β2m与不同的病毒抗原九肽按照1：10的摩尔比进行混合，作用后取反应混合物离心除去未与MHCⅠ类分子结合的抗原多肽；然后取BF2-linker-β2m分别与抗原多肽形成的复合体，利用酸洗法将结合的多肽白MHCⅠ类分子的抗原多肽结合槽中洗脱，洗脱后的蛋白和多肽混合物离心收集洗脱的多肽溶液，随后利用C18柱对洗脱的多肽进行去盐、脱酸处理；将多肽样品冻干，用基质溶解后直接点样进行一级质谱（MS）和二级质谱（MSMS）测定，结果表明，3类体外重建的BF2-linker-β2m可与禽流感病毒多肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV结合，而不与禽流感病毒多肽TIGECPKYV以及猪口蹄疫病毒和草鱼呼肠孤病毒的4条多肽结合。证实由于MHCⅠ类分子的多态性导致复等位基因的MHCⅠ类分子结合病毒抗原表位的能力存在差异；病毒的T细胞抗原表位是MHCⅠ类分子限制性的；KILTIYSTV和LLLAIVsLV是禽流感病毒的候选表位。     

水稻白叶枯病抗性基因的鉴定、定位、克隆与育种应用

水稻白叶枯病是由黄单胞杆菌水稻变种(Xanthomonas oryzae pv.oryzae Xoo)引起的细菌性病害,发掘、鉴定和利用新抗源是控制水稻白叶枯病的有效途径.白叶枯抗性基因定位和克隆,使分子标记辅助选择和转基因技术在白叶枯抗病育种中发挥了重大作用,也使人们在分子水平对白叶枯病抗性机制有了深刻认识.文章综述了白叶枯病抗性基因定位,克隆以及在育种方面的应用,并对如何利用抗病育种减轻白叶枯病的危害提出了几点建议.     

鸡Ⅱ型干扰素存在亚型

采用RT－PCR法从惠阳胡须鸡克隆了Ⅱ型干扰素基因（ChIFNγ2)。ChIFNγ2是含19个氨基酸的信号肽和145个氨基酸的成熟蛋白，与已报道的鸡Ⅱ型干扰素基因（ChIFNγ)长度一致，核苷酸和氨基酸同源性分别为97％和92．7％；有12处氨基酸发生点变异。ChIFNγ2与禽类IFNγ和哺乳动物IFNγ在氨基酸水平上同源性分别为62．2％－92．7％和26．5％－31．8％。1980年国际干扰素命名委员会建议，在一特定的干扰素型别内，氨基酸序列或组成方面有差异时可确定为亚型。根据这些规定，惠阳胡须鸡ChIFNγ2可被定为一种新亚型的鸡Ⅱ型干扰素。即Ⅱ型干扰素中存在亚型。