刚地弓形虫P30（SAGl）基因的克隆与表达

目的 构建弓形虫P30基因表达载体并获得重组表达蛋白。方法 将弓形虫P30基因的开读框用PCR扩增，NcoⅠ和Hind Ⅲ酶切后，与同样酶切的表达质粒pET-30a( )经T4连接酶连接，然后转化到DH5a中。菌液经PCR扩增和质粒酶切及基因测序鉴定后，将阳性重组质粒转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中，经IPTG诱导，表达产物用SDSPAGE和Western blot进行鉴定。结果 扩增的P30基因片段为750bp，重组质粒诱导表达产物分子质量单位为30ku，与理论值相符。Western blot确认重组质粒表达蛋白与小鼠抗弓形虫单克隆抗体(P30McAb)发生特异性反应。结论 成功构建重组体并获得弓形虫主要表面抗原P30的高效表达产物，为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。     

32P与光敏生物素标记DNA探针在疟疾监测中的应用研究

本文报告了应用３２Ｐ和光敏生物素标记克隆的ｐＢＦ４ＤＮＡ，作为探针，以斑点杂交试验，检测海南、云南和山东省的血样。两种标记探检测结果与镜检的符合率分别为恶性疟９８．６％和９６．２％；间日疟９１．６％和８６．７％；正常人血９５．２％和１００％；并可从多种疟原虫标本中，特异地检出恶性疟原虫，显示探针具有恶生疟原虫的种特异性。检测的敏感度为８４个原虫／μｌ血，检测原虫ＤＮＡ可达１０ｐｇ水平。表明探针具有良好的实用性。     

人包皮成纤维细胞酵母双杂交均一化cDNA文库的构建北大核心CSCD

目的构建人包皮成纤维细胞(HFF)酵母双杂交均一化cDNA文库,为研究弓形虫与宿主细胞间的相互作用及其入侵机制奠定基础。方法复苏、培养HFF细胞并提取细胞总RNA,采用SMART和LD-PCR合成ds cDNA,对其进行均一化处理后,利用SfiI酶切,酶切后的ds cDNA连接pGADT7-SfiI三阅读框表达载体,连接产物转化至大肠埃希菌HST08,构建cDNA初级文库,进行库容检测和插入片段的PCR鉴定。提取文库质粒转化至酵母Y187中,制备HFF细胞Y187酵母文库。结果 HFF细胞总RNA的A260/A280值为2.02,1.5%琼脂糖凝胶电泳检测到28S和18S核糖体特异性条带且二者亮度之比为2∶1,提取的RNA完整、质量良好。3种读码框库容分别为1.4×10~6 CFU/ml、1.8×10~6 CFU/ml和2.0×10~6 CFU/ml,重组率为99%。cDNA文库外源基因插入片段长度700～2 000bp。制备的HFF细胞酵母cDNA文库库容量为2.5×10~7 CFU/ml。结论构建的HFF细胞酵母双杂交cDNA文库具有较高的库容量和重组率,可用于弓形虫蛋白与HFF宿主细胞互作蛋白的筛选。     

恶性疟血涂片见大滋养体1例

本文报告1例非洲输入性非典型恶性疟病例, 其血涂片显微镜下可见较多大滋养体期原虫, 部分虫体可见棕黄色 色素颗粒, 呈点状或团块状, 虫体形态与间日疟原虫、 卵形疟原虫相似, 经PCR基因检测确诊为恶性疟。非重症恶性疟病 例外周血中出现大滋养体期原虫较为罕见, 镜检时应注意与其他疟原虫鉴别。     

微小隐孢子虫重组BCG疫苗免疫保护作用观察

目的研究微小隐孢子虫重组BCG疫苗的免疫保护作用。方法 100只BALB/c小鼠随机分为4组,BCG组免疫BCG,载体组免疫含PMV262质粒的BCG(BCG-PMV262),实验组免疫rBCG-CP15/60-23(各组均为每鼠尾静脉注射0.1mL,接种物浓度均为106细菌/mL),对照组每鼠尾静脉注射0.05mol/LpH7.2PBS0.1mL。免疫后,每组分别随机选6只小鼠检测其血清抗体和脾细胞培养液中的CD4+、CD8+以及细胞因子水平,各组剩余小鼠进行攻击实验。结果 rBCG-CP15/60-23能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,小鼠血清抗体水平于免疫后2周逐渐升高,与BCG组和载体组差异显著(P均<0.01);实验组CD4+T细胞增殖明显,CD4+/CD8+比值显著升高(P<0.05);脾细胞培养液中白细胞介素2(IL-2)、IL-12、γ干扰素(IFN-γ)均有不同程度的升高,实验组IFN-γ和IL-2含量与对照组和BCG组差异显著(P均<0.05),IL-12水平组间差异无统计学意义(P>0.05)。各组小鼠经隐孢子虫卵囊攻击感染后,实验组小鼠卵囊排泄数量减少40%～60%,初始排卵囊时间延长2d,卵囊持续排出时间缩短5d;组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论微小隐孢子虫重组BCG-CP15/60-23疫苗免疫小鼠后,能产生良好的免疫保护作用。     

2012年山东省疟疾疫情流行病学特征分析

目的 目的 分析2012年山东省疟疾疫情及流行特征, 为该省消除疟疾提供参考依据。方法 方法 从中国疾病预防控制中 心疾病监测信息报告管理系统收集山东省疟疾个案流行病学调查资料, 采用描述流行病学方法分析2012年山东省疟疾流 行病学特征。结果 结果 2012年山东省共报告疟疾93例, 年发病率0.097/10万, 比2011年下降19.83%。报告的93例疟疾病例 均为输入性病例, 较2011年的97例下降了4.12%; 首年度实现了无本地感染病例。报告病例较多的为济宁、 青岛和威海3 市, 病例数占全省总病例数的62.37% （58/93）。93.55%的疟疾病例为非洲输入性病例, 大部分来自赤道几内亚、 尼日利亚、 安哥拉。首次报告输入性卵形疟3例。结论 结论 2012年山东省无本地疟疾病例报告, 但输入性疟疾防控形势不容乐观。需 继续加强疫情管理, 加强专业人员培训及工作督导, 加强流动人口管理、 宣传和检测, 探索多部门协调机制。     

218例少年儿童发中锌铁钙含量分析

目的 :了解少年儿童营养状况及目前发中锌、铁、钙含量 ,选择客观、科学地补充微 (常 )量元素的技术和方法。方法 :用极谱分析法的模拟单扫描方式 (LSP法 )对发样进行Zn、Fe、Ca含量测定 ,并对有关数据进行统计分析。结果 :在 2 18例有一定临床症状、体征的亚健康状态的研究对象中 ,Ca含量明显偏低者最多 94例( 4 3 12 % ) ,多出现夜间哭闹、盗汗、鸡胸、出牙迟、磨牙等 ;其次为Fe含量明显偏低者 89例 ( 4 0 83% ) ,多出现贫血、偏食、厌食、营养不良等 ;Zn含量明显偏低者最少 35例 ( 16 0 6 % ) ,多出现体质弱、发育差、异嗜、精力不集中等 ;受检者发样中Zn、Fe、Ca的含量均为 0～ 2岁组较高 ,3～ 5岁组最低 ,6～ 15岁组随年龄增长逐年明显升高。结论 :当前少年儿童普遍缺乏微量元素 ,应科学地补充微 (常 )量元素 ,提高营养水平。     

恶性疟原虫质粒DNA探针在蚊媒监测中的应用研究

利用克隆的质粒型ＤＮＡ片段用光敏生物素标记后作探针．以核酸分子杂交手段．检验蚊体内的恶性疟原虫．结果表明可从多种模拟感染蚊虫标本中特异地测出恶性疟原虫感染蚊。将一组蚊研磨后集体检测时，可测出２５只蚊虫中有１只感染者或含１００个子孢子的蚊虫，这极利于大样本的快速处理．而单个蚊虫直接任于硝酸纤维素膜上检测，更适于子孢子的精确估计。既能测新鲜蚊，又能测干燥蚊标本．