耐拉米夫定乙肝病毒变异株的人工构建及其限制性片段长度多态性分析

目的　建立简便易行的筛检常见的耐拉米夫定乙肝病毒变异株的方法。方法通过PCR定向点突变 ,构建最常见的耐拉米夫定乙肝病毒变异株 (YMDD变异株 ) ,并建立相应的错配PCR结合限制性片段长度多态性分析 (RFLP)检测此变异株。结果PCR成功引入点突变 ,构建了YMDD变异株的克隆 ,同时错配PCR结合限制性片段长度多态性分析可有效区分YMDD变异株和HBV野毒株。结论采用PCR的方法可诱导定向点突变 ,错配PCR结合限制性片段长度多态性分析可用于筛检临床常见的耐拉米夫定乙肝病毒变异株 (YMDD变异株 ) ,为临床监测提供了一种很好的模式。     

慢性乙型肝炎用干扰素治疗的Th1/Th2应答

目的　探讨干扰素α的疗效是否与调节Th1/Th2细胞因子的表达有关 ,并以此作为预测干扰素α疗效指标的可能性。方法　采用双抗体夹心法和逆转录PCR方法 ,对应用干扰素治疗的 2 3例慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞中Th1/Th2细胞因子的表达水平进行动态检测。结果　与正常对照组比较 ,慢性乙肝患者外周血淋巴细胞培养上清液中的IFN γ水平较低 ,但无明显差异 ;IL 4水平则升高 ,差异有显著性。其外周血淋巴细胞中的mRNA表达水平亦如此。与治疗前比较 ,干扰素α治疗后 3和 6个月 ,在完全应答的患者中 ,IL 4水平下降 ;而IFN γ水平在 6个月时升高 ,差异均有显著性。结论　 (1)慢性乙肝患者的外周血淋巴细胞中细胞因子表达可能以Th2类占优势。 (2 )慢性乙型肝炎患者的外周血淋巴细胞中Th1/Th2细胞因子的表达水平与干扰素α的疗效密切相关。 (3)通过检测Th1/Th2细胞因子的变化 ,可以预测患者对干扰素α治疗的反应 ,对及时判断干扰素α治疗效果有一定作用。     

慢性HBsAg无症状携带者186例血清HBV-DNA分子杂交的初步结果

以~(32)P-HBV-DNA作为探针,与待检血清中提取的DNA作分子杂交试验,检测186例慢性HBsAg无症状携带者血清,结果血清HBV-DNA与HBe系统密切相关,在62例HBeAg阳性中有51例HBV-DNA阳性(82.2％),在抗-HBe阳性中也有个别HBV-DNA阳性。另外,HBeAg P/N值与HBV-DNA呈正相关,HBeAg P/N值在8.1以上,HBV-DNA阳性率95.0％,P/N值<5.0只有12.5％阳性。 以分子杂交试验检测的HBV-DNA,是血清中HBV存在的更为直接的证据,可用以判定慢性HBsAg无症状携带者在体内病毒增殖情况。     

错配PCR-RFLP检测乙型肝炎病毒X基因/C基因启动子变异

设计错配PCR-限制性片段长度多态性分析（PCR－RFLP）检测中国HBV每株C基因启动子（BCP）区第2个AT丰富区的一对点突变；核苷酸（nt）1762的碱基由A→T和1764的碱基由G→A变异。结果发现在32例慢性HBV感染者中BCP变异者有10例，总检出率为31．2％．提示在我国HBV毒株BCP区这一联合点突变较常见．PCR－RFLP技术与序列分析结合，对于研究这一新发现的热点变异与临床的关系具有重要的实用价值．     

HepG2和HepG2.2.15细胞对一些凋亡刺激的不同耐受性

目的阐明ＨＢＶ对感染细胞凋亡的影响。方法在ＨｅｐＧ２及其转染ＨＢＶ的２．２．１５细胞培养中，加ＭＴＶ、ＡｃｔＤ或去血清培养，以ＦＣＭ检测细胞凋亡率。结果ＨｅＧ２．２．２．１５细胞加ＭＴＸ后２４ｈ和４８ｈ凋亡率分别为１０．８％和１３．３％，加ＡｃｔＤ后分别为１６．８％和３７．７％，去血清后第４天及第６天分别为１３．２％和１４．８％：而ＨｅｐＧ２细胞加ＭＴＸ后２４ｈ和４８ｈ凋亡率则为１２．６％和６５．３％，加ＡｃｔＤ后分别为４４．５％和８９．７％，去血清后第４天和第６天凋亡率为１９．８％和２８．８％。确认在这些条件下ＨｅｐＧ２．２．１５细胞较ＨｅｐＧ２细胞耐受凋亡。结论ＨＢＶ可能抑制肝癌细胞凋亡。     

“小三阳”感染，不能掉以轻心

“小三阳”乙肝病毒感染者有两类，其性质、病情、处理和后果完全不相同。     

新型无包膜DNA病毒恒河猴实验性感染的组织嗜性研究

目的：探讨恒河猴实验感染新型无包膜DNA病毒（TTV）的组织嗜性。方法：实验感染的恒河猴在病毒血症期间杀死5只，取组织，用聚合酶链反应（PCR）产物进行病毒半定量，并用原位杂交、负义探针斑点杂交和杂交／核酸保护试验，检查复制型病毒DNA分子。结果：肝、外周血单个核细胞（PBMC）和血清病毒含量（电泳带密度）依次为50．1％、31．0％和18．9％，相对比为2．65：1．64：1．00。肝、脾、胃、小肠各段及其淋巴结、PBMC、结肠和血清均可检出病毒，但正链病毒DNA（假定的病毒复制中间体），只稳定存在于肝、脾、小肠和淋巴样细胞中。结论：这一病毒具肝、小肠和淋巴样细胞嗜性，可解释其多途径传播。     

IFN-γ和TNF-α对乙型肝炎病毒转录后调节机制的影响研究

目的探讨IFN-γ和TNF-α对乙型肝炎病毒转录后调节机制的影响.方法在体外构建含有HPRE片段的pDM138质粒(含有CAT报告基因),应用脂质体介导方法转染HepG2细胞,观察细胞因子对重组质粒载体CAT报告基因活性表达的影响,CAT基因的活性的检测采用ELISA检测试剂盒.结果成功构建了含有HPRE片段的重组质粒载体.转染重组质粒的HepG2细胞CAT活性表达明显增强,而转染空载体的HepG2细胞仅有本底表达,分别为896.5±213.6 和36.7±11.3 pg/ml.IFN-γ和TNF-α对转染重组质粒的HepG2细胞CAT活性表达的影响均具有浓度依赖性,而对空载体CAT活性的表达无影响.转染重组质粒的HepG2细胞在未加入细胞因子时,其CAT表达活性为896.5±213.6 pg/ml;与IFN-γ、TNF-α及IFN-γ+TNF-α孵育后,其CAT表达活性分别为324.4±56.8, 395.8±82.3, 175.3±35.6 pg/ml,与未加入时比较, t=5.19,4.39,6.68,P<0.01,差异有显著性.结论 IFN-γ和TNF-α可能通过抑制HPRE的功能,调控乙型肝炎病毒基因的表达.     

199例血液透析病人中乙肝病毒感染调查

对199例血液透析病人与98例慢性肾脏疾病病人、98例接受输血的内科病人和100例一般内科住院病人作了乙型肝炎病毒感染的比较,其中60例透析病人作了一年多的随访。结果发现:透析病人、内科输血病人、肾脏疾病病人和一般内科住院病人的乙型肝炎病毒累积感染率分别为78.4%、76.5%、62.2%和62.0%,透析病人的乙型肝炎病毒感染率与一般内科住院病人和肾脏疾病病人比较有极显著性差异(P<0.005),而与输血内科病人比较相差不显著(P>0.1);60名随访透析病人的乙型肝炎病毒感染率随透析时间延长而增高;输血是形成透析室乙型肝炎病毒感染的主要原因。